富馬酸亞鐵對虹鱒幼魚生長性能、血液生化指標(biāo)及微量元素含量的影響

馮德智 張利民 王際英 李寶山 馬晶晶 蔣錦坤 張德瑞 姜柯君

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306;2.山東省海洋水產(chǎn)研究所，煙臺 264006)

鐵是維持機(jī)體正常生理功能，保證血紅蛋白(Hb)、肌紅蛋白、細(xì)胞色素和很多酶系統(tǒng)正常功能的必需微量元素。鐵還參與氧的運(yùn)輸、DNA合成及電子傳遞等一系列生化過程[1]。飼料中添加一定量的鐵可以提高棉籽粕替代魚粉的比例，降低肝臟中棉酚的含量[2-3]。魚類從水和餌料中都可獲得所需的鐵，但自然水體中可溶性鐵濃度很低，無法滿足魚體正常需求，所以餌料是魚類鐵的主要來源[4-5]。研究證明，飼料中缺鐵可導(dǎo)致魚類生長減緩，飼料利用率和存活率降低，組織鐵含量下降[6-10]。飼料中鐵含量過高會造成脂肪的氧化和酸敗，二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)及生育酚損失，影響飼料的穩(wěn)定性[11-12];此外，鐵含量過高會影響抗壞血酸的消化吸收[4]，也可產(chǎn)生超氧化物陰離子進(jìn)而產(chǎn)生有毒性的羥基[13]且能引起魚體的潰爛[14]。有機(jī)形式的礦物元素比無機(jī)形式的礦物元素有更高的生物利用率[15]。大西洋鮭(Salmo salar L.)上的研究表明，血紅素鐵利用率顯著高于單質(zhì)鐵和硫酸亞鐵[4]。在鯉魚(Cyprinus carpio)的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，富馬酸亞鐵比硫酸亞鐵更能提高鯉魚生長性能和抗病力[16]。不同價(jià)態(tài)的鐵在同一種動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)出不同的生物利用率[10]。腸道黏膜是鐵吸收的主要部位[17]，且主要以二價(jià)鐵的形式吸收[18]。羅非魚(Oreochromis niloticus×O.aureus)的研究中發(fā)現(xiàn)，檸檬酸鐵是硫酸亞鐵效率的1/2[10]，因此，本試驗(yàn)選擇有機(jī)形式的二價(jià)鐵富馬酸亞鐵作為添加鐵源。飼料中添加鐵對虹鱒(Oncorhynchus mykiss)的影響已有相關(guān)報(bào)道[11，18]，但側(cè)重于鐵作為強(qiáng)還原劑對飼料穩(wěn)定性的影響和鐵對虹鱒生理調(diào)節(jié)的影響，虹鱒鐵需要量研究尚未見報(bào)道。虹鱒飼料中鐵的添加量通常是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來添加[11]，并無科學(xué)指導(dǎo)，仍需試驗(yàn)確定虹鱒準(zhǔn)確的鐵需要量[18]。本試驗(yàn)通過在飼料中添加不同含量富馬酸亞鐵，研究鐵對虹鱒生長、血液生化指標(biāo)和微量元素的影響，進(jìn)而確定虹鱒幼魚鐵的需要量，以期為虹鱒配合飼料的制作和鐵代謝的生理生化研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼料

