納米中藥對急性痛風性關節(jié)炎IL－1β、IL－6、IL－8影響的實驗研究

趙巴根那，董華，董清平

(1.內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000;2.黑龍江公安消防醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150090;3.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

痛風性關節(jié)炎是由于血尿酸升高導致尿酸鈉在關節(jié)內(nèi)形成微晶體沉淀，而引起的非特異性關節(jié)炎。是痛風典型的表現(xiàn)形式，急性期具有驟然發(fā)病和劇烈疼痛的特征，表現(xiàn)為關節(jié)紅、腫、熱、痛，多數(shù)患者的關節(jié)炎表現(xiàn)為發(fā)作與緩解交替，病程長者發(fā)作期長而緩解期短，甚至有的患者遷延不愈。反復發(fā)作的患者在病變部位可形成痛風石，關節(jié)畸形等。

本課題所要研究之方藥是作者根據(jù)中醫(yī)理論，結合多年治療痛風性關節(jié)炎驗方基礎上，結合現(xiàn)代中醫(yī)藥研究成果研究出的中藥外用方劑，臨床應用多年，顯示出良好的抗炎，消腫及鎮(zhèn)痛作用。本課題通過納米粉碎技術將中藥制成納米顆粒，外敷于痛風性關節(jié)炎模型大鼠病變部位，觀察創(chuàng)新中藥劑型與傳統(tǒng)中藥外敷劑型相比對痛風性關節(jié)炎關節(jié)炎 IL－1β、IL－6、IL－8表達的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

清潔級大鼠40只，雄性，體質(zhì)量(200±20)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。

1.2 實驗試劑

大鼠IL－1β定量ELISA試劑盒(美國RD公司進口分裝);大鼠IL－6定量ELISA試劑盒(美國RD公司進口分裝);大鼠IL－8定量ELISA試劑盒(美國RD公司進口分裝);扶他林(北京諾華制藥有限公司，國藥H19990291)。

1.3 主要儀器

DF－110型電子分析天平;LD25－2型自動平衡離心機;上海一恒電熱恒溫箱;醫(yī)用微波爐;RJ17－DG 5031酶聯(lián)免疫檢測儀。

1.4 實驗用藥

傳統(tǒng)中藥(由元胡、當歸、川芎、威靈仙、冰片等組成)由黑龍江中醫(yī)藥大學第附屬第一醫(yī)院制劑室進行普通級粉碎(80目)。精密稱取傳統(tǒng)中藥10g，加蒸餾水10ml混勻，制成均勻膏狀液體，密封，備用。

納米中藥(與傳統(tǒng)中藥藥物組成相同)由哈爾濱工業(yè)大學實驗室進行納米級粉碎。并在透射電鏡下檢測其粒度達到100納米以下。制備方法同傳統(tǒng)中藥。

2 方法

2.1 動物分組

將Wistar大鼠40只馴養(yǎng)1周后，按隨機數(shù)字表分成5組，即空白組8只，模型組8只，扶他林組8只，傳統(tǒng)中藥組8只，納米中藥組8只。自由攝食，并定期清潔、消毒。

2.2 模型制作及給藥方法

模型制作:用6號注射針在受試大鼠右后肢踝關節(jié)背側從45°方向刺入脛骨肌腱內(nèi)側，將0.2ml尿酸鈉溶液(濃度2.5g/100ml)注入到踝關節(jié)腔，形成痛風性關節(jié)炎模型。

空白組:不造模，不用藥;模型組:只造模，不用藥;扶他林組:造模后用扶他林軟膏外敷踝關節(jié)處，用膠布固定，每日1次，連續(xù)5天;傳統(tǒng)中藥組:造模后用普通級粉碎的中藥膏外敷踝關節(jié)，用膠布固定，每日1次，連續(xù)5天;納米中藥組:造模后用納米中藥膏外敷踝關節(jié)，用膠布固定，每日1次，連續(xù)5天。

2.3 標本采集及實驗方法

以上各組在第3天和第5天每組各取8只，關節(jié)腔剖開，切取關節(jié)滑膜，按比例加生理鹽水稀釋，放入組織勻漿機中進行勻漿，離心，取上清液，于－70℃冰箱保存待檢測IL－1、IL－6、IL－8、TNF－α含量。用酶聯(lián)免疫法測定各項指標。

2.4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析。

3 結果

3.1 一般情況

各組大鼠給藥前，皮毛光澤色白，精神佳，好動，飲食正常;造模后，模型組大鼠局部關節(jié)皮膚紅腫，活動減少，攝食及飲水次數(shù)也明顯減少;其他各組大鼠活動、攝食、飲水與平時略少，但比模型組好。

