非酒精性脂肪性肝病兔血漿丙二醛、超氧化物歧化酶與硫化氫、一氧化氮的關系

李儒貴 雷飛飛 李云靜 謝杏榕 任永生 譚華炳

(湖北醫藥學院附屬人民醫院感染性疾病科，湖北 十堰 442000)

高脂血癥是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的主要原因。硫化氫(H2S)是機體心血管功能調節的新型氣體信號分子〔1〕，一氧化氮(NO)也是氣體信號分子，參與脂肪肝的發病。活性氧(ROS)是發生脂質過氧化損傷的基礎。超氧化物歧化酶(SOD)是體內一種重要的自由基清除劑，能夠平衡機體的ROS，避免超氧陰離子自由基濃度過高時引起的不良反應。脂質過氧化終產物丙二醛(MDA)可形成蛋白加合物，刺激機體產生抗體介導的免疫損傷。既往研究發現，SOD、MDA與肝臟脂質沉積量的相關〔2〕，脂肪肝模型兔SOD明顯下降，MDA明顯增加〔3〕。SOD、MDA與H2S、NO濃度的關系國內外未見報道。本文通過高脂飼料飼養建立不同程度兔NAFLD，觀察NAFLD兔血漿 SOD、MDA、H2S、NO關系。

1 材料與方法

1.1 一般材料 40只日本大耳白兔(月齡相似，雌雄各半)，體質量(2.2±0.2)kg，湖北醫藥學院醫學動物實驗中心提供(合格證號:No.00006546)。實驗地點:湖北醫藥學院臨床醫學研究所，湖北省十堰市實驗動物中心(設施使用證明號:No.00008391)。普通飼料由湖北醫藥學院動物實驗中心提供。高脂飼料由湖北醫藥學院醫學動物實驗中心按實驗配方配制成成品使用(配方:86%普通飼料+2%膽固醇+6%蛋黃+6%豬油)。膽固醇購自北京雙旋生物培養基制品廠(批號:2009.07.15)。豬油由市售板油自行煉制而成。蛋黃粉市售雞蛋自行制作。SOD、MDA、NO檢測試劑盒均購自南京建成科技有限公司。

1.2 造模及分組 兔購入普通飼料飼養觀察1 w，無不良反應后，隨機數字法將40只兔分為3組。重度NAFLD組(重度組，n=14):每兔每天高脂飼料160 g。輕度NAFLD組(輕度組，n=13):每兔每天高脂飼料80 g+普通飼料80 g。對照組(n=13):每兔每天普通飼料160 g。上午9時、下午5時各組分別投入一半飼料。全部動物單籠、單兔喂養，自由飲水。建立重度、輕度NAFLD模型、對照模型。實驗周期為13 w。重度高脂血癥組飼養至9 w時死亡1只，由于無相關血液標本，統計時將重度組死亡動物的實驗前資料剔除，各組實有動物13只。

1.3 標本采集與檢測 試驗結束，10%的水合氯醛耳緣靜脈麻醉，腹主動脈采集血液5 ml于肝素管，離心取血漿，血漿保存于－20℃的冰柜中待檢。檢測血漿SOD(黃嘌呤氧化酶法)、MDA(TBA法)、NO(硝酸還原法)。血漿H2S(去蛋白法)檢測標本送北京大學生理學系檢測。

1.4 統計學方法 所有數據采用SPSS9.0統計學軟件處理，數據以±s表示，治療前后組內及組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 血漿H2S水平 重、輕度組血漿H2S較對照組明顯下降(P＜0.01);重度組低于輕度組但無差異(P＞0.05)。見表1。

表1 三組兔飼養后MDA、SOD、H2S、NO變化( ± s，n=13)

表1 三組兔飼養后MDA、SOD、H2S、NO變化( ± s，n=13)

與對照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與輕度組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01

