氯沙坦對冠心病外周血內皮祖細胞的動員作用及影響內皮功能的機制

陳 偉，談 紅，李曉燕，韋修瑩，楊 燕，陳英劍，張紅明

(1遼寧醫學院，遼寧錦州121001;2濟南軍區總醫院)

研究表明，內皮功能受損是動脈粥樣硬化(AS)發生的始動環節［1］，保護內皮功能可減輕或延緩AS的進展，改善預后［2］。內皮祖細胞(EPCs)可以通過分化為成熟的血管內皮促進各類生理、病理條件下的血管新生，參與損傷內膜的修復［3，4］。EPCs介導的損傷和修復反應假說成為目前AS研究的新熱點。通過藥物干預或細胞移植，增加EPCs的數量并改善其功能，可促進血管新生和修復。有研究顯示，ARB類藥物具有獨立于降壓之外的改善內皮功能的作用，但其作用機制尚不完全清楚。為此，我們對ARB類藥物氯沙坦對EPCs動員作用以及改善內皮功能的機制進行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2011年5～10月于濟南軍區總醫院心內科住院且經冠狀動脈造影確診為冠心病的患者65 例，男33 例、女32 例，年齡(56.8 ±11.7)歲;均排除有以下情況者:①近3個月內有急性心肌梗死、炎癥、急性出血或輸血史;②近3個月內有腦卒中或短暫性腦缺血發作病史;③血壓偏低(≤110/70 mmHg)且不能規律服用ARB類藥物的患者;④NYHA心功能分級為Ⅲ或Ⅳ級的心力衰竭患者;⑤有嚴重的肝、腎疾病的證據;⑥既往曾服用ACEI/ARB類藥物及ACEI/ARB藥物應用的禁忌證患者。65例患者隨機分為標準治療組32例和ARB治療組33例。同時另取31例經冠脈造影證實無冠心病者為健康對照組。三組性別、年齡差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 EPCs測定 抽取空腹靜脈血2 mL，置于真空EDTA抗凝血漿管中，4 h內送檢，經免疫熒光標記(5 μL Alexa Fluor 647 anti-human CD309，10 μL FITC anti-human CD34)、溶血素溶血及兩次離心后制成細胞懸液。采用流式細胞儀檢測，并對檢測結果用流式細胞儀分析軟件分析CD+34/VEGFR-2+EPCs在全血中所占的比例。

1.2.2 內皮舒張功能檢測 肱動脈血流介導的血管內皮舒張功能用流量介導血管擴張(FMD)百分率表示，FMD測定依據 Celermajer等［5］的原理，同時參考Park等［6］的方法稍加改良。于肘橫紋上方2～15 cm范圍內探測肱動脈，顯示肱動脈的縱軸，使其前、后壁的內膜顯示最清晰，肱動脈內徑(D0)在1 cm范圍內連續3次測量，取其均值。用氣壓止血帶縛于前臂上端，充氣至280 mmHg并保持5 min，隨后迅速減壓并在減壓后60 s內測定反應性充血后肱動脈內徑(D1)。測定過程中，探頭始終處于固定位置，且每次測量均取同一位置，由經驗豐富且對本實驗不知情的超聲科技師操作。FMD=(D1－D0)/D0×100%。

1.2.3 干預及隨訪 標準治療組和ARB治療組分別予常規藥物、氯沙坦+常規藥物干預治療。常規藥物:阿司匹林100 mg口服，1次/d;氯吡格雷75 mg口服，1次/d;單硝酸異山梨酯20 mg口服，2次/d;鹽酸曲美他嗪20 mg口服，3次/d;辛伐他汀20 mg口服，1次/d，晚間服用。氯沙坦治療方法為:氯沙坦50 mg口服，1次/d。治療8周后重復上述EPCs及FMD檢查。氯沙坦為杭州默沙東制藥有限公司生產。

1.2.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件進行統計處理，數值變量用ˉx±s表示，連續變量組間差異的比較應用ANOVA分析方法，頻數變量組間差異的比較應用Nemenyi檢驗，EPCs數量與FMD相關性應用Spearman相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組循環EPCs數量 在基線水平，冠心病患者循環EPCs數量［(0.040±0.017)%］明顯低于健康對照組［(0.072 ±0.018)%］(P ＜0.05)。治療 8周后，兩組循環EPCs數量較治療前均有不同程度的增加，ARB治療組外周血EPCs數量比標準治療組增加更明顯(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組基線水平與治療8周后EPCs數量比較(%，ˉx ±s)

2.2 各組肱動脈FMD變化 在基線水平，冠心病患者加壓反應性充血前后FMD［(5.63±1.92)%］明顯低于健康對照組［(8.68±2.25)%］(P ＜0.05)。治療8周后兩組FMD均較服藥前有明顯改善(P＜0.05)，但是ARB治療組改善比標準治療組更顯著(P＜0.05)。見表 2。

表2 兩組基線水平與治療8周后FMD比較(%，ˉx±s)

