P16和Ki-67在宮頸鱗癌癌前病變中的表達及其診斷價值

崔芳瑜，李青，黃文斌

1. 南京迪安醫學檢測中心 病理室，江蘇 南京 210010；2. 南京市婦幼保健院 病理科，江蘇 南京 210000；3. 南京市第一醫院 病理科，江蘇 南京 210006

0 前言

宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，其中最常見的組織學類型是鱗狀細胞癌。已有的研究表明，宮頸鱗狀細胞癌是由高危型人類乳頭狀瘤病毒（HPV）感染所致，導致宮頸鱗狀上皮發生上皮內瘤變，并最終發展為浸潤性鱗狀細胞癌。本文應用免疫組化方法研究宮頸癌前病變中P16和Ki-67表達，探討它們在宮頸鱗狀上皮內瘤變診斷和分類中的價值。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

收集南京市第一醫院和南京市婦幼保健院2009年1～10月門診宮頸活檢病例51例，年齡28～49歲，平均43.7歲。51例宮頸活檢病例中慢性宮頸炎10例、低級別CIN16例、高級別CIN25例。所有標本均經10%福爾馬林液固定，常規石蠟包埋。

1.2 方法

采用免疫組化EnVision法。切片常規脫蠟，梯度酒精脫水，剩余步驟在自動免疫組化儀（Labvision）上進行。免疫組化具體染色步驟按照儀器操作說明書進行，抗原修復均采用高壓鍋高溫修復。鼠抗人單克隆抗體P16和Ki-67為Novocarstra公司產品，與檢測試劑盒均購于福州邁新生物公司。以已知陽性片分別作P16和Ki-67陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

P16表達于細胞核或胞核伴胞質，Ki-67定位于細胞核，見圖1～4。

圖1 P16在宮頸低級別CIN中的表達，EnVision法×200

圖2 P16在宮頸高級別CIN中的表達， EnVision法×100

圖3 Ki-67在宮頸低級別CIN中的表達，EnVision法×100

圖4 Ki-67在宮頸高級別CIN中的表達，EnVision法×200

P16根據陽性細胞分布而分為陰性、弱陽性（<25%）和強陽性（>25%）。Ki-67表達根據陽性細胞在上皮的分布而分為陰性、低表達（<1/3）、中等表達（1/3～2/3）和高表達（>2/3）。為了分析方便，我們將Ki-67為中等表達及以上者判為陽性，P16>25%作為陽性。

1.4 統計學處理

所有數據應用SPSS13.0統計軟件處理。各組資料的比較采用χ2檢驗和Fisher精確概率檢驗。

2 結果

2.1 宮頸各組病變中P16和Ki-67的表達

由表1可知，P16在慢性宮頸炎中表達為陰性或局灶性表達，而在低級別CIN中有4例表達陽性，高級別CIN中陽性表達者20例，陽性率分別為25%和80%。P16在高級別CIN中的表達明顯高于低級別CIN和慢性宮頸炎，差異有顯著性（χ2=12.159，P=0.000；P=0.000），而P16在低級別CIN和慢性宮頸炎中的陽性表達率沒有差異（P=0.136）。Ki-67在慢性宮頸炎中主要表達于基底細胞，隨著宮頸病變的加重，Ki-67陽性細胞分布向表面上移，高級別CIN均超過上皮1/3，Ki-67在高級別CIN中的陽性表達率明顯高于低級別CIN和慢性宮頸炎（χ2=41.000，P=0.000；P=0.000），而在低級別CIN和慢性宮頸炎中表達無差異（P=0.385）。

表1 宮頸各組病變中P16和Ki-67的表達

2.2 P16和Ki-67單個或聯用在區分低級別CIN和慢性宮頸炎的價值

由表2可知，P16在區分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性分別為25%和100%，Ki-67在區分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性分別為0%和90%，P16在區分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性雖然高于Ki-67，但差異無顯著性（P=0.101；P=1.000）。P16/Ki-67聯合檢測在區分LSIL和宮頸慢性炎的敏感性和特異性分別為25%和90%，敏感性與P16相當，但＞Ki-67，特異性與Ki-67一樣，但略＜P16。

表2 P16和Ki-67在區分慢性宮頸炎和低級別CIN的價值

2.3 P16和Ki-67單個或聯用在區分低級別CIN和高級別CIN的價值

從表3可以看出，P16在區分高級別CIN和低級別CIN中的敏感性和特異性分別為80%和75%，而Ki-67在區分高級別CIN和低級別CIN中的敏感性和特異性均為100%，雖然Ki-67＞P16，但差異無顯著性（P＞0.05）。P16和Ki-67聯合檢測對區分高級別和低級別CIN的敏感性和特異性分別為100%和75%，與P16和Ki-67單用沒有統計學差異（P＞0.05）。