選擇體質(zhì)健壯、體重(89.2±0.2)g的虹鱒幼魚360尾，隨機(jī)分成6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚，以酪蛋白和明膠為蛋白質(zhì)源，魚油為脂肪源，配制粗蛋白質(zhì)含量為42.48%、粗脂肪含量為18.50%的基礎(chǔ)飼料。以富馬酸亞鐵(C4H2FeO4)作為鐵源，實(shí)測純度99%，分別在每千克基礎(chǔ)飼料中添 加 0、60.71、121.43、242.86、485.71 和1 457.14 mg富馬酸亞鐵(含鐵 0、20、40、80、160和480 mg)，以富馬酸亞鐵替代相同質(zhì)量的羧甲基纖維素鈉，配制成6種精制試驗(yàn)飼料，依次為D0、D20、D40、D80、D160 和 D480組，D0 組為對照組。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。經(jīng)原子吸收分光光度計(jì)(AA800型，PerkinElmerTM)測得飼料中實(shí)際鐵含量分別為 62.60、79.50、99.60、139.30、215.20和538.40 mg/kg。配制飼料時(shí)，所有原料粉碎過80目篩，逐級擴(kuò)大混勻后經(jīng)螺旋擠壓機(jī)加工成直徑4 mm的硬顆粒飼料，經(jīng)70℃烘干后放于陰涼干燥處保存、備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在山東省海洋水產(chǎn)研究所淡水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)開始前，虹鱒幼魚暫養(yǎng)30 d，攝食基礎(chǔ)飼料，待其完全適應(yīng)精制飼料和試驗(yàn)條件后，選擇體質(zhì)健壯、體重(89.2±0.2)g的虹鱒幼魚，分別放養(yǎng)于18個(gè)圓柱形玻璃鋼養(yǎng)殖桶中(直徑60 cm，高80 cm，水深50 cm)。養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)60 d，每天投喂2次(08:00，16:30)，日投喂量為體重的1.5% ～2.0%，投喂結(jié)束30 min后從系統(tǒng)自帶的排水口將殘餌排出，計(jì)算殘餌量。試驗(yàn)期間控制水溫(14.5±0.5)℃，溶氧＞8 mg/L，氨氮＜0.4 mg/L。

1.3 樣品收集

生長試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，稱每桶魚總重，計(jì)算增重率。用間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(MS-222)麻醉后，隨機(jī)從每桶中取14尾魚，稱體重，量體長，其中2尾作全魚用于微量元素測定，剩余12尾尾靜脈采血，用于收集血清和制備全血。取血后的魚分離內(nèi)臟、肝胰臟、消化道后稱重，計(jì)算肝體比和臟體比，并取背肌用于微量元素測定。整個(gè)操作在冰盤中進(jìn)行，采樣完畢，將樣品放入-70℃的超低溫冰箱中保存，待測。解剖后的魚體放入微波爐中加熱分離脊椎骨，用超純水沖洗后，105℃烘干2 h，烘干后的脊椎骨樣品粉碎后以乙醚抽提12 h去除脂肪并再次烘干，用于微量元素含量的測定。

1.4 測定指標(biāo)

增重率(WGR，%)=[(Wt-W0)/W0]×100;

飼料系數(shù)(FCR)=F/(Wt-W0);

肝體比(HSI，%)=(肝臟質(zhì)量/Wt)×100;

臟體比(VSI，%)=(內(nèi)臟質(zhì)量/W)t×100;

肥滿度(CF，%)=(體重/體長3)×100;

存活率(SR，%)=(成活尾數(shù)/總尾數(shù))×100。

式中:W0為試驗(yàn)初魚體重量(g)，Wt為試驗(yàn)?zāi)~體重量(g)，F(xiàn)為攝食干飼料重(g)，d為養(yǎng)殖天數(shù)。

紅細(xì)胞數(shù)量(RBC)采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，血細(xì)胞比容(Hct)用微量血細(xì)胞比容法，血紅蛋白、溶菌酶(LZM)和過氧化氫酶(CAT)均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測定，鐵、鋅和銅含量先用微波消解儀(ETHOST)消解，再用原子吸收光譜儀(AA800型，PerkinElmerTM)測定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，當(dāng)處理之間差異顯著(P＜0.05)時(shí)，用Duncan氏檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較分析，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。血紅蛋白及肝臟鐵含量與飼料鐵水平之間的相關(guān)關(guān)系均采用折線回歸分析法。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) %

2 結(jié)果

2.1 飼料鐵水平對虹鱒生長性能的影響

由表2可見，飼料中不同的鐵水平對虹鱒幼魚的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)、存活率、肝體比、臟體比和肥滿度均無顯著影響(P＞0.05)。

2.2 飼料鐵水平對虹鱒血液指標(biāo)的影響

由表3可見，隨著飼料中鐵含量的增加，血紅蛋白和紅細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)先上升后平穩(wěn)的趨勢，D40、D80、D160和 D480組顯著高于 D0和 D20組(P＜0.05)，而4組之間差異不顯著(P＞0.05)。各組間血細(xì)胞比容沒有顯著差異(P＞0.05)。以血紅蛋白為參考指標(biāo)，通過折線模型回歸分析，虹鱒幼魚鐵需要量為99.8 mg/kg飼料(圖1)。

