老年人胃癌組織中P16和CyclinD1蛋白的表達及臨床意義

宋金平 李小寧

癌基因的激活和抑癌基因的失活在腫瘤的發生、發展中起重要作用。P16基因是1993年發現的抑癌基因[1]，屬于細胞周期抑制因子，有負向調節細胞周期的作用，可與細胞周期蛋白D1(cyclind1)競爭結合細胞周期激酶4(CK4)，使細胞周期停滯于G1期。CyclinD1是細胞周期的正調節因子，也是一種原癌基因，CyclinD1蛋白過表達可以促使細胞增殖。胃癌是消化道常見的惡性腫瘤，P16和CyclinD1均與胃癌的發生關系密切[2]，而在老年人胃癌中P16和CyclinD1蛋白的表達仍不十分清楚，本實驗用免疫組織化學方法檢測胃癌組織中P16和CyclinD1蛋白的表達探討其蛋白表達與老年人胃癌臨床病理特征之間的關系。

1 資料與方法

1.1 資料收集 收集2004年1月至2010年12月間住院患者手術切除胃癌標本85例，均為老年患者即年齡60～84歲，中位年齡68.6歲、進展期胃癌;患者中男66例，女19例;術前均未行放、化療。

1.2 組織芯片的構建 在顯微鏡下定位標記的腫瘤組織，自制成10～18組織陣列(每一標本取二塊組織芯，其直徑1.6 mm)蠟塊(專利號200920350099.2)。正常組織取自手術殘端(選取距腫瘤7 cm以上的胃組織)共30例。

1.3 免疫組織化學染色 采用EnVision法[3]，以套細胞淋巴瘤和宮頸癌組織作為CyclinD1和P16的陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 統計學分析 所有數據均采用SPSS統計學軟件進行統計學處理，陽性率之間的比較采用χ2檢驗，兩變量之間的關系分析采用Spearman等級相關分析表示，檢驗標準以α=0.05為顯著性檢驗水準，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常胃組織和胃癌組織中P16和CyclinD1的表達，免疫組織化學染色結果判斷:P16和CyclinD1陽性呈棕黃色，均定位于細胞核。陽性細胞大于10%，則判讀為陽性。P16在胃癌組織中表達率為52.9%(45/85);30例正常組織均呈陽性表達，表達率為100%。CyclinD1在胃癌組織中表達率為和75.3%(64/85)(圖1);30例正常組織均不表達。

3 討論

P16基因定位于染色體9q21，編碼相對分子質量為16 kDa的P16蛋白，特異性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4和6活性，調控細胞周期，參與了人類多種腫瘤的發生和發展，故又稱多種腫瘤抑制基因。多項研究[4]表明胃癌組織中均有P16蛋白表達降低，并與淋巴結轉移密切相關。本組研究發現P16蛋白在30例正常胃黏膜標本中全部呈現陽性表達，而在胃癌組織中的陽性表達率為52.9%(45/85)，有統計學意義(P＜0.05)，P16蛋白下降和失表達可能是由于受損細胞未得到修復呈失控性生長而形成了腫瘤。

細胞周期與細胞癌變不是相互獨立的事件，細胞周期的調控對腫瘤發展有很大影響。CyclinD1作為細胞增殖周期的正調節因子，在細胞周期進程中起關鍵作用。CyclinD1蛋白由CyclinD1基因(又稱CCND1基因)編碼，295個氨基酸組成，此基因位于人染色體11q13上。編碼蛋白半衰期很短，不足25 min。CyclinD1蛋白在細胞G1期進程中控制著G1期的時間，它們作為調節CyclinD1是細胞周期素家族中最重要的成員，其高表達可激活CDK4使抑癌基因表達產物Rb蛋白失去對細胞周期的制動功能促使細胞由G1期向S期演進。本組研究中正常胃組織中CyclinD1不表達而胃癌中高表達，表達率為75.3%(64/85)，差異有統計學意義(P＜0.01)，與文獻[5]報道相同。

總之，本組實驗結果顯示:老年人胃癌組織中P16的下降可能是胃癌中引起CyclinD1上升的原因之一;P16蛋白與CyclinD1的相互作用導致細胞周期紊亂可能參與了胃癌的發生，聯合檢測P16與CyclinD1蛋白有助于判斷老年人胃癌的惡性程度和生物學行為。

[1]Serrano M，Harmon Cr.Beach D.A nff-ov regulation motif in cell cycle control causing spinal inhibition of cyclinD/CDK4.Nalnre，1993，366(6456):704-707．

[2]Maddika S，Ands SR，Panigrahi S，et al．Cell survival，cell death and cell cycle pathways are interconnected:implications for cancer therapy.Drug Resist Updat，2007，10(1-2):13-29．

[3]韓靜，何丹，馮智英.廣州地區EB病毒相關胃癌的臨床病理及相關分子表達．中華病理學雜志，2010，39(12):798-803．

[4]Tahara T，Arisawa T，Shibata T，et al．Risk prediction of gastric cancer by analysis of aberrant DNA methylation in non-neoplastic gastric epithelium.Digestion，2007，75:54-61．

[5]Mukhopadhyay A，Banerjee S，Stafford IJ，et al.Curcumininduced suppression of cell proliferation correlates with down-regulation of cyclinD1 expression and CDK4-mediated retinoblastoma protein phosphorylation．Oncogene，2002，21(57):8852-8861．