西洋參干預(yù)胰島素抵抗大鼠活性部位的化學(xué)成分研究Ⅴ

李冀，馬育軒，葛鵬玲，楊炳友，尚廣巍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

西洋參(Panax quinquefolium L.)為五加科多年生草本植物，又名花旗參，與人參(P.ginseng C.A May.)同科同屬，根部入藥，原產(chǎn)于美國(guó)和加拿大，近年在我國(guó)引種成功。其味甘，微苦而涼，入肺腎經(jīng)，具補(bǔ)氣養(yǎng)陰，生津止渴之功［1－2］。

本課題組早期實(shí)驗(yàn)證明，西洋參60%乙醇洗脫部位為干預(yù)胰島素抵大鼠模型的活性部位［3－4］。本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)采用硅膠柱色譜及HPLC等分離技術(shù)與方法對(duì)該部位進(jìn)行分離，得3個(gè)單體化合物，并對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)作出鑒定，為進(jìn)一步篩選其有效成分及探討其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

超導(dǎo)核磁共振光譜儀采用Bruker－400型;TMS為內(nèi)標(biāo)，化學(xué)位移值以δ表示，重疊的信號(hào)用0表示，多重峰信號(hào)用m表示，偶合常數(shù)的單位均為Hz;半制備型色譜柱(Hypersil ODSⅡ(10μm，10mm ×250mm，大連依利特公司);制備型HPLC(Waters公司，Delta－600－2487型);ESI－MS(Finnigan MAT LCQ);分析型色譜柱(Hypersil ODSⅡ(5μm，4.6mm ×200mm，大連依利特公司);制備型色譜柱(Hypersil－ODSⅡ(10μm，20mm×300mm，大連依利特公司);滿層色譜用硅膠板(Silica gel60F254)和反相板(Rp－18)(公國(guó)Merck公司);硅膠(青島海洋化工廠、140～200目，200～300目);AB－8大孔吸附樹(shù)脂(南開(kāi)大學(xué)化工廠產(chǎn)品;化學(xué)試劑為分析純(天津試劑一廠);柱色譜用反相ODS(ODS－AM，日本YMC公司);顯色劑:10%的硫酸/乙醇溶液。

2 提取與分離

將西洋參的根部用70%EtOH回流提取后，回收EtOH，得到EtOH提取物。再將此提取物進(jìn)行AB－8型大孔樹(shù)脂柱色譜，依次分別用H2O、30%EtOH、60%EtOH、90%EtOH 洗脫，得到 XY －1、XY －2、XY －3 和XY－4四個(gè)部位。本課題組早期實(shí)驗(yàn)證明［2］，XY－3部分為有效部位。繼續(xù)采用硅膠柱色譜及HPLC等分離技術(shù)與方法對(duì)該部位進(jìn)行分離，得到3個(gè)單體化合物，并對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。

3 鑒定

Fig.1 Structures of compounds 1，2

3.1 化合物1化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定

化合物1為白色無(wú)定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反應(yīng)均成陽(yáng)性，化合物1的薄層水解后，經(jīng)檢識(shí)證明含阿拉伯糖和葡萄糖，因吡喃糖苷較呋喃糖苷難水解，提示C－20位連的兩種糖中阿拉伯糖為吡喃型。化合物1的正性 ESI－MS在 m/z 1 101處可見(jiàn)［M+Na］+離子峰，表明化合物1的分子量為1 078。綜合1H－NMR，13C－NMR譜等數(shù)據(jù)可推斷出化合物1的分子式為C53H90O22，計(jì)算不飽和度為9，推斷化合物1可能是三萜皂苷類。

化合物 1的1H －NMR(400MHZ，pyridine)譜，在高場(chǎng)區(qū) δ0.78(3H，s)、δ0.93(3H，s)、δ0.95(3H，s)、δ1.09(3H，s)、δ1.26(3H，s)、δ1.58(3H，s)、δ1.62(3H，s)、δ1.64(3H，s)處可見(jiàn)8 個(gè)歸屬于皂苷元上的角甲基單峰信號(hào)。在低場(chǎng)區(qū)δ5.53處可以觀察到烯氫質(zhì)子的信號(hào)。在 δ4.92(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.99(1H，d，J=7.2Hz)、δ5.13(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.38(1H，d，J=7.6Hz)處分別出現(xiàn)4個(gè)歸屬于葡萄糖的端基質(zhì)子信號(hào)。

結(jié)合化合物1的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波譜的綜合解析，對(duì)化合物1的13C－NMR譜的全部碳信號(hào)(見(jiàn)Table1.1)進(jìn)行了詳細(xì)的解析和歸屬。將化合物1的13C－NMR譜數(shù)據(jù)與化學(xué)結(jié)構(gòu)已知的化合物人參皂苷－20(S)Rb2相比較［5］，兩者基本一致。

綜合各種分析結(jié)果，化合物1被鑒定為3－O－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖基－20－O－β－D吡喃阿拉伯糖基－(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖基 －達(dá)瑪 －24－烯 －3β，12β，20S－三醇［3－O－β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucopyranosyl－20－O－β－D－arab－inopyranosyl－(1→6)－β－D－glucopyranosyl－dammar－24－ene－3β，12β，20S －triol］。化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn) Fig.1 。

