老年宮頸癌患者組織和血清血管內皮生長因子－C檢測及意義

張頌婕 劉路玖 王渠源 邵艷萍 曲長萍 (吉林大學第二醫院婦產科，吉林 長春 3004)

宮頸癌最常見轉移方式是淋巴轉移，宮頸癌早期就可發生淋巴轉移，而是否存在淋巴結轉移是影響宮頸癌患者預后的重要因素。研究表明血管內皮生長因子(VEGF)-C是一種特異性淋巴管生成因子，它可以特異性促進腫瘤細胞新生淋巴管形成〔1〕。研究證明組織中VEGF-C表達與宮頸癌的相關性及血清中VEGF-C的表達與宮頸癌的相關性〔2，3〕。本實驗通過檢測組織和血清VEGF-C在各級宮頸病變中的表達水平，來探究VEGF-C在宮頸各級病變(組織及血清)表達差異及其在宮頸癌有、無淋巴結轉移病變組織和血清表達差異性，以探索一種用于評估宮頸組織有無惡變及宮頸癌患者是否存在早期淋巴結轉移的敏感檢測方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年11月至2011年11月本院婦科患者72例〔其中非宮頸疾病13例，宮頸上皮內瘤變(CINⅡ～Ⅲ)18例、宮頸癌無淋巴結轉移31例，宮頸癌淋巴結轉移10例〕術前血清和術后宮頸組織。年齡60～69(平均64.73)歲。其中所有宮頸癌患者病理回報均為鱗狀細胞癌。所有患者術前均無輸血史，未接受過放、化療。

1.2 方法 術前抽取肘靜脈血4 ml，凝固后以2 000 r/min離心10 min分離血清標本，取上清液置于－20℃環境內保存待測。術后取病變宮頸組織，甲醛溶液中固定，常規脫水，石蠟包埋，4 μm組織切片備用。血清VEGF-C濃度測定采用雙抗體夾心ELISA法，試劑盒為美國R＆D公司產品。組織VEGF-C表達測定采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法(S-P法)，按兔抗人VEGF-C多克隆抗體試劑盒說明書。

1.3 主要試劑及儀器 兔抗人VEGF-C多克隆抗體;Olympus PM-10AO全自動顯微照相裝置 (日本);人VEGF-C ELISA試劑盒 R＆D systems美國;酶標儀Model 680全自動高精度BIO-RAD美國。免疫組化嚴格按照兔抗人VEGF-C多克隆抗體說明書;血清嚴格按照人VEGF-C ELISA試劑盒說明書。

1.4 結果判定 組織VEGF-C表達采用光密度值表示，血清VEGF-C表達采用吸光度值(OD)計算濃度(pg/ml)表示。

1.5 統計學分析 采用SPSS13.0統計軟件，數據以±s表示。經方差分析后進行多組間單向方差分析(One-way ANOVA)和Pearson相關性分析。

2 結果

2.1 各組組織和血清VEGF-C表達水平比較 VEGF-C主要表達于宮頸腫瘤細胞胞質上，陽性染色為棕黃色顆粒狀。在正常宮頸組織中VEGF-C不表達。在CINⅡ～Ⅲ組患者宮頸組織上皮內可見少量棕黃色顆粒狀VEGF-C表達，而在宮頸鱗癌組宮頸組織上皮中VEGF-C表達較高，呈局灶性或彌散性分布。組織和血清中VEGF-C表達強度在正常宮頸組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌無淋巴轉移組、宮頸癌淋巴轉移組的表達依次顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)。宮頸癌有無淋巴結轉移組間差異顯著，宮頸癌無淋巴轉移組與正常宮頸組和CINIⅡ～Ⅲ組差異顯著，但CINⅡ～Ⅲ組和正常宮頸組無顯著差異。見表1。

2.2 組織和血清中VEGF-C表達相關性 Pearson相關系數R=0.725，P=0.000(雙側)，血清VEGF-C表達與組織VEGF-C表達呈正相關。

表1 各組組織和血清VEGF-C表達比較(±s)

表1 各組組織和血清VEGF-C表達比較(±s)

組別 n 組織VEGF-C(吸光度) t值 P值 血清VEGF-C(pg/ml) t值 P值正常宮頸組13 2 748.54±2 018.12 － － 10 476.30±1 092.55 － －CINⅡ～Ⅲ組 18 10 912.39±4 287.65 6.354 0.000 10 965.62±1 032.82 1.270 0.214宮頸癌無淋巴轉移組 31 26 549.45±4 962.78 11.157 0.000 12 054.10±703.34 4.387 0.000宮頸癌淋巴轉移組 10 30 899.40±6 047.38 2.286 0.028 13 577.03±937.91 5.476 0.000合計72 18 946.96±11 397.30 － － 11 709.05±1 319.29 － －

3 討論

VEGF-C是VEGF家族中特異性淋巴管生成因子，近年來在多種人類腫瘤中被檢測到，其與腫瘤淋巴轉移密切相關〔4，5〕。VEGF-C可分別與VEGF受體(VEGFR)-2和VEGFR-3結合。其中VEGFR-3屬于酪氨酸激酶受體，作用于淋巴內皮，VEGF-C與VEGFR-3結合后，起淋巴生成因子的作用，通過激活VEGFR-3誘導淋巴管內皮細胞增殖、遷徙，促進實體瘤內淋巴管新生，促進腫瘤細胞進入淋巴管并通過淋巴系統向全身擴散〔1，6〕。VEGF-C是目前發現的促淋巴管生成作用最強的因子。相關研究表明VEGF-C在例如乳腺癌、甲狀腺癌、胃癌、非小細胞性肺癌、結腸癌等多種實體腫瘤中均呈高表達，且其與腫瘤淋巴轉移密切相關〔5～9〕。

