八珍袋泡茶的薄層色譜鑒別

楊惠蓮，謝靜，冷靜

(1.重慶市食品藥品檢驗所，401121;2.重慶市中醫院藥劑科，400021)

八珍袋泡茶是由黨參、當歸、川芎、白術、茯苓、甘草、白芍、熟地黃等八味藥組成的中藥成方制劑，具有補氣益血的作用，用于氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經過多等癥。其質量標準收載于《衛生部藥品標準·中藥成方制劑》第五冊，自1991年收錄后至今未做完善和提高，僅有性狀、顯微鑒別、干燥失重、裝量差異、浸出物及茶劑項下的常規檢查等項。2010年，我所接受了國家藥典委員會下達的提高八珍袋泡茶質量標準的任務，開始著手研究并建立了該品種中主要藥味的薄層色譜(thin layer chromatography，TLC)鑒別法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器939全自動薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術廠)，CAMAG REPROSTAR3薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司)。

1.2 材料八珍袋泡茶(重慶希爾安藥業有限公司，每袋裝2.4 g，批號:100301，100302，100303)。對照藥材黨參(批號:121057-200805)、當歸(批號:120927-201014)、川芎(批號:120918-200809)、白術(批號:120925-200708)、茯苓(批號:121117-200605)均購自中國藥品生物制品檢定所。硅膠G購自青島海洋化工有限公司，實驗用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黨參的TLC鑒別本品2袋，取內容物，加水100 mL煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至近干，加稀鹽酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加熱回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取1次，合并三氯甲烷液，揮干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去黨參，模擬工藝同法制成陰性對照溶液。另取黨參對照藥材2 g，加水50 mL，同法制成對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。陰性對照色譜在相應位置上無干擾(圖1)。

2.2 當歸、川芎的TLC鑒別本品1袋，取內容物，研細，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加環己烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去當歸、川芎，模擬工藝同法制成陰性對照溶液。另取當歸、川芎對照藥材各0.5 g，分別同法制成對照藥材溶液。吸取上述4種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照色譜在相應位置上無干擾(圖2)。

2.3 白術的TLC鑒別本品2袋，取內容物，研細，加50%乙醇20 mL加熱回流1 h，濾過，濾液蒸至近干，加水20 mL使溶解，再加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去白術，模擬工藝同法制成陰性對照溶液。另取白術對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照色譜在相應位置上無干擾(圖3)。

圖1 黨參薄層色譜圖

圖2 當歸、川芎薄層色譜圖

2.4 茯苓的TLC鑒別方法以“2.2”項供試品溶液為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去茯苓，模擬工藝同法制成陰性對照溶液。另取茯苓對照藥材4 g，加乙醚50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加環己烷1 mL使溶解，制成對照藥材溶液。吸取上述3種溶液10～20 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，放置15 min后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃綠色熒光斑點。陰性對照色譜在相應位置上無干擾(圖4)。

圖3 白術薄層色譜圖

圖4 茯苓薄層色譜圖

3 討論

《中華人民共和國藥典》2010年版一部收載的八珍顆粒[1]的處方與本制劑的處方一致，黨參在方中為君藥，故筆者首先參考藥典方法對黨參的TLC鑒別方法進行了初步實驗，結果供試品色譜中在與黨參對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。筆者又考察了自制板和市售玻璃預制板、常溫(25℃)和低溫(7℃)、不同相對濕度(20%和80%)，通過對上述耐用性和專屬性的考察，結果證明該方法專屬性強、重復性好，可用于八珍袋泡茶中黨參的薄層鑒別。

當歸、川芎功效相近且具有相似的化學成分，均含有藁本內酯等揮發性成分、阿魏酸等酸性水溶性成分[2-3]。為增加鑒別的專屬性，得到較多的色譜信息，TLC以當歸、川芎對照藥材為對照，制備缺當歸和川芎的雙陰性對照溶液，同時參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部當歸[鑒別](2)項下供試品溶液的制備方法及TLC條件進行實驗[1]?？紤]到正己烷毒性較大，將展開劑中的正己烷改為環己烷，按前述條件進行了耐用性實驗。結果證明該方法專屬性強、重復性好，能夠用于八珍袋泡茶中當歸和川芎的薄層鑒別。

白術主要含揮發油，含量約為1.4%，其主要成分為蒼術酮、蒼術醇等[4]。另外還含有內酯類成分、多糖類成分、谷氨酸等多種氨基酸以及樹脂、白術三醇、維生素A等物質[5]。本品處方中白術為炒制品，據報道，白術炒制后揮發油的含量均有不同程度下降[6-7]，而其內酯類成分如白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等則有不同程度的增加[8-10]。筆者首先以蒼術酮對照品為對照進行預試，結果供試品色譜中不能檢視到蒼術酮的斑點，故參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部八珍顆粒[1]及呂武清等[11]對其進行了TLC鑒別方法的探索研究，并進行了專屬性和耐用性實驗。結果證明該方法專屬性強、重復性好，能夠用于八珍袋泡茶中白術的薄層鑒別。

茯苓主要含多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等化學成分，因本方中藥味較多，要鑒別萜類和多糖類成分干擾較大，故參考文獻方法對其脂溶性部分進行提取后再進行鑒別[12]。經過預試驗發現，可以用鑒別當歸、川芎的供試品溶液作為本項的供試品溶液，分別考察了“2.2”項的展開劑、環己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶0.5)[1]，結果以正文所述的展開劑展開后Rf值適中。另外考察了直接于紫外光燈(365 nm)下檢視，發現陰性對照有干擾，故改為10%硫酸乙醇顯色后放置15 min，再在紫外光燈(365 nm)下檢視，此時陰性對照無干擾，并進行了耐用性實驗。結果證明該方法專屬性強、重復性好，能夠用于八珍袋泡茶中茯苓的薄層鑒別。

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