血清腫瘤標記物及HSP60聯合檢測對大腸癌診斷的意義

聶慶東，李艷君，張秀梅＊

（1.清華大學醫院 檢驗科，北京 100084；2.海軍總醫院 檢驗科，北京 100048）

血清腫瘤標記物及HSP60聯合檢測對大腸癌診斷的意義

聶慶東1，李艷君2，張秀梅1＊

（1.清華大學醫院 檢驗科，北京 100084；2.海軍總醫院 檢驗科，北京 100048）

目的 探討血清腫瘤標記物CEA、CA19-9及HSP60的水平與大腸癌生物學特性的關系及聯合診斷的價值。方法采用電化學發光法及酶聯免疫法分別對45例大腸癌患者和44例正常對照者進行血清中CEA、CA19-9及HSP60含量的檢測，分析其與大腸癌轉移和臨床分期的關系，并用ROC曲線分析癌癥患者血清中CEA、CA19-9及HSP60的聯合診斷價值。結果大腸癌患者血清中CEA、CA19-9及HSP60水平明顯高于正常對照組，尤其在Ⅲ－Ⅳ期以及有淋巴轉移的患者血清中水平更高，ROC曲線結果顯示三項聯合檢測敏感性、特異性及AUC值可達到80.0%、90.9%和0.90，與單項或者二項聯合相比，可明顯提高診斷的準確性。結論血清中CEA、CA19-9及HSP60水平是大腸癌發生、發展的重要檢測指標，三項聯合檢測對大腸癌患者診斷和預后等有著重要意義。

大腸癌；腫瘤標記物；熱休克蛋白60；聯合檢測

（ChinJLabDiagn，2012，16：0052）

大腸癌是常見的消化系統惡性腫瘤，每年有超過120萬新病例產生并造成約60萬人的死亡，是癌癥死亡的第三大原因［1］。手術切除仍是目前治療大腸癌的主要手段，早期發現和診斷，是提高療效及改善預后的關鍵。近年來，血清腫瘤標志的檢測由于其簡便、快速、非介入性等優點而被臨床廣泛采用，但由于腫瘤標志均為非特異的腫瘤相關抗原，其敏感度和特異度均有一定局限性，而采用聯合檢測手段可以提高大腸癌診斷的敏感度。本研究應用電化學發光法和酶聯免疫法聯合檢測大腸癌（colorectal cancer，CRC）患者血清癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）及熱休克蛋白60 （heat shock protein 60，HSP60）水平，探討其與大腸癌惡性程度、淋巴結轉移及臨床分期的關系，以及聯合測定三項指標對大腸癌早期診斷的應用價值。

1 對象和方法

1.1 病例選擇及一般資料隨機選擇近5年來本院就診的部分大腸癌患者以及體檢正常人，共89例。大腸癌組均為術前患者，所有病例經術后臨床病理診斷證實，共45例，男26例，女19例，年齡最大79歲，最小34歲，平均年齡53.8歲。分期采用TNM分期法，Ⅰ期4例，Ⅱ期15例，Ⅲ期20例，Ⅳ期6例。對照組：體檢正常人44例，男24例，女20例，年齡最大65歲，最小29歲，平均42.3歲。

1.2 檢測方法采集所有受試者空腹靜脈血，分離血清2ml，置于－80℃下凍存，集中檢測血清和HSP60的含量。血清CEA和CA19-9測定采用瑞士羅氏公司Cobas6000全自動生化免疫分析儀，試劑盒為儀器原裝配套試劑。正常參考值為CEA＜5 ng／ml，CA19-9＜37U／ml。應用 ELISA 方法，按照Human Total HSP60試劑盒（R ＆D Systems公司）說明書進行標準品稀釋并制作標準曲線，用酶標儀在450nm波長依序測量各孔的光密度 （OD值）。以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度。

1.3 統計學方法采用統計軟件SPSS 16.0進行分析，受試者操作特征（receiver-operating characteristic，ROC）曲線由Medcalc軟件繪制。計量資料采用±s表示，均數之間的比較采用t檢驗。單項和組合后敏感性、特異性比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 血清中CEA、CA19-9和HSP60的水平用電化學發光法及酶聯免疫法檢測了大腸癌患者和正常人血清中的CEA、CA19-9和HSP60水平，結果發現癌癥組較對照組均明顯升高，P值均＜0.01（見表1）。

