馬永峰
腺苷脫氨酶的化學檢測及臨床應用
馬永峰
腺苷脫氨酶(ADA)是嘌呤核苷代謝中重要的酶類,廣泛分布于人體各組織中,測定血液、體液中的ADA水平對某些疾病的診斷、鑒別診斷、治療及免疫功能的研究日趨受到臨床重視?,F就ADA的檢測方法與臨床應用展開綜述。
腺苷脫氨酶;肝炎;結核性胸、腹膜炎;結核性腦膜炎
腺苷脫氨酶(ADA)為一種與機體細胞免疫活性有重要關系的核酸代謝酶,屬于巰基酶,每分子至少含2個活性巰基,其活性能對氯汞甲酸完全抑制[1]。其作用是催化腺嘌呤核苷轉變為次黃嘌呤核苷,再經核苷磷酸化酶作用生成次黃嘌呤,其代謝緩和終產物為尿酸。ADA廣泛分布于人體各組織中,以胸腺、脾和其他淋巴組織中含量最高,肝、肺、腎和骨胳肌等處含量較低。血清中ADA主要來源于肝臟,是反映肝損害的重要指標之一。目前ADA檢測試劑已經標準化,可應用全自動生化分析儀進行檢測,準確快速。
2.1 檢測標本 采集患者空腹靜脈血3 ml,分離血清,在采血過程中應盡量避免溶血;采集患者胸腹水標本放入抗凝管中,如有渾濁或細胞,離心取上清液;采集患者腦脊液標本,如有渾濁或細胞,離心取上清液。
2.2 檢測儀器與試劑 我院采用全自動生化分析儀HITACHE 7600-020進行檢測,試劑由四川邁克公司提供。
2.3 檢測原理 腺苷在ADA作用下脫氨基形成黃苷,黃苷在PNP作用下生成次黃嘌呤,次黃嘌呤在XOD作用下轉化為尿酸和過氧化氫(H2O2),H2O2與EHSPT和4-AA在POD作用下生成醌色物,560nm處測定其吸光度,吸光度變化率與ADA活性成正比。ADA活性用U/L表示,用速率法監測吸光度升高的速率從而計算出標本中ADA的含量(U/L)。
3.1 急性肝損傷時的應用 急性肝炎(AH)時ADA僅輕、中度升高,且陽性率明顯低于谷丙轉氨酶(ALT);重癥肝炎發生酶膽分離時,ALT正常或輕度增高,ADA明顯升高;AH后期,ADA升高率高于ALT,其恢復正常時間與組織學恢復一致,也較ALT為遲[2]。因此,ADA更能反映急性肝臟損傷,并有助于探測AH的轉歸與進展。ALT恢復正常而ADA持續升高者,常易復發或易遷延為慢性肝炎。
3.2 慢性肝病時的應用 慢性肝損傷時測定ADA的價值尤為明顯。慢性肝炎(CH)、肝硬化和肝細胞癌患者血清ADA活性顯著升高,其陽性率達85%~90%。此期間ALT多正?;蜉p度升高,因此,同時測定ALT和ADA更具有臨床價值,可作為慢性肝病的篩選指標,另外,失代償期肝硬化ADA活性明顯高于代償期肝硬化,因而可判斷慢性肝病的程度;慢性活動性肝炎(CAH)ADA活性明顯高于慢性非活動性肝炎(CPH),故可用于二者的鑒別診斷。
3.3 鑒別黃疸時的應用 阻塞性黃疸時ADA不升高,而肝細胞性黃疸時ADA活性升高,因此測定血清ADA有助于黃疸類型的鑒別診斷。
3.4 其他 阿米巴肝膿腫(ALA)時ADA活性明顯減少。
4.1 胸腹腔積液ADA活性測定,可作為鑒別結核性與癌性胸腹水的指標 結核性胸膜炎及結核性腹膜炎患者胸腹腔積液中ADA活性明顯高于癌癥患者,且前者胸腹水ADA與血清ADA的比值大于1,所以測定胸腹水和血清ADA活性及比值是診斷結核性胸膜炎和結核性腹膜炎的一項可靠有效的指標。
4.2 胸水ADA可作為結核性胸水療效觀察的指標 胸腹水ADA檢測可作為結核性胸、腹膜炎治療過程中的療效觀察,隨著病情好轉,ADA活性會明顯下降。
腦脊液腺苷脫氨酶檢測可作為中樞神經系統疾病診斷和鑒別診斷的重要指標。結核性腦膜炎顯著升高,病毒性腦膜炎不升高,顱內腫瘤及中樞神經系統白血病稍升高[3]。
腺苷脫氨酶作為近年來各醫院檢驗科廣泛開展的項目,其測定方法靈敏度高、精密度好、結果準確快速;對臨床疾病的診斷、鑒別和監測指導意義明顯。但是,要注意測定ADA活性時有一定的假陰性、假陽性結果,因此,需結合臨床表現,影像學檢查等以準確診斷。
[1]葉應撫,王毓三.全國臨床檢驗操作規程.東南大學出版社,2006:429-431.
[2]王靜.中國實用醫藥,2011,23:84-85.
[3]周美霞,管茶英,陳肖燕.全自動酶聯法測定腺苷脫氨酶.臨床檢驗雜志,2004,22(5):338-340.
030001解放軍二六四醫院檢驗科