表2 飼料鐵水平對虹鱒生長性能和飼料利用的影響Table2 Effects of dietary iron level on growth performance and feed utilization of rainbow trout(n=3)

表3 飼料鐵水平對虹鱒血液指標(biāo)的影響Table3 Effects of dietary iron level on blood parameters of rainbow trout(n=3)

圖1 飼料鐵水平對虹鱒血紅蛋白含量的影響Fig.1 Effects of dietary iron level on hemoglobin content of rainbow trout

2.3 飼料鐵水平對虹鱒全魚及組織中鐵、鋅和銅含量的影響

由表4可見，全魚鐵含量隨著飼料中鐵水平的升高呈上升趨勢。脊椎骨和肌肉鐵含量隨著飼料中鐵水平的升高而逐漸升高，D0和D20組鐵含量顯著低于其他各組(P＜0.05)，而兩者之間無顯著差異(P＞0.05)。肝臟鐵含量隨著飼料中鐵水平的增加呈現(xiàn)先上升后平穩(wěn)的趨勢，D40、D80、D160和D480組顯著高于D0和D20組(P＜0.05)，而4組之間差異不顯著(P＞0.05)。以肝臟鐵為參考指標(biāo)，采用折線回歸分析可得，虹鱒幼魚鐵需要量為100.4 mg/kg飼料(圖2)。

飼料鐵水平對全魚鋅含量影響不顯著(P＞0.05)，但D0組脊椎骨和肌肉鋅含量顯著高于其他各組(P＜0.05)。D0和D20組肝臟鋅含量顯著高于 D40、D80、D160和 D480組(P ＜0.05)，而兩者之間差異不顯著(P＞0.05)。

全魚銅含量隨著飼料中鐵水平的升高呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。飼料鐵水平對脊椎骨銅含量影響不顯著(P＞0.05)。肌肉銅含量隨著鐵水平的升高出現(xiàn)先上升后平穩(wěn)的趨勢，在D40組達(dá)到平臺，D0組顯著低于其他各組(P＜0.05)。

表4 飼料鐵水平對虹鱒全魚和組織鐵、鋅和銅含量的影響Table4 Effects of dietary iron level on contents of iron，zinc and copper of whole body and tissues of rainbow trout(n=3) mg/kg

圖2 飼料鐵水平對虹鱒肝臟鐵含量的影響Fig.2 Effects of dietary iron level on hepatic iron content of rainbow trout

2.4 飼料鐵水平對血清溶菌酶和過氧化氫酶活性的影響

由表5可見，D0組溶菌酶活性顯著低于D20、D40、D80和 D160組(P＜0.05)，但與 D480組差異不顯著(P＞0.05)。過氧化氫酶活性隨著鐵添加量的增加出現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在D40組達(dá)到最大(P＜0.05)。

3 討論

3.1 飼料鐵水平對虹鱒生長性能的影響

本試驗(yàn)研究表明，飼料中不同鐵添加量對虹鱒幼魚的增重率、特定生長率、飼料效率、和存活率等無顯著影響，這與金頭鯛(Sparusaurata)[19]、大西洋鮭[4，20]、溪紅點(diǎn)鮭(Salvelinus fontinalis)[21]、鯉魚[22]、真鯛(Chrysophrys major)[23]和南美白對蝦(Penaeus vannamei)[24]等的研究結(jié)果相一致，Rigos等[19]認(rèn)為不能用生長性能來作為評價(jià)金頭鯛飼料鐵添加量的標(biāo)準(zhǔn)，Andersen等[20]指出生長性能并不完全適宜用于評價(jià)礦物元素的需要量。然而，對 石 斑 魚(Epinephelus coioides)[7]、羅 非魚[10]、中華鱉(Pelodiscus sinensis)[25-26]、斑點(diǎn)叉尾(Ictalurus punctatus)[6，27]、建 鯉 (Cyprinus carpio var.Jian)[28]、鱸 魚 (Lateolabrax japonicus)[29]、大黃魚(Pseudosciaena crocea R.)[29]和軍曹魚(Rachycentron canadum)[30]的研究均顯示未添加鐵飼料組出現(xiàn)魚類生長抑制現(xiàn)象，其中增重率或特定生長率在羅非魚[10]、中華鱉[26]、鱸魚[29]和大黃魚[29]中用于評價(jià)鐵需要量。產(chǎn)生以上不同結(jié)果的原因可能是基礎(chǔ)飼料組鐵含量已經(jīng)滿足魚類生長的需求，也可能是鐵對魚類生長具有一定的種屬特異性。試驗(yàn)魚的大小、投喂次數(shù)、投喂環(huán)境等諸多因素也會造成上述不同結(jié)果。有研究指出，斑點(diǎn)叉尾鮰存活率在飼喂缺鐵飼料達(dá)13 周以上時(shí)明顯下降[8，31]，而本試驗(yàn)期為 60 d，虹鱒生長無顯著性差異可能與試驗(yàn)周期較短有關(guān)，具體關(guān)系還有待進(jìn)一步確認(rèn)。