宮頸癌最常見轉移方式為淋巴轉移，而盆腔淋巴結轉移是影響宮頸癌預后的主要危險因素。如果可以在治療前對宮頸癌患者是否存在淋巴結轉移進行正確評估，可以更完善地制定治療方案，改善患者預后。

在正常宮頸組織中VEGF-C不表達，而在宮頸癌組織中呈高表達。石小燕等〔10〕發現，隨著宮頸病變逐級進展，VEGF-C表達也逐級增強，提示VEGF-C可能在宮頸癌惡變過程中起促進作用。李艷麗等〔11〕實驗表明，若將宮頸上皮內瘤變及宮頸癌視作一個整體，那么VEGF-C作為其標志物的敏感度達100%，陰性預測值也達100%，說明將VEGF-C作為CIN(包括宮頸癌)的生物標志物有一定價值。Hashimoto等〔2〕研究表明，宮頸癌存在深部浸潤、盆腔淋巴結轉移或淋巴管腔受累的患者宮頸組織中VEGF-C表達升高，有盆腔淋巴結轉移患者宮頸組織中VEGF-C mRNA表達也明顯升高，且預后不良。Ueda等〔12〕認為VEGF-C表達水平與惡性腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移等有關。國內外還有許多研究也可以表明VEGF-C表達增高與宮頸癌浸潤深度及淋巴結轉移情況具有相關性〔3，13，14〕。

VEGF-C表達水平與腫瘤浸潤深度有關，浸潤深度越深VEGF-C表達越高。本實驗結果支持 Hashimoto等〔2〕觀點，VEGF-C表達增高可能與宮頸組織惡變有關，檢測患者宮頸組織VEGF-C表達水平，有可能提示宮頸是否存在惡變，該方法可能成為宮頸癌早期診斷的有用指標，同時宮頸癌組織中VEGFC高表達也與宮頸癌淋巴結轉移有關，檢測其表達水平可能對宮頸癌淋巴結轉移的評估具有臨床意義。

在對非小細胞性肺癌、食管癌、乳腺癌及胃癌等惡性腫瘤患者的血清中VEGF-C的表達水平的研究發現，血清VEGF-C表達也與癌癥進展及淋巴結轉移具有一定相關性〔7～9〕。

Mathur等〔12〕研究發現:治療前血清中VEGF-C水平與腫瘤復發或持續存在有關，宮頸癌患者血清VEGF-C表達水平有可能成為一種術前評估宮頸癌患者是否存在淋巴轉移的指標。崔友紅等〔13〕研究發現，宮頸癌患者血清VEGF-C表達明顯高于子宮肌瘤患者。同時發現血清VEGF-C與CK19表達呈正相關，CK19是一種與淋巴結微轉移相關的因子。因此認為血清中VEGF-C表達與前哨淋巴結微轉移相關。Mitsuhashi等〔14〕認為，血清VEGF-C表達水平與腫瘤大小及分期呈顯著正相關，血清VEGF-C可成為宮頸癌的一種腫瘤標志物。本實驗結果與Mathur等〔12〕研究結論相似，提示血清中VEGF-C的水平有可能成為一種用于術前評估宮頸癌患者是否存在淋巴結轉移的檢測指標。綜上，檢測血清VEGF-C表達水平有可能成為一種替代組織檢測的更簡便、創傷性更小、可重復性更高的方法。

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3 Mathur SP，Mathur RS，Gray EA，et al.Serum vascular endothelial growth factor C(VEGF-C)as a specific biomarker for advanced cervical cancer:Relationship to insulin-like growth factor Ⅱ (IGF-Ⅱ)，IGF binding protein 3(IGF-BP3)and VEGF-B〔J〕.Gynecol Oncol，2005;98:467-83.

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10 石小燕，李紅雨，柳友清，等.VEGF-C及其受體flt-4在宮頸癌淋巴管生成及轉移中的作用〔J〕.中國腫瘤臨床，2005;32(4):.

11 李艷麗，鄭紅兵，李允光，等.VEGF-C在宮頸病變中的表達及其與高危型HPv感染的相關性〔J〕.現代腫瘤醫學，2007;15(6):834-7.

12 Ueda M，Terai Y，Yamashita Y，et al.Correlation between vascular endothelial growth factor-C expression and invasion phenotype in cervical carcinomas〔J〕.Int J Cancer，2002;98(3):335-43.

13 崔友紅.CK19mRNA與VEGF-C在早期宮頸癌前哨淋巴結微轉移中的研究〔D〕.昆明醫學院臨床腫瘤學院，2009.

14 Mitsuhashi A，Suzuka K，Yamazawa K，et al.Serum vascular endothelial growth factor(VEGF-C)and VEGF-C levels as tumor markers in patients with cervical carcinoma〔J〕.Cancer，2005;103(4):724-30.