3.2 化合物2化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定

化合物2為白色無(wú)定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反應(yīng)均成陽(yáng)性，化合物2的薄層水解后，經(jīng)檢識(shí)證明含D－葡萄糖和D－木糖。化合物2的正性 ESI－MS在 m/z 1 083.5處可見(jiàn)［M+Na］+離子峰，表明化合物2的分子量為1 060。綜合1H－NMR，13C－NMR譜等數(shù)據(jù)可推斷出化合物2的分子式為C53H88O21，計(jì)算不飽和度為10，推斷化合物2可能是三萜皂苷類。

化合物 2的1H －NMR(400MHZ，pyridine)譜，在高場(chǎng)區(qū) δ0.78(3H，s)、δ0.92(3H，s)、δ0.93(3H，s)、δ1.09(3H，s)、δ1.26(3H，s)、δ1.59(3H，s)、δ1.63(3H，s)、δ1.63(3H，s)處可見(jiàn)8 個(gè)歸屬于皂苷元上的角甲基單峰信號(hào)。在低場(chǎng)區(qū)δ5.52處可以觀察到烯氫質(zhì)子的信號(hào)。在 δ5.38(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.13(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.92(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.70(1H，d，J=11.4Hz)處分別出現(xiàn)4個(gè)歸屬于葡萄糖的端基質(zhì)子信號(hào)。

結(jié)合化合物2的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波譜的綜合解析，對(duì)化合物2的13C－NMR譜的全部碳信號(hào)(見(jiàn)Table1.1)進(jìn)行了詳細(xì)的解析和歸屬。將化合物2的13C－NMR譜數(shù)據(jù)與化學(xué)結(jié)構(gòu)已知的化合物人參皂苷－Rb3相比較［3］，兩者基本一致。

綜合各種分析結(jié)果，化合物2被鑒定為3－O－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖基－20－O－β－吡喃木糖基－(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖基 －達(dá)瑪 －24－烯 －3β，12β，20S－三醇［3－O－β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucopyranosyl－20－O－β－D－glucopyra－nosyl－(1→6)－β－D －xylopyranosyl－dammara－24－ene－3β，12β，20S －triol］。化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn) Fig.1 。

3.3 化合物3化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定

Fig.2 Structures of 3

化合物3為白色無(wú)定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反應(yīng)均成陽(yáng)性，化合物3的薄層水解后，經(jīng)檢識(shí)證明含D－葡萄糖。化合物3的正性ESI－MS在m/z986處可見(jiàn)［M+Na］+離子峰，表明化合物3的分子量為963。綜合1H－NMR，13C－NMR譜等數(shù)據(jù)可推斷出化合物3的分子式為C48H83O19，計(jì)算不飽和度為8，推斷化合物3可能是三萜皂苷類。

化合物 3的1H －NMR(400MHZ，pyridine)譜，在高場(chǎng)區(qū) δ0.78(3H，s)、δ0.92(3H，s)、δ1.08(3H，s)、δ1.31(3H，s)、δ1.54(3H，s)、δ1.62(3H，s)、δ1.63(3H，s)處可見(jiàn)7個(gè)歸屬于皂苷元上的角甲基單峰信號(hào)。在低場(chǎng)區(qū)δ5.57處可以觀察到烯氫質(zhì)子的信號(hào)。在 δ4.93(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.16(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.39(1H，d，J=7.6Hz)處分別出現(xiàn)3個(gè)歸屬于葡萄糖的端基質(zhì)子信號(hào)。

Tablel.1 13C － NMR data of 1，2，3(pyridine)

結(jié)合化合物3的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波譜的綜合解析，對(duì)化合物3的13C－NMR譜的全部碳信號(hào)(見(jiàn)Table1.1)進(jìn)行了詳細(xì)的解析和歸屬。將化合物3的13C－NMR譜數(shù)據(jù)與化學(xué)結(jié)構(gòu)已知的化合物Majoroside F1相比較［6］，兩者基本一致。

綜合各種分析結(jié)果，化合物3被鑒定為達(dá)瑪－25(26) － 烯 －3β，12β，20S，24ξ－ 四醇(20－O － β －D －吡喃葡萄糖基)－3－O－β－D－吡喃葡萄糖基(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖苷(dram－mar－25(26)－ene－3β，12β，20S，24ξ－ietraol－20－O － β －D －glucopyranosyl－(1→2)－β－gl－ucopyranoside)。化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn) Fig.2 。

［1］ 李冀，馬育軒，葛鵬玲，等.西洋參干預(yù)胰島素抵抗大鼠活性部位的化學(xué)成分研究Ⅱ［J］.中醫(yī)藥信息，2010，27(5):23 －26.

［2］ 李冀，馬育軒，葛鵬玲，等.西洋參干預(yù)胰島素抵抗大鼠活性部位的化學(xué)成分研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，37(6):68 －70.

［3］ 李冀，盛波，葛鵬玲，等.西洋參不同洗脫部位對(duì)胰島素抵抗大鼠脂代謝的影響［J］.中醫(yī)藥信息，2008，25(3):13－14.

［4］ 馬育軒，葛鵬玲，楊炳友，等.西洋參干預(yù)胰島素抵抗大鼠活性部位的化學(xué)成分研究Ⅳ［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(1):74 －76.

［5］ 王貴得，馬興元，紹春杰，等.國(guó)產(chǎn)西洋參葉化學(xué)陳分的研究—人參皂苷的分離鑒定［J］.中成藥，1994，41(2):33－34.

［6］ Ping Zhao，Yu － Qing Liu，ChongRen Yang.Minor Dammarane Saponins from Panax notoginseng ［J］.Phytochemistry，1996，4(5):1419－1425.