川崎病患兒基質(zhì)金屬蛋白酶-9變化及其與心功能關(guān)系的研究

張元鳳 馬少春 喬凌燕

川崎病患兒基質(zhì)金屬蛋白酶-9變化及其與心功能關(guān)系的研究

張元鳳 馬少春 喬凌燕

目的 通過對川崎病患兒血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)水平的測定,探討MMP-9與川崎病（KD）及其冠狀動脈損害(CAL)發(fā)生的關(guān)系，以及與心功能的關(guān)系。方法 以2008年8月～2011年2月在青島市兒童醫(yī)院住院的KD患兒37例為研究對象，20例健康兒童(正常對照組)，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清MMP-9，并行心臟彩色多普勒超聲(UCG)檢測冠狀動脈內(nèi)徑及左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)，據(jù)內(nèi)徑進(jìn)行分組。結(jié)果 急性期KD患兒的血清MMP-9（488±69μg/L）較對照組（73±27μg/L）均顯著增高(P<0.01)，冠狀動脈病變組患兒血清MMP-9（726±83μg/L）較非冠狀動脈病變組（294±57 μg/L）增高更為顯著(P<0.01)；恢復(fù)期冠狀動脈病變組血清MMP-9（212±36μg/L）雖較急性期顯著下降，但仍顯著高于非冠狀動脈病變組患兒（82±26 μg/L） (P<0.01)；KD患兒血清MMP-9水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)(r=-0.407，P<0.05)。結(jié)論 MMP-9在KD急性期尤其伴CAL時表達(dá)顯著增高，能夠反映KD患兒冠狀動脈損害的程度，與LVEF結(jié)合可估計患兒病情及預(yù)后。對于KD早期MMP-9異常增高而彩超顯示尚無CAL發(fā)生的患兒，應(yīng)盡早正規(guī)治療，以防止CAL的發(fā)生或減輕冠狀動脈的損害程度。

川崎病；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；冠狀動脈損害；左心室射血分?jǐn)?shù)

皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征又稱川崎病（kaw asak i d isease，KD），其最嚴(yán)重的并發(fā)癥是心血管系統(tǒng)病變[1]，尤其以冠狀動脈損害（coronary artery lesions，CAL）最常見，是導(dǎo)致患兒死亡的主要原因，因此對其早期診斷及治療尤為重要。近年來發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）在川崎病冠狀動脈病變的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。本研究通過對37例KD患兒MMP-9水平的檢測，并與心功能行相關(guān)性分析，探討MMP-9的檢測在KD患兒中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 KD組：選取2008年8月～2011年2月在青島市兒童醫(yī)院住院的KD患兒37例，男25例，女12例；年齡5個月～7歲，平均（30.3±4.6）個月，所有患兒的診斷、病程分期及冠狀動脈病變分度標(biāo)準(zhǔn)均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版中的診斷、分期和冠狀動脈病變分度標(biāo)準(zhǔn)[2],均排除心力衰竭、心肌炎、腎臟疾病、骨骼肌損傷等，入院前未接受過靜脈丙種球蛋白及阿司匹林等治療。確診后24h、發(fā)病3周后分別行心臟彩色多普勒超聲檢查，測量冠狀動脈內(nèi)徑及左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。合并冠狀動脈病變組患兒15例，其中冠狀動脈擴(kuò)張（CAA）11例，冠狀動脈瘤（CAD）形成4例；無冠狀動脈病變組22例。入院后37例均接受靜脈丙種球蛋白及阿司匹林聯(lián)合治療。正常對照組：選取我院同時期兒保門診健康查體兒童20例，其中男13例，女7例，年齡7個月～6歲，平均（29.2±7.4）個月。兩組患兒性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 川崎病組：急性期（確診后24h內(nèi)，使用靜脈免疫球蛋白及阿司匹林前）、恢復(fù)期（病程3～4周）晨起抽取空腹靜脈抗凝血3m L送檢，標(biāo)本抽取后于30m in內(nèi)送檢驗(yàn)科，3000r/m in離心10m in留取血清，冷凍于-80℃冰箱中備用。對照組：正常健康查體兒童于清晨抽取空腹血3m L，標(biāo)本處理方法與川崎病組相同。MMP-9檢測采用試劑盒由美國R&D公司提供的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，所有計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊采用t’檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 KD患兒與正常對照組兒童血清MM P-9水平的比較 KD患兒急性期冠狀動脈病變組急性期（15例）MM P-9（726±83）μg/L，恢復(fù)期（15例）（212±36）μg/L，KD患兒非冠狀動脈病變組急性期（22例）（294±57）μg/L，恢復(fù)期（22例）（82±26）μg/L，正常對照組（20例）（73±27）μg/L。KD患兒急性期冠狀動脈病變組與非冠狀動脈病變組血清MM P-9水平均較正常對照組明顯增高（t’＝29.34，P<0.01；t’＝16.24，P<0.01），且冠狀動脈病變組比非冠狀動脈病變組增高更為顯著（t=18.79，P<0.01）。KD患兒冠狀動脈組恢復(fù)期MMP-9水平明顯低于急性期，但仍顯著高于正常對照組（t=13.22，P<0.01），非冠狀動脈組恢復(fù)期降至正常水平（t=1.14，P>0.05）。

