玄芷鎮痛片鎮痛作用與急性毒理學研究

徐麗君，王開富，鄒欣，龔菂，黃光英

(華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院中西醫結合研究所，武漢430030)

偏頭痛型血管性頭痛是青春期及中年女性的常見病、多發病，易反復發作，給患者帶來很大痛苦[1]。玄芷鎮痛片(原名頭痛靈片)在我院臨床使用多年，用于治療血管性頭痛，取得了良好療效。該制劑系由華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院中西醫結合科歷代名老中醫在長期臨床實踐的基礎上組方而成，雖使用多年，但從未進行實驗驗證。為確保玄芷鎮痛片口服用藥的安全性和有效性，筆者按照國家食品藥品監督管理局頒布實施的《藥品注冊管理辦法》中有關中藥天然藥物注冊分類第6類的有關項目要求，進行該藥的鎮痛藥效學和急性毒理學研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥RB-200智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司產品)，AEL-200型電子分析天平(日本島津公司)，阿司匹林(佳木斯制藥廠提供，批號:091117)，冰醋酸(天津博地迪化工有限公司提供)，玄芷鎮痛片(華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院藥學部提供，批號:20051210)。

1.2 動物昆明種小鼠，清潔級，雌雄按實驗要求而定，體質量(20.0±2.0)g，動物合格證號:SCXK(鄂)2004-0007，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 小鼠扭體實驗取小鼠100只，雌雄各半，稱質量標記后隨機分為5組，每組20只，玄芷鎮痛片低、中、高劑量組灌服藥粉混懸液(2.72，5.44，10.88 g·kg－1，以生藥量計)，陽性對照組灌服阿司匹林水溶液(0.40 g·kg－1)，陰性對照組灌服等量0.5%羧甲基纖維素鈉懸液。均每天1次，連續用藥7 d，末次給藥30 min后，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液(臨用前配制)，0.1 mL·(10 g)－1。5 min后觀察并記錄注射醋酸溶液后15 min內出現的扭體反應(腹部收縮內凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行)的次數，并計算玄芷鎮痛片鎮痛率。鎮痛率(%)=每組鎮痛鼠數/每組總鼠數×100%[2-3]。

1.3.2 熱板實驗①動物篩選:將小鼠置55℃熱板儀上，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現添后足的時間(s)，作為該鼠的基礎痛閾。給藥前先測定每只小鼠的基礎痛閾，共測2次，剔除喜跳躍者，10 s＜基礎痛閾＜30 s為合格。②動物分組及處理:將篩選合格的小鼠(全部為雌性)，隨機分為5組，每組20只，玄芷鎮痛片低、中、高劑量灌服藥粉混懸液(分別為2.72，5.44，10.88 g·kg－1，以生藥量計)，陽性對照組灌服阿司匹林水溶液(0.4 g·kg－1)，正常組灌服等量0.5%羧甲基纖維素鈉懸液，均每天1次，連續7 d，于末次給藥后0.5，1，2，4 h按上述基礎痛閾測定法分別測定痛閾，如痛閾超過60 s，即停止測試而按60 s計，以免燙傷足部。實驗結果見表2。痛閾提高率(%)=(給藥后平均痛閾－給藥前平均痛閾)/給藥前平均痛閾×100%[3-4]。

1.3.3 玄芷鎮痛片最大耐受量實驗取昆明種小鼠40只，雌雄各半，適應性飼養2 d后，隨機分成兩組，每組20只。實驗前禁食12 h，給藥組以玄芷鎮痛片清膏混懸液分兩次灌胃給予，給藥劑量為259.2 g·kg－1(按生藥量計)。取濃度為3.24 g·mL－1(按生藥量計)的玄芷鎮痛片藥液，按最大容積1.6 mL·(20 g)－1分兩次灌胃給藥;對照組同法給予對照溶液，1.6 mL·(20 g)－1，兩次用藥時間相隔8 h。