表1 血清中CEA、CA19-9和 HSP60水平比較（±s）

表1 血清中CEA、CA19-9和 HSP60水平比較（±s）

vs對照組，＊P＜0.01

組別 n CEA （ng／ml） CA19-9（U／ml） HSP60（ρg／ml）大腸癌組 45 18.31±19.93＊ 52.03±38.34＊ 587.29±477.44＊對照組44 4.28±1.39 24.03±12.22 201.45±120.97

2.2 不同臨床分級及轉移患者血清中腫瘤標記物的陽性率有無轉移的大腸癌患者血清中的CEA和HSP60的陽性率差異有統計學意義，P值均＜0.01，而CA19-9的陽性率在有無轉移中差異不明顯（P＞0.05）。臨床Ⅲ－Ⅳ期的大腸癌患者血清中CEA、CA19-9和HSP60陽性率均要顯著高于Ⅰ－Ⅱ期患者的陽性率（P＜0.01），說明這些血清腫瘤標記物與大腸癌的惡性程度有一定的關系，結果詳見表2。

表2 不同臨床分期及有無轉移大腸癌患者血清腫瘤標記物的陽性率（%）

2.3 CEA、CA199和HSP60聯合檢測對大腸癌的診斷價值ROC曲線分析結果表明，三種標記物CEA、CA19-9和HSP60單項檢測敏感度為44.4%－48.9%，曲線下面積（AUC）能達到0.73－0.78，均有統計學意義（P＜0.01）。聯合檢測數據通過logistic回歸分析后再進行ROC曲線的繪制，CEA與CA19-9二項聯合檢測對大腸癌診斷的敏感性及AUC較單項檢測都有升高，敏感度和AUC分別達到62.2%和0.82，其中對 CA19-9差異明顯（P＜0.05），而對 CEA 無明顯統計學意義（P＞0.05）；CEA、CA19-9和 HSP60三項聯合檢測敏感性及AUC分別可達80.0%和0.90，與 CEA＋CA19-9聯合檢測相比差異明顯（P＜0.05）。結果提示CEA、CA19-9和HSP60聯合檢測可顯著提高大腸癌患者的診斷有效性。結果詳見表3和圖1。

表3 血清CEA、CA19-9及HSP60的聯合診斷價值

3 討論

大腸癌的早期診斷和治療的監控是提高療效的最有效手段。本研究對大腸癌腫瘤標志物CEA、CA19-9和HSP60進行檢測，發現均對大腸癌有一定的診斷價值，聯合檢測有助于提高診斷準確率，尤其是三者聯合檢測分析時AUC最高。此外，還發現CEA、CA19-9和HSP60的表達與大腸癌的分級及轉移有著一定的關聯。

從本組大腸癌患者檢測結果顯示，CEA和CA19-9陽性率分別為46.7%和44.4%，有一定的檢測準確率，與文獻報道結果相符［2，3］。但在正常人群中分別檢測出7例和5例假陽性的出現，因此，單一的腫瘤標記物在診斷上只有輔助價值。此外，CEA和CA19-9血清中的表達與腫瘤的臨床分期及轉移有著較大的關聯，病情較重Ⅲ－Ⅳ期或有轉移的患者血清中的標記物含量大于輕度的Ⅰ－Ⅱ期或未轉移的患者血清中的水平，說明CEA和CA19-9是大腸癌惡性程度的兩個指標，此結果與其他關于CEA和CA19-9在胃癌中的不同分級分化及轉移患者的血清中含量的報道相符［4，5］。這提示監測外周血中腫瘤標記物水平可用于日常體檢、普查和早期大腸癌的診斷，對判定大腸癌進展、惡性程度、轉移及預后等也有重要的臨床意義。

熱休克蛋白（HSPs）是一種應激蛋白，廣泛存在于原核及真核細胞中，有維持細胞蛋白自身穩定及結合受體調節細胞周期等許多功能，HSP60是HSPs家族的重要成員之一。最近的研究發現HSP與細胞的轉化和惡變關系密切，癌基因轉化的細胞和人類惡性腫瘤的細胞系中HSP呈過表達［6］。孟慶松等［7］檢測了胃癌患者血清中HSP60的表達，發現胃癌患者血清HSP60中水平較慢性萎縮性胃炎伴重度異形增生組與對照組均明顯升高。本研究發現HSP60在大腸癌患者血清中的水平遠高于正常對照組血清中的含量，其原因可能為在大腸癌發展過程中，癌細胞中存在原癌基因的突變、擴增、激活及抑癌基因突變、失活和缺失，因而導致HSP60在癌組織中過表達并釋放至血液，引起外周血中含量增高，提示檢測外周血中HSP60水平，對診斷大腸癌有重要的意義。