3.2 各組大鼠踝關節(jié)滑膜IL－1β的含量變化

表1 各組大鼠踝關節(jié)滑膜IL－1β的含量比較(s，pg/ml)

表1 各組大鼠踝關節(jié)滑膜IL－1β的含量比較(s，pg/ml)

注:與空白組比較，*P＜0.01;治療組與模型組比較，☆P＜0.01，納米中藥組與扶他林組比較，▲P＜0.05;與傳統(tǒng)中藥組比較，★P＜0.05。

組別 n 第3天 第5天空白組8 96.18 ±3.39 95.91 ±3.34模型組 8 142.89 ±4.27* 133.84 ±4.01*扶他林組 8 127.67±3.58＊☆ 109.74±3.25＊☆傳統(tǒng)中藥組 8 127.82±4.03＊☆ 110.99±3.32＊☆納米中藥組 8 111.78±3.72＊☆▲★ 96.45±3.63☆▲★

空白組大鼠關節(jié)滑膜IL－1β的含量較少，模型組與空白組比較IL－1β的含量明顯增多，第3、5天均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。說明造模成功。第3、5天，治療各組IL－1β與模型組比較，關節(jié)滑膜中IL－1β含量明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明各治療組均有降低大鼠足踝關節(jié)組織中IL－1β含量的作用。治療第3、5天，納米中藥組與扶他林組及傳統(tǒng)中藥組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。治療各時間點，扶他林組與傳統(tǒng)中藥組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。說明納米中藥組對降低急性痛風性關節(jié)炎病理過程中細胞因子IL－1β作用優(yōu)于扶他林組及傳統(tǒng)中藥組。

3.3 各組大鼠關節(jié)滑膜中細胞因子IL－6的含量見表2。

表2 各組大鼠關節(jié)滑膜中IL－6的含量比較(s，pg/ml)

表2 各組大鼠關節(jié)滑膜中IL－6的含量比較(s，pg/ml)

注:與空白組比較，*P＜0.01;與模型組比較，☆P＜0.01;納米中藥組與扶他林組比較，▲P＜0.05;與傳統(tǒng)中藥組比較，★P＜0.05。

組別 n 第3天 第5天空白組8 135.93 ±4.69 136.12 ±3.62模型組 8 170.41 ±3.85* 167.28 ±2.85*扶他林組 8 160.90±4.01＊☆ 151.39±3.06＊☆傳統(tǒng)中藥組 8 162.12±3.47＊☆ 153.05±3.19＊☆納米中藥組 8 152.93±3.35＊☆▲★ 140.85±2.17☆▲★

空白組大鼠關節(jié)滑膜中IL－6的含量較少，模型組含量較高，第3、5天，治療各組IL－6含量均呈下降趨勢，與模型組比較，大鼠踝關節(jié)滑膜中IL－6含量明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明各治療組均有降低大鼠足踝關節(jié)滑膜中IL－6含量的作用。治療第3、5天，納米中藥組與扶他林組及傳統(tǒng)中藥組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。治療各時間點，扶他林組與傳統(tǒng)中藥組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

3.4 各組大鼠踝關節(jié)滑膜中細胞因子IL－8的含量

表3 各組大鼠踝關節(jié)滑膜中細胞因子IL－8的含量比較(s，pg/ml)

表3 各組大鼠踝關節(jié)滑膜中細胞因子IL－8的含量比較(s，pg/ml)

注:治療組與空白組比較，*P＜0.01;與模型組比較，☆P＜0.01;納米中藥組與扶他林組比較，▲P＜0.05;與傳統(tǒng)中藥組比較，★P＜0.05。

組別 n 第3天 第5天空白組8 60.95 ±3.26 61.02 ±2.61模型組 8 127.84 ±3.71* 119.90 ±4.56*扶他林組 8 99.69±4.65＊☆ 84.99±5.22＊☆傳統(tǒng)中藥組 8 100.59 ±3.54＊☆ 86.25 ±4.27＊☆納米中藥組 8 89.45±2.94＊☆▲★ 67.37±3.78☆▲★

空白組大鼠踝關節(jié)滑膜中IL－8的含量較少，模型組與空白組比較IL－8的含量明顯增多，第3、5天，治療組與模型組比較，大鼠踝關節(jié)滑膜中IL－8含量明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明各治療組均有降低大鼠足踝關節(jié)滑膜中IL－8含量的作用。治療第3、5天，納米中藥組與扶他林組及傳統(tǒng)中藥組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。治療各時間點，扶他林組與傳統(tǒng)中藥組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。說明納米中藥組對降低急性痛風性關節(jié)炎病理過程中IL－8的作用優(yōu)于扶他林組及傳統(tǒng)中藥組。