2.2 KD患兒急性期與恢復(fù)期LVEF的比較 急性期LVEF明顯低于恢復(fù)期，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.22，P<0.01），見表1。

表1 川崎病患兒急性期與恢復(fù)期LVEF的比較()

表1 川崎病患兒急性期與恢復(fù)期LVEF的比較()

組別 例數(shù) LVEF（%） MMP-9（μg/L）急性期 37 60.4±4.58 488±69恢復(fù)期 37 65.7±6.12 113±38

2.3 KD患兒MMP-9水平與LVEF的相關(guān)性分析 急性期MMP-9與LVEF呈負(fù)相關(guān)（r=-0.407，P<0.05），而恢復(fù)期LVEF多已恢復(fù)正常，二者之間無明顯相關(guān)性（r=-0.113，P>0.05）。

3 討論

近幾年來，文獻(xiàn)報道，KD已取代風(fēng)濕熱，成為后天性心臟病患兒中最常見的病因，發(fā)病率呈上升趨勢[3]，并可能成為KD患兒成年后出現(xiàn)缺血性心臟病的危險因素之一[4]。KD的主要危險在于其心血管系統(tǒng)并發(fā)癥，尤其是CAL，探討其發(fā)生的有關(guān)因素有利于及早防治并評估預(yù)后。許多研究發(fā)現(xiàn)[5]，KD患兒在其病程的各時期都有可能存在不同程度的CAL和心肌缺血，同時也出現(xiàn)了許多用來評價CAL和心肌缺血程度的檢查、檢驗(yàn)項(xiàng)目。如能發(fā)現(xiàn)提示患兒早期冠狀動脈、心肌的損害的較特異的生化指標(biāo)，并盡早加以干預(yù)，將有可能使KD患兒的生存率和生活質(zhì)量明顯提高。

KD是一種以全身性血管炎為主要病變的急性小兒疾病。日本MCLS研究委員會的總結(jié)顯示[2]，病理形態(tài)學(xué)上，中等動脈尤其是冠狀動脈病變最嚴(yán)重。CAL的發(fā)病機(jī)制尚不明了，但其病理基礎(chǔ)已較明確，其主要為ECM的降解、血管中膜的變薄、動脈透壁性炎癥、細(xì)胞的凋亡與遷移、內(nèi)彈性膜的破壞、血管結(jié)構(gòu)的重建，所致早期冠狀動脈擴(kuò)張和冠狀動脈瘤及血栓的形成，冠狀動脈晚期形成狹窄、梗阻及瘢痕。Gav in等[6]的研究進(jìn)一步證實(shí)了KD是全身系統(tǒng)性的血管炎，并提示了KD患者中MMP-9可能發(fā)揮了較重要的作用，其經(jīng)von Gieson’s染色發(fā)現(xiàn)，在KD急性期，MMP-9的免疫定位不僅于冠狀動脈瘤內(nèi)，同時于心肌及未受炎性侵犯的冠狀動脈血管壁中也存在，而在非KD患者中其MMP-9染色均為陰性。

目前已發(fā)現(xiàn)的MMPs有20余種，其是一類內(nèi)源性蛋白水解酶家族，依賴于鋅、鈣離子，MMPs合成和分泌主要來源于成纖維、內(nèi)皮、平滑肌等細(xì)胞。ECM的合成和降解存在MMPs的參與，使其在諸多的心血管疾病中發(fā)揮著重要作用[7]。其中MMP-9屬于明膠酶，可降解Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，參與血管壁細(xì)胞的損傷、退化及其重塑等一系列病理過程[8-9]，與心肌病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腹主動脈瘤、動脈粥樣硬化等疾病的病理過程也有著緊密聯(lián)系。近年來的多項(xiàng)研究表明[10-11]，在KD合并CAL中，外周血中MMP-9水平明顯升高。