觀察動物體質量變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等，記錄所有動物死亡情況、中毒癥狀及中毒反應起始時間、嚴重程度、持續時間等。對瀕死及死亡動物進行大體解剖，其他動物在觀察期結束后進行大體解剖。肉眼觀察主要臟器的體積、顏色、質地等，若出現異常則對改變器官進行組織病理學檢查[5-6]。共觀察7 d，尤其是詳細觀察給藥后4 h內動物的反應情況，然后每天上下午各觀察1次。

1.4 統計學方法采用SPSS11.0進行數據分析，并采用χ2檢驗進行陽性率的比較。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 小鼠扭體實驗結果見表1。實驗結果表明，陽性對照組、玄芷鎮痛片各劑量組小鼠扭體次數顯著低于陰性對照組，其中陽性對照組和玄芷鎮痛片中、高劑量組扭體次數更少。玄芷鎮痛片高劑量組鎮痛率與陽性對照組相近，且扭體次數較接近陽性對照組，兩組比較差異無統計學意義。提示各劑量玄芷鎮痛片對小鼠醋酸所致的疼痛有顯著鎮痛作用，并呈現一定的量效關系，且高劑量組鎮痛作用接近阿司匹林。

表1 5組小鼠扭體反應測定結果Tab.1Effect of xuanzhi analgesic tablet on the writhing response induced by acetic acid in mice ±s

表1 5組小鼠扭體反應測定結果Tab.1Effect of xuanzhi analgesic tablet on the writhing response induced by acetic acid in mice ±s

與陰性對照組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01Compared with negative control group，*1P＜0.05，*2P＜0.01

組別小鼠/只劑量/(g·kg－1)15 min扭體次數鎮痛率/%玄芷鎮痛片低劑量組202.7214.3±5.5*140中劑量組205.559.8±6.3*250高劑量組2010.887.2±6.5*260陽性對照組200.405.1±4.8*270陰性對照組2027.0±13.60

2.2 熱板實驗痛閾測定結果見表2與圖1。實驗結果顯示，玄芷鎮痛片各劑量組痛閾在用藥1，2，4 h均較正常組高，其中陽性對照組，玄芷鎮痛片中、高劑量組痛閾提高更明顯，玄芷鎮痛片中、高劑量組痛閾4 h較2 h明顯增高，而陽性對照組則增高不明顯;玄芷鎮痛片各劑量組痛閾提高率均大于或等于陽性對照組。提示玄芷鎮痛片能提高小鼠熱刺激所致疼痛痛閾，明顯提高痛閾率，并且作用持續時間較長。玄芷鎮痛片各劑量組與陽性對照組起效時間雖然相同，但作用持續時間長且效果優于阿司匹林。

2.3 玄芷鎮痛片最大耐受量測定結果給藥組小鼠于給藥后4 h內活動減少。兩組小鼠1周內攝食、飲水、大便、黏膜、皮毛、呼吸等均未發生異常，且各組小鼠均無死亡。兩組小鼠體質量及其體質量增加率差異無統計學意義，見表3。7 d后，處死小鼠，作系統尸檢。結果各主要臟器均未發現異常變化。提示玄芷鎮痛片口服給藥的最大耐受量為259.2 g·kg－1(按生藥量計)，按體質量計算相當于每日臨床劑量的476倍;按動物系數折算相當于每日臨床劑量的48倍;由于該藥使用后短期內未見任何毒性反應及死亡，提示其急性毒性較小，使用較安全。

表2 5組小鼠熱板實驗痛閾測定結果Tab.2Effect of XUANZHI Analgesic Tablet on the pain induced by hot plate in mices，±s

表2 5組小鼠熱板實驗痛閾測定結果Tab.2Effect of XUANZHI Analgesic Tablet on the pain induced by hot plate in mices，±s

與正常組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01Compared with normal group，*1P＜0.05，*2P＜0.01