4 討論

體內(nèi)的尿酸鈉鹽結晶(MUS)作用于血小板、中性粒細胞、滑膜細胞、單核細胞，刺激上述細胞釋放多種炎癥介質(zhì)，這些炎性細胞因子在痛風發(fā)病的過程中發(fā)揮重要作用。IL－1β、IL－8作為炎癥趨化因子和激活因子在痛風性關節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，認為IL－1β是前炎癥網(wǎng)鏈中的一級細胞因子，而IL－8是由IL－1β、TNF－α誘導的二級前炎癥細胞因子［2］。多種細胞因子參與了關節(jié)炎的發(fā)作，尤其是IL－1β、IL－6和IL－8。本實驗用尿酸鈉混懸液誘導大鼠產(chǎn)生急性痛風性關節(jié)炎，在觀察的5天中，模型組踝關節(jié)滑膜中細胞因子 IL－1β、IL－6、IL－8均有較高含量存在，表明細胞因子 IL－1β、IL－6、IL－8在MSUC誘導大鼠產(chǎn)生的急性痛風性關節(jié)炎中起重要作用。通過分析這些細胞因子含量的變化，對實驗中不同藥物療效進行評價。結果表明，納米中藥通過降低IL－1β、IL－6、IL－8等細胞因子是治療痛風性關節(jié)炎的可能的機制之一。

中醫(yī)學認為，痛風的發(fā)生，是本虛標實之證，脾腎雙虧為本，濕、熱、痰、濁、毒凝滯為標。以濕濁內(nèi)盛為主要病機。在急性期以濕熱濁毒閉阻經(jīng)脈、流注關節(jié)為主。治療重在清熱解毒、利濕瀉濁化瘀通絡［3－4］。本課題所要研究之方藥是作者根據(jù)中醫(yī)理論，結合多年治療痛風性關節(jié)炎驗方基礎上，結合現(xiàn)代中醫(yī)透皮吸收理論研究出的中藥外用方劑［5］。納米中藥貼劑由元胡、當歸、威靈仙、川芎、冰片等各等分組成。威靈仙為君藥，威靈仙，味辛具有祛風濕，通經(jīng)絡之功效，針對痛風濕郁絡瘀，不通則痛的病機特點，用其除濕、通絡、止痛之功。威靈仙還有的白頭翁素和白頭翁醇皂甙等能增加尿酸鹽 排泄，具有鎮(zhèn)痛，抗痛風作用。元胡為臣藥，味辛，具有行氣止痛之功，現(xiàn)代醫(yī)學研究證明，元胡具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。當歸、川芎為佐藥，現(xiàn)代研究證明，其具有降低毛細血管通透性，促進透皮吸收、抗炎止痛的作用。冰片為使藥，味辛、苦，具有開竅、清熱解毒之功效，引諸藥由表達里，現(xiàn)代研究表明，冰片具有抗炎止痛作用，又是很好的透皮促進劑。本課題通過納米粉碎技術將治療痛風性關節(jié)炎的中藥加工成納米級粒子。增加藥物的吸收率與透入性。實驗表明:運用納米中藥貼敷透入療法的局部給藥途徑，較快發(fā)揮作用，緩解關節(jié)疼痛，是治療痛風性關節(jié)炎的一個值得探討的課題。

［1］Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint arthritis in rats:Analter native animal modle of arthritis to that produce by Freud＇sadjuvant［J］.Pain，1987，28:379 －393.

［2］Shrestha M，Chiu MJ，Martin RL，et al.Treatment of acute gouty arthritis with intra － muscularke toralactromethamine［J］.Am J Emerg Med，1994，12:454 －456.

［3］景元偉.溫陽泄?jié)岱ㄖ委熗达L性關節(jié)炎急性發(fā)作［J］.中醫(yī)藥學報，2011，39(1):106 －107.

［4］孫貴才，謝晶日，吳洪亮.中藥聯(lián)合關節(jié)鏡下關節(jié)清理術治療持續(xù)性痛風性關節(jié)炎［J］.中醫(yī)藥學報，2011，39(5):108 －109.

［5］趙巴根那，董清平，董華.傳統(tǒng)中藥和納米中藥抗痛風貼劑體外透皮效率的比較［J］.中醫(yī)藥學報，2010，38(5):74 －75.