黃連水煎液對胰島依賴型小鼠糖尿病模型的影響

宋春燕，倪約翰，傅靜波，王婕，程妍，湯欣

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

糖尿病是由多種病因引起的以慢性高血糖為特征的代謝系統紊亂。長期的高血糖可引起全身多系統功能損害，如眼、腎、神經、心臟、血管的慢性病變，導致功能缺陷和衰竭。隨著我國人們生活水平的提高、人口老齡化、生活方式的改變，糖尿病已成為我國繼心血管病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，是嚴重威脅我國國民身體健康的公共衛生問題。糖尿病屬于中醫學中“消渴病”的范疇［1－2］。早在 2000 多年前，中醫學就有消渴病的記載，在隨后千百年的醫療實踐中，歷代醫家對消渴病的認識不斷深入，逐步形成了對本病病因、病機、診斷、治療等方面較為全面的認識。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，180只，20～25g雌雄各半。由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證:SCXK(黑)2008004。

1.2 藥品與試劑 四氧嘧啶(sigma進口分裝，批號200905);葡萄糖試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號20000106);二甲雙胍(澳大利亞艾華大藥房廠，批號A085E);0.9%生理鹽水 ;黃連水煎液(由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院提供)。

1.3 儀器 HH－S恒溫水浴鍋(江蘇醫療儀器廠);722分光光度計(上海第三分析儀器廠);KDC－40離心機(科大創新股份有限公司中佳分公司)。

2 實驗方法

2.1 胰島依賴型小鼠糖尿病模型建立［3］

健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質量20～25g，適應性喂養3天后，禁食不禁水24h，小鼠稱重，按體質量腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)制成高血糖模型。

2.2 分組與指標檢測

高血糖模型小鼠禁食正常給水16h后，測定各小鼠血糖，篩選合格小鼠按血糖值隨機分為6組:空白對照、模型組、二甲雙胍對照組(500mg/kg)、黃連低劑量組(10g/kg)、黃連中劑量組(20g/kg)、黃連高劑量組(40g/kg)，每組20只。各組每日灌胃給藥1次，空白對照、模型組給予等容量生理鹽水連續給藥14天。在第7、14天各組在藥前分別先測體質量，給藥后1h摘眼球采血，離心分離血清取血清以葡萄糖氧化酶法［4］測定血糖。14天后將所有小鼠都處死，摘取胰腺制作胰島細胞玻片［5］，鏡下觀察B細胞修復再生結果。

2.3 統計學處理

3 實驗結果

3.1 造模后各組對胰島依賴型糖尿病模型小鼠血糖的影響 結果見表1。

表1 (各組小鼠血清中血糖含量(mmol/L，s)

表1 (各組小鼠血清中血糖含量(mmol/L，s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 n 7天血糖(mol/l)14天血糖(mol/l)20 5.2 ±1.0 5.3 ±1.2模型組 18 28.9 ±7.8 29.7 ±8.9低劑量組 20 28.1 ±6.4 28.5 ±5.3中劑量組 20 27.1 ±5.5 27.5 ±7.9高劑量組 20 25.5 ±5.9* 21.8 ±6.1△西藥組 20 15.7±6.1 ＊＊ 13.7±5.6空白組△△

由表1可見，黃連水煎液能降低小鼠血糖，且成劑量依賴性，其中分別在第7、14天黃連高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，西藥組與模型組比較有極顯著性差異(P＜0.01)。

3.2 造模后各組對胰島依賴型糖尿病模型小鼠體質量的影響 結果見表2。

表2 造模后各組對胰島依賴型糖尿病模型小鼠體質量的影響(g，s)

表2 造模后各組對胰島依賴型糖尿病模型小鼠體質量的影響(g，s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 n 7天體質量(g)14天體質量(g)空白組20 27.25 ±0.8159 29.34 ±0.7865模型組 18 21.33 ±0.3941 20.21 ±0.2872低劑量組 20 21.97 ±0.1627 20.97 ±0.2534中劑量組 20 23.39 ±0.4178 21.13 ±0.5128高劑量組 20 26.11 ±0.3863* 23.21 ±0.4684△西藥組 20 27.12±1.1430＊＊ 25.78±0.9430△△

