便秘型腸易激綜合征的SERT基因多態性及其與患者臨床療效的關系

張自翔，謝 軍，黃才斌，廖躍光，舒 濤，付曲波

(贛南醫學院第一附屬醫院，江西贛州341000)

5-羥色胺(5-HT)是一種調節消化道功能的神經遞質，參與調節胃腸道感覺、運動和分泌功能。5-HT轉運蛋白(SERT)可再攝取神經突觸間隙的5-HT，對其起滅活作用［1］。國外研究顯示，SERT基因啟動子區域(5-HTTLPR)與第2內含子可變數目串聯重復序列(VNTRs)存在的基因多態性可能與便秘型腸易激綜合征(C-IBS)的發病有關，并影響5-HT的藥物療效［2］。2005年1月 ～2007年5月，我們對比研究了C-IBS患者和健康人的SERT基因多態性，并探討替加色羅治療C-IBS的臨床療效與SERT基因多態性的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇贛南醫學院第一附屬醫院收治的C-IBS患者84例(C-IBS組)，均符合羅馬Ⅲ診斷標準［3］，男 37 例、女 59 例，年齡(44.2 ±13.1)歲，并經大便常規、細菌學檢查以及腸鏡排除器質性疾患。另選同期健康體檢者103例作為對照組，男41例、女62例，年齡(46.2±13.3)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 SERT基因型檢測 抽取研究對象外周靜脈血3 ml，EDTA抗凝，采用Omega公司(美國)DNA Blood Mini Kit試劑盒提取基因組DNA。采用PCR擴增，引物序列參照文獻［4］由上海博亞生物技術公司合成。5-HTTLPR多態性上游引物:5'-GGCGTTGCCGCTCTGAATGC-3'，下游引物:5'-GAGGGACTGAGCTGGACAACCAC-3'。PCR反應總體積為 25 μL，內含有2×PCR 緩沖液12.5μL，dNTPs各100 μmol/L，引物各5 pmol/μL，Taq DNA 聚合酶1.25 U(TaKaRa)，模板DNA 100 ng。反應條件為:95℃ 1 min、62 ℃ 30 s、72 ℃ 1 min，共35個循環，最后72℃延伸10 min。VNTRs多態性上游引物5'-GTCAG TATCACAGGCTGCGAG-3'，下游引物 5'-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGT-3'。PCR反應總體積為25 μL，內含有10×PCR 緩沖液2.5 μL，dNTPs各100 μmol/L，引物各 5 pmol/μL，Taq DNA 聚合酶 1 U(TaKaRa)，模板DNA 100 ng。反應條件為:95℃ 1 min，58 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共36個循環，最后72℃延伸10 min。產物檢測用2%瓊脂糖凝膠，80 V電壓電泳40 min，溴乙錠染色后，用凝膠成像儀觀察照相。根據電泳條帶長短判定基因型。

1.2.2 治療方法 從84例C-IBS患者中選擇近3個月癥狀明顯又未接受過藥物治療者65例，在2周基線期癥狀穩定后，給予4周替加色羅6 mg，2次/d，早餐及晚餐前0.5 h服用。于2周基線期和4周治療期間，采用日記卡由患者自己記錄每天腹痛和腹部不適等癥狀和排便的變化。患者主體癥狀評估是通過一個長度為10 cm的帶刻度的VAS自我評估表格來完成［5］。評分標準:完全緩解為0分，顯著緩解為1分，輕度緩解為2分，無變化為3分，惡化為4分。次要癥狀的評估包括腹痛或腹部不適、大便次數、大便性狀改變，采用7分法。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS15.0統計軟件;計量資料以ˉx±s表示，組間比較采用ANOVA和t檢驗;計數資料以百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SERT基因多態性

2.1.1 兩組Hard-Weinberg平衡檢驗結果 C-IBS組、對照組5-HTTLPR和VNTRs基因型、等位基因頻率期望值與觀察值比較差異無統計學意義(P＞0.05)，說明吻合度好，分布達到遺傳平衡，具有群體代表性。

2.1.2 啟動子區5-HTTLPR多態性位點 啟動子區5-HTTLPR共檢測出3個等位基因片斷，長度依次為484、528、572 bp。根據其長短定義為 S、L 和XL等位基因。共檢測到5種基因型，依次為S/S、S/L、S/XL、L/L、L/XL。見表1。