組別小鼠數劑量/(g·kg－1)用藥前0.5 h1 h2 h4 h玄芷鎮痛片低劑量組202.7213.0±4.514.6±6.919.1±4.7*121.4±11.9*221.0±8.7*1中劑量組205.4415.9±5.514.9±4.723.6±8.1*224.0±7.1*233.4±18.4*2高劑量組2010.8814.1±4.814.3±6.722.8±5.3*225.9±14.6*232.4±16.4*2陽性對照組200.4015.6±5.411.6±3.525.3±5.3*223.3±7.8*224.2±13.9*1正常組20…16.7±7.012.5±4.713.7±8.115.8±6.718.9±7.3

表3 兩組小鼠最大耐受量實驗體質量測定結果Tab 3Body weight of 2 groups of mice in MTD experiment ±s

表3 兩組小鼠最大耐受量實驗體質量測定結果Tab 3Body weight of 2 groups of mice in MTD experiment ±s

組別小鼠/只體質量/g/%給藥組死亡/只給藥前給藥后體質量增加率20020.06±1.3224.24±1.8420.84對照組20020.31±1.2724.09±2.1018.61

3 討論

血管性頭痛是一種由于血管舒縮功能障礙引起的反復發作性頭痛，是臨床常見病、多發病。它包括西醫的偏頭痛、緊張性頭痛，以及與頭顱組織結構無關的各種頭痛，屬中醫頭痛、頭風、偏頭痛等范疇[7]。1988年的全國流行病學調查顯示，血管性頭痛的患病率約為1%[1]。偏頭痛頻繁發作會嚴重影響患者的身心健康、日常生活以及工作與學習。玄芷鎮痛片由白芷、延胡索、川芎、丹參等中藥組成，具有活血鎮痛、平肝潛陽的功效。該藥臨床治療血管性偏頭痛療效確切。本實驗通過小鼠扭體實驗及熱板實驗，充分展示了該藥鎮痛作用，其作用強度與阿司匹林接近，且作用更持久。該結果充分印證了其組方的有效性及合理性。由于在多年臨床應用中，未發現患者反饋有不良反應，故認為該藥的毒性較低，實驗中由于無法測得半數致死量，故只能進行最大耐受量測定，實驗結果表明其最大耐受量達259.2 g·kg－1(按生藥量計)，已經是能夠達到的最大口服給藥量，7 d后仍未見任何毒性反應及死亡情況，說明該藥急性毒性較小，使用較安全。

文獻報道[7]小鼠熱板法在測定麻醉性鎮痛藥時較為適宜，舔足底動作不僅是脊髓反應，而且可能與高級中樞有關。本實驗用熱板法觀察該藥的鎮痛作用，結果表明玄芷鎮痛片對熱刺激的疼痛止痛較為敏感，提示其鎮痛部位可能在中樞。采用扭體法觀察發現該藥能明顯減少小鼠因醋酸刺激所致扭體的次數，各劑量組對小鼠醋酸所致的疼痛有顯著緩解作用，并呈現一定的量效關系，高劑量組鎮痛效果接近阿司匹林組，提示該制劑對化學致痛也有明顯的鎮痛作用。

[1]趙瑞成，周慎.偏頭痛辨治規律分析[J].湖南中醫雜志，2004，20(4):8－10.

[2]徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社，2001:228－229，886.

[3]陳冠林，周福生，王汝俊.康泰膠囊對內臟高敏感性模型大鼠及小鼠的鎮痛作用研究[J].中藥材，2010，34(1):116－119.

[4]國家食品藥品監督管理局藥品評審中心.藥品技術審評論壇·藥物研究技術指導原則(征求意見稿)——中藥、天然藥物分冊[S].2003:23－25.

[5]中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥/新藥研究指南(藥學、藥理學、毒理學)[M].北京:人民衛生出版社，1993:203－204.

[6]偏頭痛診斷與防治專家共識組.偏頭痛診斷與防治共識[J].中華內科雜志，2006，45(8):694－695.

[7]程體娟，楊軍英.嘛呢骨痹液的抗炎鎮痛作用實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15(1):34.