表5 飼料鐵水平對虹鱒血清溶菌酶和過氧化氫酶活性的影響Table5 Effects of dietary iron level on activities of serum lysozyme and catalase of rainbow trout

3.2 飼料鐵水平對虹鱒血液學(xué)指標(biāo)的影響

血液指標(biāo)是通常被用來檢測魚類是否缺鐵的重要指標(biāo)。飼料中鐵水平過低會造成貧血，檢測貧血的重要指標(biāo)是血紅蛋白[4]。本試驗(yàn)血紅蛋白和紅細(xì)胞數(shù)量隨著飼料鐵水平的升高呈現(xiàn)先上升后平穩(wěn)的趨勢，說明基礎(chǔ)飼料中鐵含量偏低，難以維持血液指標(biāo)的正常，還需要向基礎(chǔ)飼料中額外添加鐵，這與斑點(diǎn)叉尾[6]、真鯛[9，23]、羅非魚[10]、大西洋鮭[20]和中華鱉[25-26]的研究結(jié)果類似。以血紅蛋白作為評價(jià)指標(biāo)，通過折線模型分析得出虹鱒幼魚鐵需要量為99.8 mg/kg，這與大西洋鮭(60 ～100 mg/kg)[20]、鱸魚(95.2 mg/kg)[29]和大黃魚(101.2 mg/kg)[29]鐵需要量相吻合，高于斑點(diǎn)叉尾(30 mg/kg)[6]的鐵需要量，但低于真鯛(150 mg/kg)[23]、中華鱉(266 ～ 325 mg/kg)[25]、羅非魚(150 mg/kg)[10]和建鯉(147.4 mg/kg)[28]的鐵需要量，這可能與魚體種類和大小等因素有關(guān)。飼料中添加不同價(jià)態(tài)或劑型的鐵源也是鐵需要量出現(xiàn)差異的重要原因，大西洋鮭對單質(zhì)鐵需要量高于硫酸亞鐵，對硫酸亞鐵需要量高于血紅素鐵[4]，真鯛對檸檬酸鐵的需要量高于氯化亞鐵和氯化鐵[9]，羅非魚對檸檬酸鐵的需要量高于硫酸亞鐵[10]。

3.3 飼料鐵水平對虹鱒全魚及組織中鐵、鋅和銅含量的影響

全魚鐵含量隨著飼料中鐵水平的升高呈上升趨勢。D0和D20組全魚鐵含量顯著低于D40、D80和D160組，說明D0和D20組飼料鐵水平可能已經(jīng)不足以應(yīng)對機(jī)體對鐵的需求，需要?jiǎng)佑蒙眢w原先儲備的鐵來滿足機(jī)體正常的生理功能[29]，因此造成鐵含量的降低。飼料鐵水平偏低的D0和D20組全魚鐵含量明顯降低，與大西洋鮭[4]和石斑魚[7]的研究結(jié)果相一致。D480組全魚鐵含量繼續(xù)升高，顯著高于其他各飼料組，可能是吸收的鐵在各組織間轉(zhuǎn)移的結(jié)果。Carriquiriborde等[18]在研究鐵代謝時(shí)發(fā)現(xiàn)，提高飼料鐵水平會促進(jìn)組織中鐵的積累，尤其引起胃、腸道和血液中鐵水平的提高。雖然肝臟作為鐵儲存器官，但過多的鐵會轉(zhuǎn)移到胃和腸道中，造成高鐵飼料組腸道鐵含量是正常組的13倍之多，全魚鐵含量是對照組鐵含量的3.7倍。