由表2可見，黃連水煎液對控制小鼠體質量下降有效，且成劑量依賴性，其中分別在第7、14天黃連高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，二甲雙胍組與模型組比較有極顯著性差異(P＜0.01)。

3.3 光鏡下各組對高血糖小鼠胰島B細胞結構的影響 結果見圖1。

圖1 光鏡下各組對高血糖小鼠胰島B細胞結構的影響(HE，400×)

4 討論

黃連［6］是毛茛科多年生草木植物黃連、三角葉黃連或云連之干燥根莖，始載于《神農本草經》，列為上品。該藥味苦性寒，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。有資料顯示，黃連有降血糖的作用［7］。其作用機理與改善胰島素抵抗有關，還有其抑制分化作用也提示黃連在增加細胞對葡萄糖攝取的同時不會引起脂肪的聚集而造成體質量增加，這對防治與胰島素抵抗相關的代謝綜合征或并發癥具有一定臨床意義［8］。但對胰島依賴型糖尿病是否有作用尚沒有研究資料報道。

本實驗結果顯示，黃連水煎液能降低胰島依賴型糖尿病模型小鼠的血糖，且呈劑量依賴性，但短期降糖效果不如二甲雙胍。能有效控制小鼠體質量下降，且呈劑量依賴性，但控制體質量下降的效果不如二甲雙胍。對胰島依賴型糖尿病模型小鼠的胰島B細胞形態有明顯的修復作用，且成劑量依賴性。

胰島B細胞形態(光鏡)顯示:胰島數量，體積，及胰島內細胞形態，黃連高劑量組最好，二甲雙胍組次之，黃連低劑量組最差。從結果中得之，黃連水煎液在降血糖方面有效果，且呈劑量依賴性，但不如二甲雙胍，對胰島B細胞形態有明顯的修復作用，且成劑量依賴性，為促進中西兩種醫學的相互溝通比較提供實驗依據。但由于實驗經費等原因，不能測胰島B細胞的生理功能(胰島素、C－肽)，具體情況有待進一步研究。陳建國［3］實驗結果證明，用200mg/kg四氧嘧啶組造模小鼠死亡率較低，模型成功率最高，血糖值穩定，糖尿病癥狀明顯。至于給藥前小鼠禁食的合適時間，研究表明，給藥前小鼠禁食16h為比較合適的禁食時間。研究還表明，雌、雄小鼠禁食16h、200mg/kg四氧嘧啶小鼠造模成功率高、空腹血糖值穩定，至于雌、雄性小鼠哪個做模型更為理想各種研究報道結果不一。綜上所述，四氧嘧啶致小鼠高血糖模型最佳條件為:四氧嘧啶劑量為200mg/kg，給藥前小鼠禁食16h，雌、雄性小鼠各半，選造模后第3天血糖值在15～30mmol/L小鼠為造模成功小鼠為宜。

在實驗過程中由于不明原因造成模型組2只老鼠死亡。究其原因可能與血糖值過高有關，但也有可能由于實驗過程中操作不當，但也不排除藥物所致，具體毒性有待進一步研究。

［1］涂玥.中藥防治糖尿病腎病在基因表達水平上的研究進展［J］.中醫藥學報，2011，39(5):93 －96.

［2］修麗梅，羅毅文，王振萍.糖尿病足的中醫研究進展［J］.中醫藥學報，2011，39(5):91 －93.

［3］陳建國.四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的研究［J］.衛生毒理學雜志，2004，18(2):99－100.

［4］克伯俊.藥物藥理學實驗方法與技術［M］.北京:北京化學工業出版社，2007:105－106.

［5］董靜霞.胰島B細胞、A細胞的快速雙染［J］.四川解剖學雜志，2001，9(2):99.

［6］梅全喜.現代中藥藥理手冊［M］.北京:中國中醫藥出版社，2008:135－136.

［7］任貽軍.黃連素的研究進展［J］.遼寧中醫藥大學學報，2009，11(1):50－51.

［8］李佳川.黃連改善胰島素抵抗藥效物質基礎研究［J］.中國中藥雜志，2010，35(14):1855－1858.