表3 P16和Ki-67在區分高級別CIN和低級別CIN的價值

3 討論

宮頸癌是發展中國家最常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一，已有的研究表明宮頸癌主要是由高危型HPV導致宮頸鱗狀上皮發生異型增生并進而發展為浸潤性癌。研究顯示在宮頸癌發生過程中涉及到多種抑癌基因的失活或癌基因的激活。P16基因位于人染色體9p21上，是第一個發現的直接參與細胞周期調控的抑癌基因。正常情況下P16基因產物通過與CDK4/6結合抑制細胞周期進展，因而阻止了Rb基因的磷酸化和活化。P16在宮頸CIN診斷中的價值國內外已有較多研究，這些研究發現P16蛋白不僅在宮頸腫瘤性上皮細胞表達增加，而且與高危型HPV感染和CIN的程度密切相關[1-3]。我們的實驗結果發現慢性宮頸炎中P16不表達或散在表達，隨著宮頸上皮內瘤變的加重，P16陽性表達率增加，高級別CIN中P16蛋白陽性表達率可達到80%。國外一些研究顯示高級別CIN中P16陽性表達率近90～100%，但有些研究結果卻顯示有15～30%高級別CIN不表達P16[4]。這些結果的差異可能與P16抗體的克隆號和陽性判斷標準不一致有關。在人體其他組織器官惡性腫瘤中研究發現P16蛋白表達缺失或降低，在宮頸鱗狀上皮內瘤變和鱗狀細胞癌中異常表達可能是HPV E7導致Rb功能失活，繼發性的負反饋回路所致[5]。我們的研究結果也進一步證實了P16蛋白的檢測可有助于CIN診斷和分級。

Ki-67 的表達出現于除G0、G1早期以外的細胞周期中，并且有絲分裂后迅速降解或失去抗原決定簇，因此，被認為能較可靠全面地反映細胞群體增殖活性的客觀指標。研究表明，它與很多惡性腫瘤的發展、轉移和預后有關。國外多項研究發現正常情況下Ki-67表達于成熟宮頸鱗狀上皮的基底細胞和基底旁細胞，但隨著宮頸癌前病變的加重，Ki-67表達向上皮表面上移，Ki-67在鱗狀上皮上2/3層表達被認為提高了CIN診斷的特異性[6]。國內李曉玲等[7]研究結果發現Ki-67表達在宮頸良性病變中明顯低于惡性病變。本文的研究結果顯示Ki-67在慢性宮頸炎中主要表達于基底細胞，而在高級別CIN中Ki-67表達均超過上皮的1/3，也進一步表明Ki-67在宮頸CIN診斷中的價值。

本研究結果顯示P16在區分慢性宮頸炎和低級別CIN中的敏感性和特異性雖＞Ki-67，而在區分低級別與高級別CIN中，其敏感性和特異性均＜Ki-67，但差異均無顯著性，提示P16在宮頸CIN診斷中的價值與Ki-67基本相當。P16和Ki-67聯合檢測對慢性宮頸炎和低級別CIN的敏感性和P16一致，但＞Ki-67，其特異性雖＜P16，但和Ki-67相一致。同樣，在區分低級別與高級別CIN中P16和Ki-67聯合檢測的敏感性與Ki-67一致，＞P16，特異性與P16一樣，但＜Ki-67，但均未達到統計學意義，提示P16和Ki-67聯合檢測對慢性宮頸炎和低級別CIN、低級別CIN和高級別CIN的鑒別診斷與單用P16或Ki-67相同，可能與我們研究的病例數相對較少有關，尚需要積累更多的病例進行深入地研究。根據本文的實驗結果，結合國內外相關文獻的報道，我們認為P16聯合Ki-67檢測可有助于宮頸CIN的診斷和分級。

[1]Agoff SN,Lin P,Morihara J,et al.P16 (INK4a)expression correlates with degree of cervical neoplasia: a comparison with Ki-67 expression and detection of high-risk HPV types[J].Mod Pathol,2003,16(7):665-673.

[2]Keating JT,Cviko A,Riethdorf S,et al.Ki-67,cyclin E, and p16INK4 are complimentary surrogate biomarkers for human papilloma virus-related cervical neoplasia[J].Am J Surg Pathol,2001,25(7):884-891.

[3]Wang SS,Trunk M,Schiffman M,et al.Validation of p16INK4a as a marker of oncogenic human papillomavirus infection in cervical biopsies from a population-based cohort in Costa Rica[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2004,13(8):1355-1360.

[4]Branca M,Ciotti M,Santini D,et al.P16 (INK4A)expression is related to grade of cin and high-risk human papillomavirus but does not predict virus clearance after conization or disease outcome[J].Int J Gynecol Pathol,2004,23(4):354-365.

[5]Kalof AN,Cooper K.Our approach to squamous intraepithelial lesions of the uterine cervix[J].J Clin Pathol,2007,60(5):449-455.

[6]McCluggage WG,Buhidma M,Tang L,et al.Monoclonal antibody MIB1 in the assessment of cervical squamous intraepithelial lesions[J].Int J Gynecol Pathol,1996,15(2):131-136.

[7]李曉玲,鄧亞麗,董能慧.Ki-67抗原在不同宮頸病變中的表達和臨床意義[J].實用醫學雜志,2007,23(10):1501-1502.