高效液相色譜法測定黔北木瓜中綠原酸含量*

令狐昌敏，田尚勇，鄒孔強(qiáng)，聶明華，馮華

(1.貴州省遵義市藥品檢驗(yàn)所，563000;2.貴州省遵義市仁懷市合馬衛(wèi)生院，550002)

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠[Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai.]的干燥近成熟果實(shí)，為《中華人民共和國藥典》2010年版一部收載品種[1]。具有舒筋活絡(luò)、和胃化濕功效。用于濕痹拘攣、腰關(guān)節(jié)酸重疼痛、暑濕吐瀉、轉(zhuǎn)筋攣痛、腳氣水腫。筆者在本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，以其有效成分綠原酸為參考指標(biāo)，對黔北木瓜中綠原酸含量進(jìn)行測定，為黔北木瓜開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-20AD型高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，KQ-300DE超聲儀，AG-135萬分之一梅特勒電子天平。木瓜藥材(2010年7月分別采集于遵義市正安縣、風(fēng)岡縣、仁懷市和湄潭縣，經(jīng)貴州省遵義市藥品檢驗(yàn)所鄧順超副主任中藥師鑒定為薔薇科植物貼梗海棠木瓜的干燥近成熟果實(shí))。乙腈、甲醇為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110753-200413)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品10.25 mg，置25 mL量瓶，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2 mL置25 mL量瓶，50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備精密稱取木瓜藥材粉末，過內(nèi)徑(365±13)μm篩(三號篩)，約1.0 g，置50 mL量瓶，加50%甲醇40 mL，超聲處理40 min，取出，放冷，用50%甲醇稀釋至刻度，制得供試品溶液。

2.3 色譜條件色譜柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶8∶76);流速:1.0 mL·min－1;柱溫25℃;檢測波長為326 nm。進(jìn)樣量10 μL，理論板數(shù)按綠原酸峰計，不低于5 000，見圖1[2]。

2.4 線性關(guān)系考察精密吸取0.032 8 mg·mL－1對照品溶液，分別進(jìn)樣6，8，10，12，14 μL，測定峰面積，以綠原酸進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計算得綠原酸回歸方程為:Y=2.3×106X－360 68，r=0.999 5。結(jié)果表明綠原酸在0.20～0.46 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)測定5次，其峰面積RSD=0.43%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μL，分別在0，2，4，8，12 h測定1次，其峰面積的RSD為1.30%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1 溶劑空白(A)、綠原酸對照品(B)與木瓜藥材樣品(C)HPLC圖譜1.綠原酸

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取本品粉末約1.0 g，共5份，按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液。精密吸取溶液各10 μL，測定綠原酸峰面積積分值，平均含量為0.147%，RSD=1.44%。結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量(0.146%)的樣品6份，每份約為0.5 g，精密稱定，精密加入3種濃度綠原酸對照品溶液(0.710，0.730，0.750 mg·mL－1)各1.0 mL，按“2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。平均加樣回收率97.73%，RSD=0.89%。

2.9 含量測定分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，按外標(biāo)法以峰面積計算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

木瓜藥材中綠原酸成分可以用甲醇或乙醇提取。為選擇合適溶劑，以不同濃度甲醇和乙醇為溶劑，進(jìn)行超聲提取，測定其含量。色譜圖結(jié)果顯示，以50%甲醇為溶劑的提取物，其綠原酸的分離度較好，提取率也較高，故本實(shí)驗(yàn)選擇50%甲醇為提取溶劑。

表1 綠原酸加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 不同產(chǎn)地木瓜藥材綠原酸含量測定結(jié)果%

將齊墩果酸作為木瓜藥材主要成分研究的報道較多[3-5]，而對于綠原酸的研究較少，2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)僅以齊墩果酸和熊果酸為控制指標(biāo)，筆者通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，木瓜中綠原酸含量也較高，可考慮作為木瓜藥材質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用高效液相色譜法測定綠原酸含量，方法簡便、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，可為黔北木瓜開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供參考。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:57.

[2]李華榮，高逢喜，任貽軍，等.高效液相色譜法測定資木瓜中槲皮素含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，29(9):1199－1200.

[3]姚秀玲，呂曉玲，李肈獎.木瓜中齊墩果酸的測定方法研究[J].現(xiàn)代食品科技，2005，21(3):127－128.

[4]李華榮，高逢喜，任貽軍.資木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，10(21):2563－2564.

[5]楊昌林，陳鴻平，靳波，等.光皮木瓜藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2010，24(6):75－77.