食品中甜蜜素檢測方法的改進

周慧敏，趙彤

（國家糧食監督檢驗中心大連市產品質量監督檢驗所，遼寧大連 116021）

甜蜜素又名環己基氨基磺酸鈉，是一種在我國廣泛使用的無營養、甜度高的食品甜味劑。但也有研究表明：人體過量攝入甜蜜素會產生致癌、致畸、損害腎功能等副作用[1-2]。到目前為止，已建立的測定甜蜜素的方法很多，主要有氣相色譜法、比色法、薄層層析法[3]、液相色譜-質譜法[4]。在國家抽查中，GB/T 5009.97—2003《食品中環己基氨基磺酸鈉的測定》中氣相色譜法是最常用的，即利用環己基氨基磺酸鈉在酸性條件下與亞硝酸鈉反應，以生成的環己醇亞硝酸酯定性和定量。但采用填充柱，峰形不夠尖銳，給積分定量造成一定誤差；沒有凈化步驟，樣品會污染設備；使用100 mL比色管過大，不適合批量檢驗；環己醇亞硝酸酯不穩定易分解，影響定量。結合食品中甜蜜素測定方法的相關報道和實際工作經驗，采用OV-101毛細管色譜柱代替填充柱，使用正己烷凈化樣品，按比例減小取樣量和試劑使用量，以環己醇亞硝酸酯和環己醇峰面積加和定量，以避免以上問題。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

6890N氣相色譜儀：安捷倫科技有限公司；OV-101毛細管柱（30 m×0.53 mm×0.5 μm）色譜柱：中國科學院大連化學物理研究所；TB—114電子天平：北京塞多利斯儀器系統有限公司；QN—999多功能食物攪拌機：韓國日進精工有限公司；QL-866渦旋混合器：海門市其林貝爾；CR21G離心機：日本日立公司。

1.1.2 試劑

甜蜜素標準品：上海泉島公司；甜蜜素標準溶液：2 mg/mL用蒸餾水配制；濃硫酸（優級純）：100 g/L，用蒸餾水配制；亞硝酸鈉（分析純）：50 g/L，用蒸餾水配制；正己烷（色譜純）。

1.2 標準系列制備

分別取 2 mg/mL 甜蜜素標準溶液 2、20、50、100、200 μL于10 mL離心管中加蒸餾水至4 mL，加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3 方法

1.3.1 固體樣品

試樣用粉碎機粉碎。稱取已粉碎的樣品10 g置于50 mL具塞三角瓶中，加入50 mL蒸餾水，振蕩60 min，過濾，取濾液10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機相后，移取4 mL水相，轉移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3.2 液體樣品

稱取10 g樣品置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，取10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機相后，移取4 mL水相，轉移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.4 色譜條件

色譜柱OV-101毛細管柱（30m×0.53mm×0.5μm），進樣口溫度160℃，FID檢測器溫度180℃，柱箱溫度80℃保持6min。載氣高純氮氣4mL/min，進樣量1μL。

1.5 測定

甜蜜素標準溶液圖，見圖1。

經GC-MS驗證，如圖1所示峰1為甜蜜素衍生主產物環己醇亞硝酸酯，峰2為甜蜜素衍生副產物環己醇，環己醇亞硝酸酯不穩定隨時間推移會分解成環己醇。為了減少環己醇亞硝酸酯分解給定量帶來的影響，本方法用環己醇亞硝酸酯和環己醇峰面積加和定量。

2 結果與討論

2.1 線性范圍和檢出限

按1.2的方法配制標準序列，以1.4的色譜條件進樣見圖 1。在 2 μg/mL～200 μg/mL 選定的質量濃度范圍內甜蜜素的含量與環己醇亞硝酸酯和環己醇峰面積之和的線性相關系數為0.999 6，見表1。

表1 甜蜜素的保留時間、線性范圍、相關系數Table 1 Retention time，Linear rang，correlative coefficients（r）of sodium cyclamate

在系列樣品中，將濃度為1.6 μg/mL的標液1 μL進樣后，所示得到的峰面積為12 PA*S，由此計算最低檢出濃度為4 mg/kg。

2.2 定量峰的選擇

國標方法以環己醇亞硝酸酯定量，但環己醇亞硝酸酯不穩定會隨時間推移分解成環己醇，影響定量，而且衍生后的樣品放置時間過長無法使用。在20℃下，以200 μg/mL標準品為例，其衍生產物隨時間變化，見表2。

表2 甜蜜素產物隨時間變化Table 2 Derivative varition with tim

由表2知，在40 h內兩者峰面積之和是穩定的。因此，本方法選擇環己醇亞硝酸酯和環己醇峰面積加和定量，以避免上述問題。

2.3 樣品的測定、回收率和精密度試驗

2.3.1 空白樣品

取一空白糕點樣品在0.1、0.5、1.0 g/kg三個水平，每個水平同時做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進行回收率試驗?；厥章试?3%～104%之間，相對標準偏差（RSD）為2.6%～4.3%，結果見表3。

表3 糕點試樣加標回收率和精密度（n=6）Table 3 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

2.3.2 陽性樣品

取一陽性糕點樣品在0.5水平，同時做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進行回收率試驗?；厥章蕿?3.6%，相對標準偏差（RSD）為4.7%，結果見表4。

表4 糕點試樣加標回收率和精密度（n=6）Table 4 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

3 結論

本次實驗主要是用氣相色譜法對實際樣品進行檢驗，結果表明，該方法可準確測定食品中的甜蜜素含量，且有很好的線性關系，相關系數大于0.999 5，最低檢出濃度為4 mg/kg，回收率為93%～104%，相對標準偏差（RSD）為2.6%～4.7%。從而確認本方法可準確測定食品中的甜蜜素。

:

[1]Jacks0n C D,Baetcke K P.Causative agents in the induction of bladder cancer[J].Ann Clin Lab Sci,1976,6(3):223-232

[2]Bopp B A,Senders R C,Kesterson J W.Toxicological aspects of cyclamate and cyclohexylamine[J].Crit Rev Toxicol,1986,16(3):213-306

[3]張暖民.GB/T 5007.97-2003《食品中環己基氨基磺酸鈉的測定》[S].北京:中國標準出版社:689-693

[4]王明泰.SN/T 1948-2007《進出口食品中環己基氨基磺酸鈉的檢測方法液相色譜-質譜質譜法》[S].北京:中國標準出版社