肝臟是魚類儲存鐵的主要器官，隨著飼料中鐵添加量的增加而逐漸升高[32-33]。肝臟中鐵含量已經(jīng)廣泛用于評價(jià)鐵需要量，在石斑魚[7]、羅非魚[10]和中華鱉[25-26]中均有相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)肝臟鐵含量呈現(xiàn)先上升后平穩(wěn)的趨勢，符合折線模型應(yīng)用條件，因此用折線模型回歸分析得出虹鱒幼魚鐵需要量為100.4 mg/kg，與用血紅蛋白作為評價(jià)指標(biāo)時(shí)得出的結(jié)果相近，與石斑魚(100 mg/kg)[7]的研究結(jié)果也類似。

飼料鐵水平的改變對其他金屬元素的代謝有明顯的影響[34]。鐵與鋅都是二價(jià)離子，在腸道內(nèi)競爭性吸收，并占用部分共同的轉(zhuǎn)運(yùn)通道[35]。食用缺鋅或高鐵的食物都會出現(xiàn)可循環(huán)鋅水平降低[36]。Carriquiriborde 等[18]指出低鐵飼料組肌肉鋅水平在第4周出現(xiàn)上升。Ogino等[37]研究虹鱒鋅需要量時(shí)發(fā)現(xiàn)，不額外添加鋅飼料組全魚、脊椎骨、腸道和肝臟鐵水平明顯高于添加鋅飼料組。本試驗(yàn)中D0組脊椎骨和肌肉鋅含量明顯高于其他各組，D0和D20組肝臟鋅含量也顯著高于其他各組，說明鐵與鋅是拮抗關(guān)系，與前人研究結(jié)果相一致。

銅作為造血反應(yīng)的促媒，催化鐵合成血紅蛋白和幫助生成紅細(xì)胞。銅也參與鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)，參與生成銅藍(lán)蛋白(又稱亞鐵氧化酶)，可以將二價(jià)鐵氧化為三價(jià)鐵結(jié)合到去鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白上合成轉(zhuǎn)鐵蛋白[38]。Lanno 等[39]指出隨著飼料中銅添加量的增加，肝臟中銅和鐵水平都相應(yīng)的增加。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)隨著飼料中鐵水平的增加，全魚和肌肉中銅含量也顯著增加，可能是鐵水平增加需要參與轉(zhuǎn)運(yùn)鐵的銅(如銅藍(lán)蛋白)也相應(yīng)增加的緣故。然而，Ye等[7]發(fā)現(xiàn)飼料鐵水平對石斑魚肝臟中銅含量并沒有顯著影響，Conrad等[40]報(bào)道二價(jià)鐵和三價(jià)鐵都不共用銅的運(yùn)輸通道，但是Gunshin等[36]指出DCT1(一種金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體)可以共同轉(zhuǎn)運(yùn)鐵和銅。綜上所述，鐵與銅的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

3.4 飼料鐵水平對虹鱒血清溶菌酶和過氧化氫酶活性的影響

溶菌酶是一項(xiàng)非特異性免疫指標(biāo)，可以降低微生物病菌的活力，裂解細(xì)胞壁上的肽聚糖，造成病菌微生物的溶解，提高魚體的抗感染能力。研究指出，一定程度上血清中溶菌酶活性變化與白細(xì)胞數(shù)目變化相一致，白細(xì)胞數(shù)目多溶菌酶活性就強(qiáng)，二者呈正相關(guān)[41]。Hoepelman 等[42]指出鐵可以修復(fù)白細(xì)胞多形核粒細(xì)胞，所以適當(dāng)?shù)蔫F水平會提高溶菌酶活性。本試驗(yàn)中D0組溶菌酶活力顯著低于D20、D40、D80和D160組，說明隨著飼料鐵水平的增加溶菌酶活性提升，這與美國紅魚(Sciaenops ocellatus)[43]的研究結(jié)果一致。在斑點(diǎn)叉尾鮰飼料中額外添加180 mg/kg鐵，斑點(diǎn)叉尾死亡率提高[44]。本試驗(yàn)D480組溶菌酶活性出現(xiàn)略微的下降，但與添加鐵試驗(yàn)組差異不顯著，可能鐵水平過高會提高微生物病菌感染的風(fēng)險(xiǎn)[45]。