本研究還顯示，大腸癌患者血清中CEA、CA19-9和HSP60各單項指標對大腸癌診斷的敏感度均較低，單項檢測敏感度均低于50%，聯合檢測對大腸癌診斷可以明顯提高敏感度。CEA＋CA19-9聯合檢測敏感度為62.2%，AUC達0.82，而常用的血清腫瘤標記物CEA和CA19-9聯合HSP60檢測敏感度更是達到80.0%，AUC為0.90。從以上結果可以看出如果采用單一指標對腫瘤患者篩選常導致漏診，因此，要對腫瘤患者及時診斷早期治療，單一標志物檢測已不能滿足臨床需要。CEA、CA19-9和HSP60聯合檢測既提高了敏感性又提高了診斷符合率，可以為臨床診斷提供參考。因此，針對疑為大腸癌的患者，建議同時檢測血清中CEA、CA19-9和HSP60的水平以提高大腸癌的檢出率，降低漏診率，更好的指導臨床工作。

［1］Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2011，61：69.

［2］王影，梁歡.血清CEA、CA199、CA242聯檢在大腸癌診斷中的臨床應用［J］.中國衛生檢驗雜志，2008，18（7）：1359.

［3］Basbug M，Arikanoglu Z，Bulbuller N，et al.Prognostic value of preoperative CEA and CA 19-9levels in patients with colorectal cancer［J］.Hepatogastroenterology.2011，58（106）：400.

［4］陳佳佳，吳 榮.5種腫瘤標志物在胃癌患者血清中的表達及其臨床意義［J］.中國醫科大學學報，2011，40（8）：752.

［5］張永樂，薛英威，藍秀文，等.腫瘤標記物CA19-9、CEA對胃癌轉移和預后預測價值的分析［J］.哈爾濱醫科大學學報，2010，44（2）：181.

［6］Cappello F，David S，Peri G，et al.Hsp60：molecular anatomy and role in colorectal cancer diagnosis and treatment［J］.Front Biosci（Schol Ed）.2011，3：341.

［7］孟慶松，李向東，李獻忠，等.血清腫瘤標志及熱休克蛋白60聯合檢測對胃癌早期診斷的價值［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，12（23）：1884.

Combined diagnosis value of serum tumor markers and HSP60in patients with colorectal cancer

NIEQing-dong，LI Yan-jun，ZHANGXiu-mei.（DepartmentofClinicalLaboratory，TsinghuaUniversityHospital，Beijing100084，China）

ObjectiveTo evaluate the combined diagnosis value of serum tumor marker CEA，CA19-9and HSP60 and explore the relationships between them and biological characteristic of colorectal cancer.Methods45colorectal cancer patients and 44normal people serum CEA，CA19-9and HSP60levels were detected by electrochemiluminescence and ELISA，the relationship between them and colorectal cancer metastasis and clinical staging were analyzed，and the combination diagnosis value of serum CEA，CA19-9and HSP60were assessed by ROC analysis.ResultsColorectal cancer patient serum CEA，CA19-9and HSP60levels were obviously higher than those of control group，especially in patients with metastasis or at theⅢ－Ⅳstage.The ROC curve indicated the sensitivity，specificity and AUC value of 3-marker combination reached 80.0%，90.9%and 0.90，respectively.Compared with CEA and CA19-9alone or CEA＋CA19-9，CEA＋CA19-9＋HSP60had higher diagnosis accuracy in colorectal cancer.ConclusionSerum CEA，CA19-9 and HSP60levels were important factors for colorectal cancer genesis and development，and the 3-marker combination has important significance for colorectal cancer diagnosis and prognosis estimation.

colorectal cancer；tumor marker；heat shock protein 60；combined detection

1007－4287（2012）01－0052－03

＊通訊作者

R735.3＋4

A

2011－04－07）