2.1.3 第2內含子區VNTRs多態性位點 第2內含子區VNTRs共檢測出2個等位基因片斷，長度依次為267、301 bp;共檢測到3種基因型，依次為10/10、12/10、12/12。重復串聯為9等位基因(250 bp)是已經報道的稀有片斷，本研究未發現。見表2。

表2 兩組第2內含子區VNTRs區基因型及等位基因分布比較［例(%)］

2.2 替加色羅療效與SERT基因多態性的關系替加色羅藥物治療65例，其中4例因各種原因退出試驗(1例腹痛，1例腹瀉，2例失訪)。61例完成試驗患者中，S/S基因型29例，S/L基因型17例，L/L基因型15例。①主體癥狀緩解有效率:S/S組為93.1%(27/29)，S/L 組為 70.6%(12/17)，L/L 組33.3%(5/15)，三組間比較差異有統計學意義(P＜0.01)。②主體癥狀評分:基線期S/S組、S/L組、L/L組主體癥狀評分分別為(3.02 ±0.38)、(3.00 ±0.41)、(3.08 ±0.39)分;組間比較，P ＞0.05。治療第4周后三組評分分別為(1.37 ±0.81)、(1.53 ±1.02)和(2.31 ±0.51)分，S/S 組和 S/L 組均比 L/L組療效好(P均＜0.05)。③次要癥狀療效比較:治療4周后，L/L組與S/S組或S/L組比較，腹痛或腹部不適、大便次數、大便性狀等癥狀評分均有統計學差異(P＜0.05)，S/S組和S/L組間無統計學差異(P ＞0.05)。

3 討論

研究表明［6］，5-HTTLPR的多態性能產生不同濃度的5-HT轉運蛋白;L/L基因型具有高轉錄活性，是L/S和 S/S基因型的1.4～1.7倍。研究顯示，5-HTTLPR、VNRTs區多態性在腸易激綜合征與健康人中的分布無差異性，但擁有S/S基因型患者更易患C-IBS，而L/S基因型患者易患腹瀉型腸易激綜合征(D-IBS)。Yeo等［2］研究發現美國白人5-HTTLPR的S/S基因型與腸易激綜合征相關，并可能是D-IBS發病的風險因子。我們的結果顯示，在漢族人群中SERT基因5-HTTLPR多態性與C-IBS相關，L/L基因型頻率顯著高于對照組，提示擁有L/L基因型的人群可能更易患C-IBS。推測L/L基因型高表達SERT蛋白，導致腸神經元突觸間隙內的5-HT過多攝取，神經信號傳導減弱，致使腸蠕動及分泌功能減弱，出現便秘。

國外研究報告，藥物代謝酶、轉運體及受體的基因多態性與藥物治療的個體差異性相關［7］。研究發現5-HTTLPR多態性能影響5-HT3受體拮抗劑(氟西汀)抗憂郁的療效，表現為L/L和S/L基因型療效較好而S/S基因型療效較差。Camilleri等［8］在一項對30例D-IBS患者進行阿洛司瓊治療結果顯示，L/L基因型患者的結腸轉運時間比S/L基因型的更慢，而在S/L與S/S基因型之間則無差異，提示SERT基因L/L基因型對5-HT3受體拮抗劑阿洛司瓊可顯示更好的療效。大量國內外研究證實替加色羅能有效緩解C-IBS患者總體癥狀及便秘、腹痛、腹部不適及腹脹等，安全性良好［9，10］。但臨床仍然不乏治療無效或欠佳的患者。本研究顯示，替加色羅治療S/S組和S/L組均比L/L組療效好，S/S組和L/S組之間療效無統計學差異。而且在單個癥狀的改善方面，S/S組和S/L組優于L/L組，這些數據與Lesch等［4］的研究基本一致。因此我們推測，L/L基因型的高表達致使突觸間隙的5-HT超前攝取，減少了5-HT與5-HT1PR和5-HT4R的結合，神經傳導減弱，腸運動和分泌減少。盡管替加色羅能高效結合5-HT4R，刺激蠕動反射，促進胃腸運動和腸分泌，但L/L基因型的高表達可能會部分抵消替加色羅的生物學效應，影響其藥物療效。本研究顯示SERT基因多態性與替加色羅藥物療效之間存在顯著相關性，5-HTTLPR區基因多態性可能成為CIBS患者實現個體化治療的一個參考指標。

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