過氧化氫酶能催化過氧化氫產(chǎn)生氧氣(O2)和水(H2O)，是細(xì)胞抗氧化防御體系的重要組成部分[33]。鐵是保持過氧化氫酶活性必不可少的輔助因子[29]。隨著飼料鐵水平的提高，過氧化氫酶呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，與牙鲆(Paralichthys olivaceus)[46]、大黃魚和鱸魚[29]的研究結(jié)果一致。有研究表明，缺鐵性貧血組氧化物活性顯著高于正常組，抗氧化活性和過氧化氫酶活性顯著低于正常組，在補(bǔ)充鐵后各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)正常[47]，本試驗(yàn)中D0、D20和D40組過氧化氫酶活性隨著飼料鐵水平的升高逐漸升高，與前人結(jié)果一致。抗壞血酸在鐵代謝中作為還原劑保證二價(jià)鐵的高效吸收和利用[31]。有研究指出，飼料鐵水平的提高會導(dǎo)致體內(nèi)維生素C含量明顯下降[4]，同時(shí)還有研究表明維生素C含量低的飼料組血清過氧化氫酶活性明顯降低[48]，維生素C利用率的不同也會造成過氧化氫酶活性的差異[33]，所以本試驗(yàn)中過氧化氫酶在D40～D480組出現(xiàn)下降現(xiàn)象可能是飼料中鐵水平的升高致使體內(nèi)維生素C含量下降或利用率降低造成過氧化氫酶活性下降，具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

①飼料中添加富馬酸亞鐵對虹鱒幼魚生長性能無顯著影響，但適量添加可以提高血紅蛋白、血細(xì)胞比容和紅細(xì)胞數(shù)量，保證全魚和組織中鐵、鋅和銅含量處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)，提高血清溶菌酶和過氧化氫酶活性，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

②本試驗(yàn)條件下，以血紅蛋白和肝臟鐵含量為評價(jià)指標(biāo)，虹鱒幼魚對飼料中鐵需要量分別為99.8和100.4 mg/kg。

[1]ANDREW T M，DALNA B，GLADYS O，et al.An iron-regulated ferric reductase associated with the absorption of dietary iron[J].Science，2001，291(2):1755-1759.

[2]LIM S J，LEE K J.Partial replacement of fish meal by cottonseed meal and soybean meal with iron and phytase supplementation for parrot fish Oplegnathus fasciatus[J].Aquaculture，2009，290:283-289.

[3]LIM S J，LEE K J.Supplemental iron and phosphorus increase dietary inclusion of cottonseed and soybean meal in olive flounder(Paralichthys olivaceus)[J].Aquaculture Nutrition，2008，14(5):423-430.

[4]ANDERSEN F，LORENTZEN M，WAAGB? R，et al.Bioavailability and interactions with other micronutrients of three dietary iron sources in Atlantic salmon，Salmo salar，smolts[J].Aquaculture Nutrition，1997(3):239-246.

[5]National Research Council.Nutrient requirement of fish[S].Washington，D.C.:National Academy Press，1993.

[6]GATLIN D M，WILSON R P.Characterization of iron deficiency and the dietary iron requirement of fingerling channel catfish[J].Aquaculture，1986，52:191-198.

[7]YE C X，LIU Y J，MAI K S，et al.Effect of dietary iron supplement on growth，haematology and microelements of juvenile grouper，Epinephelus coioides[J].Aquaculture Nutrition，2007，13:471-477.

[8]LIM C，KLESIUS P H.Responses of channel catfish(Ictalurus punctatus)fed iron-deficient and replete diets to Edwardsiella ictaluri challenge[J].Aquaculture，1997，157:83-93.

[9]SAKAMOTO S，YONE Y.Availabilities of three ironcompounds as dietary iron sources for red sea bream[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1979，45(2):231-235.