本研究結(jié)果顯示，KD急性期CAL組患兒血清MMP-9水平較NCAL組及對照組明顯增高，提示這一時期血清MMP-9水平越高，KD冠狀動脈病變程度越重，其血管壁破壞越嚴(yán)重，血管進(jìn)而重建，發(fā)生CAL的可能性也越大。在經(jīng)過丙種球蛋白及阿司匹林等正規(guī)治療后，KD患兒NCAL組血清MMP-9水平在恢復(fù)期明顯下降，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而冠狀動脈病變組經(jīng)治療后，其恢復(fù)期血清MMP-9水平較急性期降低，但仍顯著高于非冠狀動脈病變組患兒恢復(fù)期及對照組，早有研究顯示早期丙種球蛋白及阿司匹林治療可有效降低冠狀動脈瘤的發(fā)生率，本研究也提示了丙種球蛋白等可有效下調(diào)血清MMP-9水平，進(jìn)一步證實(shí)了此論點(diǎn)，但提示雖然恢復(fù)期患兒臨床癥狀有所改善，但KD對于心血管的炎性病理損傷仍持續(xù)存在，MMP-9水平的持續(xù)的高表達(dá)，可加劇KD冠狀動脈的炎性反應(yīng)，在CAL的發(fā)生過程中起重要作用。血清MMP-9水平增高是CAL的危險因素之一。

心功能不全的患者的MMP-9水平也會增高。孫云鵬等[12]觀察了80例心力衰竭患者，結(jié)果心力衰竭組MMP-9水平明顯高于正常對照組，兩者呈正相關(guān)，與心功能紐約分級（NYHA）程度呈正相關(guān),與LVEF呈負(fù)相關(guān)，MMP-9水平能較好地反映心功能不全的嚴(yán)重程度和左心室的功能。本研究結(jié)果同時顯示，急性期與恢復(fù)期KD患兒，二者LVEF差異存在明顯，而KD患兒血清MMP-9水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)，提示KD患兒可能存在心功能的下降，而且血清MMP-9水平越高，LVEF水平越低，二者結(jié)合對于KD患兒的病情及預(yù)后的評估及臨床治療的指導(dǎo)有較高的應(yīng)用價值。

綜上所述，MM P-9在KD CA L的形成中起重要作用，對于早期診斷KD及預(yù)測CAL的發(fā)生發(fā)展有一定的臨床意義，對于KD早期MMP-9異常增高而彩超顯示尚無CAL發(fā)生的患兒，應(yīng)盡早給予丙球及阿司匹林等正規(guī)治療，以防止CA L的發(fā)生或減輕冠狀動脈的損害程度，可提高患兒生存率和生活質(zhì)量。MMP-9水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)，二者結(jié)合可評估患兒病情嚴(yán)重程度及轉(zhuǎn)歸，指導(dǎo)臨床治療。

[1] 王煒.15例川崎病的臨床分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011，17(11):91-92.

[2] 胡亞美，江載芳.諸福棠實(shí)用兒科學(xué)［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：698-705.

[3] 魏洪平，吳敏，朱紅楓.川崎病易感基因研究進(jìn)展[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2008，23⑼:705-707.

[4] Newburger JW，Takahashi M，Gerber MA，et al．Diagnosis， treatment，and long-term management of Kawasaki disease:statement for health professionals from the Committee on Rheumatic Fever，Endocarditis，and Kawasaki Disease，Council on Cardiovascular Disease in the Young，American Heart Association［J］．Pediatrics，2004，114⑹:1708-1733.

[5] 梁翊常.川崎病的冠狀動脈損傷[J].中國實(shí)用兒科雜志,1999, 14⑶:132.

[6] Gavin PJ,Crawford SE,Shulman ST,et al.Systemic arterial expression of matrix metalloproteinases 2 and 9 in acute Kawasaki disease[J]. Arterioscler Thromb Vasc Bio,l 2003,23⑷:576-581.

[7] Visse R,Nagase H.Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases structure, function, and biochemistry[J].Circ Res,2003，92⑻:827-839.

[8] Lin MT，Chen SJ，Ho YL，et al．Abnormal matrix remodeling in adolescents and young adults with Kawasaki disease late after onset［J］．Clin Chem，2008，54(11):1815-1822．

[9] 楊世偉．川崎病患兒外周血基質(zhì)金屬蛋白酶1的表達(dá)及其與冠狀動脈損傷的關(guān)系［J］．中華兒科雜志，2005，43⑻:612．

[10] 曾軍，陳兆鴻.川崎病患兒血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2009，24(21):1652-1653.

[11] 沈捷，李錦康，黃敏等.川崎病患兒血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其組織抑制物-1的變化[J].臨床兒科雜志，2007，25⑻:676-678.

[12] 孫云鵬，郭宏.心力衰竭患者同型半胱氨酸和基質(zhì)金屬蛋白-9的相關(guān)性研究[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，14⑵:2248-2249.

book=80,ebook=68

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.056

266034 山東省青島市婦女兒童醫(yī)院內(nèi)一科 （張元鳳 馬少春喬凌燕）