組別 MDA(noml/ml) SOD(EAU) H2S(μmol/L) NO(μmol/L)重度組 4.42±1.572)3) 46.68±12.462)4)51.12±5.972)159.32±10.12)4)3.42±1.22 80.24±9.56 77.24±2.24 92.5±16.7輕度組 3.84±1.481) 68.78±12.981) 57.51±5.872) 121.9±14.62)對照組

2.2 血漿MDA、SOD變化 重、輕度組MDA較對照組明顯增高(P＜0.01，P＜0.05)，且重度組明顯高于輕度組(P＜0.05)。重、輕度組SOD活力較對照組明顯減低，重度組明顯低于輕度組 (均P＜0.01)，見表1。

2.3 血漿NO濃度 重、輕度組NO較對照組明顯升高(P＜0.01)，重度組高于輕度組 (P＜0.01)。表1。

3 討論

脂質過氧化在高脂血癥導致以上病變的發生、發展過程中發揮重要作用。H2S廣泛參與機體多種生理和病理過程，且在許多器官和系統中發揮清除氧自由基、減少脂質過氧化物和保護組織的作用〔4〕。本研究試圖血漿脂質過氧化與H2S、NO的關系，為高脂血癥相關并發癥的防治提供理論依據。

內源性H2S是體內含硫氨基酸如蛋氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸等在 5′－磷酸吡哆醛依賴酶〔包括胱硫醚－β－合酶(CBS)、胱硫醚－γ－裂解酶(CSE)〕作用下產生的代謝產物〔5〕。肝臟是體內H2S生成的主要部位，對維持循環血液中H2S的濃度起到重要作用。本研究發現重度、輕度NAFLD兔血漿H2S水平下降，提示肝臟H2S釋放入血下降。至于重度組和輕度組比較無差異可能與其他組織分泌的H2S干擾有關，或者有其他機制有待研究。

高脂喂養脂肪肝大鼠肝臟中誘導性一氧化氮合成酶(iNOS)活性增強，以及誘導生成的NO水平也增高，iNOS、NO在脂肪肝肝損害中發揮重要作用〔6〕。NO過低，導致機體生理功能紊亂，過高則作為一種自由基對機體產生毒害〔7〕。本研究的缺陷是沒有研究內皮型一氧化氮合酶和誘導型一氧化氮合酶的表達。

SOD、MDA改變提示隨NAFLD進展，過氧化反應上升，抗氧化能力下降。本研究提示，與SOD/MDA抗氧化/過氧化平衡相同，H2S/NO是抗氧化/過氧化平衡氣體信號分子，在高脂血癥相關性疾病發生、發展中發揮作用，值得深入關注。

1 耿 彬，閆 輝，鐘光珍，等.硫化氫——心血管功能調節的新型氣體信號分子〔J〕.北京大學學報:醫學版，2004;36(1):106.

2 王一平，譚華炳，賀 琴，等.SOD、MDA與肝臟脂質沉積量的相關性研究〔J〕. 西南國防醫藥，2009;19(4):365－7.

3 王 威，江海濤，史 紅，等.疏肝導濁方對脂肪肝家兔的 AST、ALT、ALP、NO、SOD 和 MDA 的影響〔J〕.天津中醫藥雜志，2010;27(1):9－11.

4 王洪瑾，李 毅.硫化氫與氧化應激〔J〕.醫學研究生學報，2011;24(4):433－6.

5 Truong DH，Mihajlovic A，Gunness P，et al.Prevention of hydrogen sulfide(H2S) －induced mouse lethality and cytotoxicity by hydroxocobalamin(vitamin B(12a)〔J〕.Toxicology，2007;242(1):16－22.

6 呂天英，盧震亞.非酒精性脂肪性肝病大鼠肝組織NO和iNOS的變化〔J〕. 浙江預防醫學，2009;21(4):9－11.

7 Cary SP，Winger JA，Derbyshire ER，et al.Nitric oxide signaling:no longer simply on or off〔J〕.Trends Biochem Sci，2006;31(4):231－9.