魚肉中硝基苯殘留量檢測(cè)

郭 軍，趙全東，劉鐵鋼

（吉林省水產(chǎn)科學(xué)研究院，吉林 長(zhǎng)春 130000）

我們參考各種農(nóng)殘食品分析方法和水中硝基苯的檢測(cè)方法，根據(jù)硝基苯的物理化學(xué)性質(zhì)，經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。采取丙酮?jiǎng)驖{提取魚肉中的硝基苯，水蒸氣提取純化，正己烷萃取，無水硫酸鈉+氧化鋁柱凈化，濃縮，GC，ECD檢測(cè)器檢測(cè)的方法檢測(cè)魚肉中的硝基苯。

1 試驗(yàn)

（1）試劑和儀器。所有試劑在硝基苯出峰處應(yīng)無干擾峰，最好選擇優(yōu)級(jí)純或色譜純?cè)噭１荷V純。正己烷：色譜純。無水硫酸鈉：分析純，650℃灼燒4h，冷卻后貯于密閉容器中備用。中性氧化鋁：層析用，100-200目，650℃灼燒4h，加5%（W/W）去離子水脫活，震蕩1h后，放置過夜。硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品：購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。氯化鈉：分析純。水：實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T 6682中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器、設(shè)備及下列各項(xiàng)：氣相色譜儀：agilent 6890N、配63Ni電子捕獲檢測(cè)器；電子天平：0.0001g；勻漿機(jī)；離心機(jī)：4000r/min、100ml；電熱恒溫水浴鍋；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；Snyder濃縮柱；水蒸氣蒸餾裝置；無水硫酸鈉+氧化鋁凈化柱：在玻璃層析柱下端放入少量玻璃棉，依次干法裝入4g氧化鋁和10g無水硫酸鈉。輕敲柱壁，使填充物盡可能致密。

（2）色譜條件。色譜柱：HP-5石英毛細(xì)管柱，固定相：甲基硅油，30m×0.32mm×0.5μm載氣：氮?dú)猓d氣流量：1.0mL/min保持至 6min；0.5ml/min2→1.2ml/min 保持至 8min；1.2ml/min→最后。進(jìn)樣口溫度：240℃。溫度程序：初始柱溫40℃，維持1min；20℃/min→120℃，維持 1min；15℃/min→240℃；檢測(cè)器：63Ni電子捕獲檢測(cè)器；溫度：300℃。進(jìn)樣方式及進(jìn)樣量：無分流方式進(jìn)樣，自動(dòng)進(jìn)樣1μL。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線。將硝基苯標(biāo)液用正己烷稀釋定容，配成濃度為 0.0202 μg/mL、0.0606 μg/mL、0.101 μg/mL、0.1414 μg/mL、0.202μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。采用以上色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量1ul,以峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線回歸方程：

Area=1912.013×Amt-11.397

R=0.9955

Area:峰面積

Amt:標(biāo)準(zhǔn)的量（濃度）

2 樣品的預(yù)處理和測(cè)定

（1）樣品預(yù)處理。魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉；樣品切為不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小塊后混勻，每一樣品總樣品量不低于50g，放置冰箱中-18℃冷凍貯存?zhèn)溆谩?/p>

（2）提取。將樣品解凍，稱取樣品10g（精確到0.01g），置于50mL勻漿機(jī)試管中，加入丙酮25mL，勻漿機(jī)勻漿2min，分散均勻，提取硝基苯，4000r/min離心5min，收集上清液。轉(zhuǎn)移魚樣品至勻漿機(jī)試管中，再加入丙酮20mL勻漿2min，同上條件離心分離，合并上清液。將丙酮提取液置于500mL圓底燒瓶中，在105℃溫度下，水蒸氣蒸餾出300ml，并置于500mL分液漏斗中，向其中加入20gNaCl，用每次20ml正己烷萃取2次，靜止分層30min，再用200ml硫酸鈉水溶液反萃正己烷萃取液一次，棄去水相。將正己烷萃取液過無水硫酸鈉+氧化鋁凈化柱（柱內(nèi)徑12mm，10g無水硫酸鈉（上層）+4克氧化鋁）。

（3）濃縮。用10mL正己烷洗滌分液漏斗和無水硫酸鈉脫水柱，一并和正己烷萃取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至10mL，將10mL濃縮液轉(zhuǎn)移至K.D濃縮瓶中，Snyder柱濃縮至0.6mL左右，以正己烷定容至1mL。GC/ECD測(cè)定。

（4）樣品測(cè)定。分別注入1μL適當(dāng)濃度的硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品提取物溶液于氣相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積；響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量如圖1所示。

NB：硝基苯

圖1 某含硝基苯的鰱魚肉提取液色譜圖

（5）空白實(shí)驗(yàn)。用該方法檢測(cè)市售魚產(chǎn)品，未檢出硝基苯。

（6）加標(biāo)回收率測(cè)定。取10g空白魚肉加標(biāo)0.885微克，做多次實(shí)驗(yàn)，回收率70%～80%。

3 結(jié)果和討論

（1）檢出限。以該色譜條件下3倍噪音所對(duì)應(yīng)濃度為定量檢出限，考慮到前處理步驟，得該方法魚肉中硝基苯檢出限為3ug/kg。

（2）空白干擾實(shí)驗(yàn)。所有試劑在硝基苯出峰處無干擾峰，正己烷濃縮后硝基苯出峰處無干擾峰。

（3）精密度。單個(gè)實(shí)驗(yàn)室多人次測(cè)定同一個(gè)樣品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。

（4）正己烷萃取。正己烷萃取率比苯低，但是其毒性相對(duì)小，易濃縮，因此我們采用正己烷。

（5）水蒸氣蒸餾裝置。我們使用經(jīng)典的提取方法，若不用水蒸氣蒸餾提純，做到濃縮步驟時(shí)，樣品成凝固狀，使得實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。依據(jù)硝基苯易與水形成共沸物的特點(diǎn)采用水蒸氣蒸餾提取純化，損失小并能去除大部分的脂類物質(zhì)干擾使得實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)行下去并最終取得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

圖2 水蒸氣蒸餾裝置圖

4 結(jié)論

該方法檢測(cè)魚體中硝基苯，具有良好的分離度、精密度、較高的回收率和較低的檢出限。