2.3 FMD與EPCs的相關性 基線水平冠心病患者FMD與循環EPCs數量呈正相關(r=0.57，P＜0.01)(圖1)。治療8周后，患者外周血EPCs數量變化與FMD 改變仍呈正相關(r=0.52，P＜0.01)(圖2)。

3 討論

圖1 基線水平EPCs數量與FMD的關系

圖2 治療后EPCs數量與FMD的關系

有研究表明，血管內皮功能失調是動脈粥樣硬化和冠心病發生、發展過程中的關鍵步驟。EPCs是能直接分化為成熟的血管內皮細胞的前體細胞，近來發現其參與出生后血管新生和再內皮化過程，對維持正常血管功能起重要作用。EPCs數量下降可能對各種心血管并發癥的發生起促進作用［7］。Hill等［8］對內皮功能及外周血EPCs數量進行臨床相關性研究時發現，二者呈顯著正相關，并指出循環EPCs的水平比Framinghan危險因素積分更能預測內皮細胞的功能。同時有研究表明，冠心病患者EPCs濃度與心肌梗死、住院率、血運重建治療和心源性死亡呈負相關，并且獨立于其他冠心病的高危因素［9］。因此，EPCs數量減少或活性的減低已經成為心血管危險因素和內皮功能異常的新的生物學標記［10］。以上研究均提示了EPCs在維持內皮功能完整中的重要作用。

本研究通過檢測冠心病患者外周血中EPCs水平的變化，探索冠心病患者藥物治療改善內皮功能、抗動脈粥樣硬化治療的新靶點。發現在基線水平，冠心病患者內皮功能指標FMD較健康對照組明顯低下，差異有統計學意義，內皮功能障礙與冠心病顯著相關，冠心病患者普遍存在內皮功能障礙。本研究還發現，內皮舒張功能FMD與EPC數量顯著相關，并且內皮舒張功能FMD隨EPCs數量增加而改善，呈正相關趨勢。同時，本研究還通過對比基線水平冠心病患者與健康對照組患者外周血中的EPCs水平，發現冠心病患者EPCs數量明顯減少，這可能使EPCs介導的血管內皮細胞損傷后的修復能力下降，從而參與了AS的發生和發展。

現有研究已證實，血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑類的抗高血壓藥物內皮功能改善作用的獲得不僅來源于血壓降低本身，而且可以通過阻斷血管緊張素Ⅱ介導的氧化應激、炎癥及胰島素抵抗，從而改善EPCs功能［11］，進一步改善內皮功能。同時，有動物實驗研究指出氯沙坦可以改善大鼠外周血EPCs功能并增加EPCs的數量［12］。本研究通過臨床觀察發現，長期服用氯沙坦可使冠心病患者外周血EPCs水平明顯增加，內皮功能得到顯著改善，且EPCs增加水平與內皮功能改善程度呈正相關。因此，我們推斷，臨床應用ARB類藥物氯沙坦還可以通過對EPCs的動員作用，進而改善內皮功能，從而為ARB類藥物在冠心病治療中的應用提供了新的理論依據。

［1］Vanhoutte PM.Endothelial dysfunction:the first step toward coronary arteriosclerosis［J］.Cir J，2009，73(4):595-601.

［2］Cozzolino M，Ketteler M，Zehnder D.The vitamin D system:a crosstalk between the heart and kidney［J］.Eur JHeart Fail，2010，12(10):1031-1041.

［3］Asahara T，Murohara T，Sullivan A，et al.Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis［J］.Science，1997，275(5302):964-967.

［4］ Suda T，Takakura N，Oike Y.Hematopoiesis and angiogeneisis［J］.Int J Hematol，2000，71(2):99-107.

［5］Celermajer DS，Sorensen KE，Gooch VM，et al.Non-invasive detection of endothelial dysfunction in children and adults at risk of atherosclerosis［J］.The Lancet，1992，340(8828):1111-1115.

［6］Park KY，Bae JH，Bassenge E，et al.Postprandial hypertriglyceridemia impairs endothelial function by enhanced oxidant stress［J］.Atherosclerosis，2001，155(2):517-523

［7］Bartnik M，Ryden L，Ferrari R，et al.The prevalence of abnormal glucose regulation in patients with coronary artery disease across Europe［J］.Eur Heart J，2004，25(21):1880-1890.

［8］Hill JM，Zalos G，Halcox JP，et al.Circulating endothelial porgenitor cells，vascular function，and cardiovascular risk［J］.N Engl J Med，2003，348(7):593-600.

［9］Chironi G，Walch L，Pernollet MG，et al.Decreased number of circulatingcells in asymptomatic subjects withpreclinical atherosclerosis［J］.Atherosclerosis，2007，191(1):115-120.

［10］ Pirro M，Schillaci G，Bagaglia F，et al.Microparticles derived from endothelial progenitor cells in patients at different cardiovascular risk［J］.Atherosclerosis，2008，197(2):757-767.

［11］Matsuura K，Hagiwara N.The pleiotropic effects of ARB in vascular endothelial progenitor cells［J］.Curr Vasc Pharmacol，2011，9(2):153-157.

［12］Yao EH，Fukuda N，Matsumoto T，et al.Losartan improves the impaired function of endothelial progenitor cells in hypertension via an antioxidant effect［J］.Hypertens Res，2007，30(11):1119-1128.