[10]SHIAU S Y，SU L W.Ferric citrate is half as effective as ferrous sulfate in meeting the iron requirement of juvenile tilapia，Oreochromis niloticus× O.aureus[J].The Journal of Nutrition，2003，133:483-488.

[11]DESJARDINS L M，HICKS B D，HILTON J W.Iron catalyzed oxidation of trout diets and its effect on the growth and physiological response of rainbow trout[J].Fish Physiology and Biochemistry，1987，3(4):173-182.

[12]SUTTON J，BALFRY S，HIGGS D，et al.Impact of iron-catalyzed dietary lipid peroxidation on growth performance，general health and flesh proximate and fatty acid composition of Atlantic salmon(Salmo salar L.)reared in seawater[J].Aquaculture，2006，257:534-557.

[13]SILVA D M，ASKWITH C C，KAPLAN J.Molecular mechanisms of iron uptake in eukaryotes[J].Physiological Reviews，1996，76:31-47.

[14]SALTE R，R?RVIK K A，REED E，et al.Winter ulcers of the skin in Atlantic salmon，Salmo salar L.pathogenesis and possible aetiology[J].Journal of Fish Diseases，1994，17:661-665.

[15]RIDER S A，DAVIES S J，JHA A N，et al.Bioavailability of co-supplemented organic and inorganic zinc and selenium sources in a white fishmeal-based rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)diet[J].Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2010，94:99-110.

[16]張杰，張錦秀，李書偉，等.不同鐵源對鯉魚生長性能和死亡率的影響[J].中國畜牧獸醫(yī)，2010，37(8):18-20.

[17]TAKESHI W，VISWANATH K，SHUICHI S.Trace minerals in fish nutrition[J].Aquaculture，1997，151:185-207.

[18]CARRIQUIRIBORDE P，HANDY R D，DAVIES S J.Physiological modulation of iron metabolism in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)fed low and high iron diets[J].Journal of Experimental Biology，2004，207:75-86.

[19]RIGOS G，SAMARTZIS A，HENRY M，et al.Effects of additive iron on growth，tissue distribution，haematology and immunology of gilthead sea bream，Sparus aurata[J].Aquacult Int，2010，18:1093-1104.

[20]ANDERSEN F，MAAGE A，JULSHAMN K.An estimation of dietary iron requirement of Atlantic salmon，Salmo salar L.，parr[J].Aquaculture Nutrition，1996，2:41-47.

[21]KAWATSU H.Studies on the anemia of fish:Ⅴ.dietary iron deficient anemia in brook trout，Salvelinus fontinalis[J].Bulletin of Freshwater Fish Research Laboratory，1972，22(1):59-67.

[22]SAKAMOTO S，YONE Y.Iron deficiency symptoms of carp[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1978，44(10):1157-1160.

[23]SAKAMOTO S，YONE Y.Requirement of red sea bream for dietary iron-Ⅱ[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1978，44(3):223-225.

[24]DAVIS D A，LAWRENCE A L.Evaluation of the dietary iron requirement of Penaeus vannamei[J].Journal of the World Aquaculture Society，1992，23(1):15-22.

[25]CHU J H，CHEN S M，HUANG C H.Effect of dietary iron concentrations on growth，hematological parameters，and lipid peroxidation of soft-shelled turtles，Pelodiscus sinensis[J].Aquaculture，2007，269:532-537.

[26]CHU J H，CHEN S M，HUANG C H.Growth，haematological parameters and tissue lipid peroxidation of soft-shelled turtles，Pelodiscus sinensis，fed diets supplemented with different levels of ferrous sulphate[J].Aquaculture Nutrition，2009，15(1):54-59.

[27]LIM C，SEALEY W M，KLESIUS P H.Iron methionine and iron sulfate as sources of dietary iron for channel catfish Lctalurus punctatus[J].Journal of the World Aquaculture Society，1996，27(3):290-296.

[28]LING J，F(xiàn)ENG L，LIU Y，et al.Effect of dietary iron levels on growth，body composition and intestinal enzyme activities of juvenile Jian carp(Cyprinus carpio var.Jian)[J].Aquaculture Nutrition，2010，16(6):616-624.

