菊花、金銀花浸膏的提取工藝研究

朱煥容 黃曉丹 羅燕玉 黃卓蕓

廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司，廣東廣州 510450

菊花為菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥頭狀花序。金銀花為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花[1]。菊花和金銀花皆為國(guó)家批準(zhǔn)的既是食品又是藥品的物品，皆含有具有抗菌、抗病毒作用的綠原酸，兩者均有清熱解毒的功效[2]，在我國(guó)傳統(tǒng)食品如龜苓膏、涼茶中常常組合使用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，綠原酸具有多種生物活性，綠原酸可調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子（TNF-α）和干擾素（INF-α）， 發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[3]，綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化的作用[4-5]，對(duì)多種疾病的預(yù)防和治療具有作用，應(yīng)用前景較好[6]。

菊花、金銀花為本公司開(kāi)發(fā)的新產(chǎn)品菊花龜苓膏中的主要組成成分，現(xiàn)對(duì)菊花金銀花浸膏的提取工藝進(jìn)行研究，參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用正交試驗(yàn)法[7-8]，為菊花龜苓膏的生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1200 高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器。

1.2 試藥

綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：110756-200110，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供），流動(dòng)相用甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。菊花、金銀花均經(jīng)我公司食品質(zhì)量部鑒定，菊花為菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥頭狀花序；金銀花為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花。

2 方法與結(jié)果

2.1 菊花金銀花浸膏制備方法

采用傳統(tǒng)水提法，水提法是提取綠原酸較好的方法[9]。本實(shí)驗(yàn)采用3 因素3 水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素A提取時(shí)間分別為 1、1.5、2 h；因素 B 提取次數(shù)分別為 1、2、3 次；因素 C 醇沉濃度分別為63%、70%、75%。取同批菊花金銀花藥材9 份，每份50 g，按表1 設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，第1次加藥材量9 倍水，第2次加藥材量7 倍水，第3次加藥材量7 倍水，合并提取液，過(guò)濾，濃縮至相對(duì)密度為1.05，醇沉，取上清液過(guò)濾，上清液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.25，備用。

2.2 綠原酸含量測(cè)定方法[10]

2.2.1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.00 mg/mL）稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.02 g（精確至0.000 1 g）置于10.0 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，混勻（此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在4℃冰箱中，可保存 5d）。

2.2.2 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（200 μg/mL） 準(zhǔn)確量取1.00 mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10.0 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻（此標(biāo)準(zhǔn)使用液在4℃冰箱中，可保存5d）。

2.2.3 試樣處理 稱取2 g菊花金銀花浸膏（精確到0.001 g）于25.0 mL容量瓶中，加入20 mL 70%甲醇，超聲提取30 min，用70%甲醇定容至刻度，混勻，過(guò)0.45μm濾膜，濾液供色譜分析。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)使用液，用流動(dòng)相在容量瓶中稀釋成濃度分別為 2.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

2.2.5 液相色譜條件 色譜條件：Diamonsil C18 色譜柱 （5μm，4.0 mm×250 mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.5%乙酸溶液（10∶90）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：327 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.6 色譜分析 取標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液注入色譜柱中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

2.3 正交試驗(yàn)

2.3.1 因素與水平 選擇提取時(shí)間（A）、提取次數(shù)（B）、醇沉濃度（C）3 個(gè)因素，設(shè)計(jì) 3 個(gè)水平，選用 L9（34）正交表。因素水平見(jiàn)表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平

2.3.2 結(jié)果分析 見(jiàn)表2～4。

表2 L9（34 ）正交試驗(yàn)及結(jié)果

表3 收率方差分析

表4 綠原酸含量方差分析

從表2 可見(jiàn)，在實(shí)驗(yàn)水平范圍內(nèi)，收率較佳的工藝為A3B3C2，綠原酸含量較佳的工藝為A3B2C1。表3、4的方差分析結(jié)果表明，A、B、C因素對(duì)收率的影響都不顯著；A因素對(duì)綠原酸含量的影響較大（P＜0.05），B、C因素對(duì)綠原酸含量的影響不顯著。綜合分析結(jié)果，主要考慮綠原酸含量，確定此方法的提取工藝為微沸提取2次，第1次加9 倍水，第2次加7 倍水，每次2 h，醇沉濃度為63%。

2.4 最佳工藝驗(yàn)證

按照上述優(yōu)化工藝，平行提取3 份，分別測(cè)定收率和綠原酸的含量，收率分別為9.45%、9.65%、9.53%，平均收率為9.54%；綠原酸含量分別為10.33%、9.89%、11.92%，平均含量為10.71%。結(jié)果表明，篩選出來(lái)的工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

3.1 提取時(shí)間的選擇

分析結(jié)果表明，提取時(shí)間對(duì)菊花金銀花中綠原酸的含量有顯著影響，但是菊花金銀花在加水提取的過(guò)程中容易變軟，提取過(guò)長(zhǎng)，藥渣會(huì)嚴(yán)重堵塞管道，影響提取液從管道流出。本次選定的提取時(shí)間為每次2 h，基本不影響提取液的流出，在實(shí)際生產(chǎn)中要根據(jù)設(shè)備管道的大小再進(jìn)行調(diào)整。

3.2 醇沉濃度的選擇

醇沉濃度對(duì)本次提取來(lái)說(shuō)不是顯著因素，但是在實(shí)際操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，醇沉濃度低于63%時(shí)醇沉的液和渣分離不徹底，大大影響提取效率，醇沉濃度為63%時(shí)，醇沉效果已經(jīng)較好，綠原酸的含量也較高，不需要再提高醇沉濃度。

菊花金銀花浸膏提取精制后作為菊花龜苓膏的主劑，具有兩方面的技術(shù)優(yōu)勢(shì)：②菊花金銀花浸膏經(jīng)過(guò)精制后為均勻的中間產(chǎn)品，對(duì)保證龜苓膏成品的穩(wěn)定性及優(yōu)良的口感發(fā)揮重要作用。②菊花金銀花提取精制后投料，保證投料準(zhǔn)確性及便捷性。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：205-206，292.

[2] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知[S].衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51 號(hào).

[3] 馬力，唐鳳敏，曾天舒，等.菊花多糖和綠原酸免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27（10）：1168-1170.

[4] 王宏軍，吳國(guó)娟，孫健，等.綠原酸的藥效學(xué)研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27（10）：1168-1170.

[5] 劉穎，郭明曄，白根本，等.綠原酸的研究進(jìn)展[J].中藥材，2012，35（7）：1180-1185.

[6] 王麗萍，郭棟，王果，等.中藥綠原酸的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（4）：961-963.

[7] 邢俊波，李萍，劉云，等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選金銀花中綠原酸提取工藝的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13（6）：321-322.

[8] 張艷麗，孟麗軍.金銀花中綠原酸提取工藝的正交試驗(yàn)研究[J].唐山學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，20（4）：108-111.

[9] 聶凌鴻，岳淼.金銀花中綠原酸提取工藝的優(yōu)化[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2008，29（1）：51-55.

[10] 楊大進(jìn)，方從容，王竹天，等.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)保健食品中綠原酸的測(cè)定[M].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：1-8.