老年胃癌患者區域轉移淋巴結中COX-2與多藥耐藥因子相關性分析

安 波 檀碧波 李 勇 范立僑 趙 群 張志棟 趙雪峰 賈 楠 王 冬

(河北醫科大學第四醫院，河北 石家莊 050011)

目前研究證實環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)已成為胃癌生物治療的重要靶目標，逆轉COX-2表達可有效逆轉腫瘤耐藥性、提高化療藥物效果〔1〕，說明COX-2與胃癌細胞的多藥耐藥性(Multidrug resistance，MDR)關系密切。前期研究已證實，老年人消化道腫瘤有其特征〔2〕，應根據其特點進行治療;其他前期研究也發現腫瘤進展過程中淋巴結轉移灶的COX-2和MDR因子存在與原發灶不同的異質性表達〔3，4〕，而關于COX-2在老年胃癌患者轉移淋巴結中表達特征及其與MDR因子的關系尚未見報道。因此，本研究檢測了老年胃癌患者原發灶、淋巴結轉移灶COX-2、MDR因子中P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽轉移酶(GST-π)、拓撲異構酶(TopoⅡα)的表達，并對其關系進行了比較。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2007年10月至2009年9月在河北醫科大學第四醫院外科住院手術并經病理證實的老年胃癌患者33例(≥60歲)，其中男 22例，女 11例，年齡 60～80〔平均(65.2±4.5)〕歲。取同期住院手術并經病理證實的低齡消化道腫瘤患者32例(＜60歲)作為對照組。所有病例術前均未接受放化療。每例腫瘤組織標本均經中性甲醛固定，常規石蠟包埋、切片，經蘇木素-伊紅(H-E)染色病理診斷。

1.2 方法 免疫組化染色測定 COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα的表達。鼠抗人COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉生物技術公司(美國ZYMED公司產品)，采用生物素-鏈霉親和素酶聯免疫吸附法(SP法)對腫瘤進行上述指標免疫組化染色，染色步驟嚴格按試劑盒說明書進行操作。結果判斷由兩位病理醫師雙盲法對切片進行觀察，每張切片隨機取5個(×400)高倍視野，每視野計數100個細胞。COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα 以細胞膜及(或)胞質呈棕黃色著染為染色陽性。按腫瘤細胞著色強度和陽性細胞率分別計分。著色強度計分:無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。腫瘤細胞陽性細胞率計分標準:陽性細胞≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，≥76%為4分;兩種計分標準所得分值的乘積為0或1表示陰性(－)，2～3為弱陽性(+)，4～7陽性()，≥8強陽性()。

1.3 統計學方法 應用SAS8.0統計軟件，等級資料使用Wilcoxon配對秩和檢驗、雙變量相關分析并計算Spearman等級相關系數。

2 結果

2.1 老年胃癌患者原發灶、轉移淋巴結COX-2和MDR因子的表達情況 檢測的4種蛋白質中，P-gp在淋巴結轉移灶的表達強于原發灶(S=88，P＜0.01)，而TopoⅡα在轉移灶中表達則明顯降低(S=－65，P＜0.05);COX-2、GST-π在原發灶和轉移灶中表達強度無明顯差異(均P＞0.05)。TopoⅡα表達在原發灶、轉移灶間存在正相關關系(r=0.4993，P＜0.01);其他三種蛋白在老年患者兩種組織中的表達則未見相關性(均P＞0.05)。見表1。

2.2 COX-2與三種MDR因子表達的關系 老年患者原發灶組織中COX-2與TopoⅡα呈負相關(r=－0.5889，P＜0.01)，P-gp與TopoⅡα呈正相關(r=0.3820，P＜0.05);其他因子之間未發現相關關系(均P＞0.05)。轉移灶各因子表達未發現相關關系(均P＞0.05)。

2.3 老年胃癌患者與對照組COX-2、MDR因子在原發灶及淋巴結轉移灶中表達的比較 原發灶中，老年組COX-2、P-gp和GST-π表達高于對照組(均P＜0.05);轉移灶中老年組COX-2、P-gp表達強于對照組(均P＜0.05)。其他因子表達比較未見明顯差異(均P＞0.05)。見表2。

表2 老年胃癌患者與對照組COX-2、MDR因子的表達情況(n)

3 討論

COX-2是一種誘導酶，在胃癌組織中表達增高，與腫瘤的侵襲、進展、轉移關系密切。研究發現，COX-2與MDR1/P-gp、TopoⅡα等MDR相關因子關系密切，可以調節其表達〔5，6〕。進展期胃癌淋巴結轉移率達60%～80%，已成為影響預后的獨立因素，而腫瘤切除后復發的根源是殘留和/或轉移灶〔7〕，因此明確胃癌淋巴結轉移灶COX-2表達與MDR因子的關系較原發灶研究意義更大。與低齡患者相比，老年胃癌患者具有分化程度高、凋亡率較高、預后較好等特征〔8〕。而迄今關于老年胃癌患者淋巴結轉移灶COX-2和MDR因子表達特征及相互關系的研究尚未見報道。本結果顯示，老年患者COX-2在原發灶、轉移灶間均有較高的陽性表達率，提示COX-2可作為老年胃癌生物治療的靶目標;結果同時顯示COX-2表達強度在原發灶和轉移灶中雖無明顯差異，但并無相關性，提示老年胃癌細胞在轉移過程中，COX-2已發生了異質性變化。對老年患者MDR因子表達的分析也得出類似結論。在對COX-2與各種MDR因子的關系分析中發現，原發灶、轉移灶中COX-2表達均與TopoⅡα呈負相關關系，但與P-gp無明顯相關性，與其他報道不同〔5，9〕。說明老年胃癌COX-2與各MDR因子的調控更為復雜，這種調控是多因素、網絡式調節共同作用的結果，故各種因子表現出的相關性在腫瘤轉移過程中隨大分子異質性變化而發生改變。

P-gp、GST-π、TopoⅡα被視為經典MDR相關因子。由P-gp介導的耐藥途徑通過藥泵作用將包括多種藥物外排而產生MDR〔10〕;GST-π可通過酶結合方式(解毒作用)將多種化療藥物從體內排出而導致MDR〔11〕;TopoⅡα是腫瘤化療的重要靶點，其表達上調可提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性〔12〕。本研究結果顯示這些MDR因子在老年胃癌轉移過程中出現了異質性變化，這種變化使腫瘤的MDR調控更為復雜，導致腫瘤的生物治療也因此難以實現。在對老年胃癌患者進行研究時，應充分考慮這種異質性變化的影響，了解轉移灶中COX-2、MDR因子的表達特征及變化規律，從而為逆轉胃癌細胞的MDR、抑制腫瘤惡性生物學行為奠定基礎。

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3 檀碧波，孫麗君，耿 瑋，等.胃癌淋巴結轉移灶COX-2和Bcl-2表達及其與體外化療敏感性的關系〔J〕.中華普通外科雜志，2009;24(11):930-3.

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7 Chen XL，Su BS，Sun RQ，et al.Relationship between expression and distribution of cyclooxygenase-2 and bcl-2 in human gastric adenocarcinoma〔J〕.World J Gastroenterol，2005;11(8):1228-31.

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