[29]張佳明.鱸魚(Lateolabrax japonicus)和大黃魚(Pseudosciaena crocea R.)微量元素——鋅、鐵的營養(yǎng)生理研究[D].碩士學(xué)位論文.青島:中國海洋大學(xué)，2007.

[30]喬永剛.軍曹魚微量元素鋅、鐵、銅營養(yǎng)生理的研究[D].碩士學(xué)位論文.青島:中國海洋大學(xué)，2007.

[31]LIM C，KLESIUS P H，LIM H，et al.Interaction between dietary levels of iron and vitamin C on growth，hematology，immune response and resistance of channel catfish(Ictalurus punctatus)to Edwardsiella icta-luri challenge[J].Aquaculture，2000，185:313-327.

[32]VANGEN B，HEMRE G I.Dietary carbohydrate，iron and zinc interactions in Atlantic salmon(Salmo salar)[J].Aquaculture，2003，219:597-611.

[33]ANDERSEN F，LYGREN B，MAAGE A，et al.Interaction between two dietary levels of iron and two forms of ascorbic acid and the effect on growth，antioxidant status and some non-specific immune parameters in Atlantic salmon(Salmo salar)smolts[J].Aquaculture，1998，161:437-451.

[34]GAMBLING L，DANZEISEN R，F(xiàn)OSSET C，et al.I-ron and copper interactions in development and the effect on pregnancy outcome[J].The Journal of Nutrition，2003，133:1554S-1556S.

[35]SOLOMONS N W.Competitive interaction of iron and zinc in the diet:consequences for human nutrition[J].The Journal of Nutrition，1986，116:927-935.

[36]GUNSHIN H，MCKENZIE B，BERGER U V，et al.Cloning and characterization of a mammalian protoncoupled metal-ion transporter[J].Nature，1997，388:482-488.

[37]OGINO C，YANG G Y.Requirement of rainbow trout for dietary zinc[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1978，44(9):1015-1018.

[38]GUDLAUG T，JAKOB K，SIGURLAUG S，et al.Copper，ceruloplasmin，superoxide dismutase and iron parameters in Parkinson’s disease[J].Pharmacology＆ Toxicology，1999，85:239-243.

[39]LANNO R P，SLINGER S J，HILTON J W.Maximum tolerable and toxicity levels of dietary copper in rainbow trout(Salmo gairdneri Richardson)[J].Aquaculture，1985，49:257-268.

[40]CONRAD M E，UMBREIT J N，MOORE E G，et al.Separate pathways for cellular uptake of ferric and ferrous iron[J].American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology，2000，279:767-774.

[41]MARJA M，ANTTI S.Changes in plasma lysozyme and blood leucocyte levels of hatchery-reared Atlantic Salmon(Salmo salar L.)and sea trout(Salmo trutta L.)during parr-smolt transformation[J].Aquaculture，1992，106:75-78.

[42]HOEPELMAN I M，JAARSMA E Y，VERHOEF J，et al.Effect of iron on polymorphonuclear granulocyte phagocytic capacity:role of oxidation state and effect of ascorbic acid[J].British Journal of Haematology，1988，70(4):495-500.

[43]周立斌，王安利，馬細(xì)蘭，等.飼料中鐵對美國紅魚(Sciaenops ocellatus)生長和免疫的影響[J].海洋與湖沼，2009，40(5):663-668.

[44]SEALEY W M，LIM C，KLESIUS P H.Influence of the dietary level of iron from iron methionin and iron sulfate on immune response and resistance of channel catfish to Edwardsiella ictaluri[J].Journal of the World Aquaculture Society，1997，28(2):142-149.

[45]WEINBERG E D.Iron depletion:a defense against intracellular infection and neoplasia[J].Life Sciences，1992，50:1289-1297.

[46]魏萬權(quán)，李愛杰，李德尚.飼料中添加鐵對牙鲆幼魚生長的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1999，23:100-103.

[47]YOO J H，MAENG H Y，SUN Y K，et al.Oxidative status in iron-deficiency anemia[J].Journal of Clinical Laboratory Analysis，2009，23(5):319-323.

[48]劉揚(yáng).維生案C與幼建鯉消化吸收能力及其抗氧化作用關(guān)系研究[D].博士學(xué)位論文.雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.