兒童喉乳頭狀瘤方的急性毒理實驗

馬 捷 李 峰 王 軍 劉 燕 馬麗晶 渠曉麗

1.北京中醫藥大學 國家中醫藥管理局中醫科研三級實驗室，北京 100029；2.首都醫科大學附屬北京同仁醫院耳鼻咽喉頭頸外科 耳鼻咽喉頭頸外科學教育部重點實驗室，北京 100730；3.武警后勤學院附屬醫院，天津 300162

喉乳頭狀瘤（laryngeal papilloma，LP）是一種非浸潤性的良性上皮瘤，其臨床可分為成人型（adult-onset laryngeal papilloma，ALP）及兒童型（juvenile-onset laryngeal papilloma，JLP）兩類。幼兒型以多發性居多，且發病年齡多在7歲之前。由于本病易造成呼吸道梗阻，且易復發，常需多次手術，故給患者及其家庭造成了沉重的經濟與心理負擔。隨著近年來性病和傳染性疾病的增多，兒童復發性呼吸道乳頭狀瘤病（juvenile onset recurrent respiratory papillomatosis，JORRP） 也有明顯增多的趨勢。目前，現在國內外治療本病，以手術切除術為主，在術后應用免疫抑制劑，防止其復發，但療效不甚理想，所以有必要從祖國醫學中尋找有效的治療途徑，本研究結合中醫喉科與兒科的特殊理論，針對本病“邪毒瘀滯，痰濕阻喉”的核心病機，立“化痰祛濕，扶正解毒”為法，擬“兒童喉乳頭狀瘤方”（蒲公英、連翹、半夏、薏艸以仁、浙貝母、白花蛇舌草、青果、地膚子、土茯苓、生甘草、西洋參、陳皮、三七、劉寄奴）。其方在臨床中應用多年，具有顯著效果。為了明確本方的毒副作用及安全性，進一步指導臨床用藥，故進行急性毒理學實驗研究。

1 儀器與試藥

1.1 實驗動物

昆明種（KM）小白鼠 40 只，清潔級，體重為（20±2）g，2 個月齡，均由北京中醫藥大學動物實驗中心提供 [許可證號：SYXK（京）2006-0012]。隨機將其分為兩組，對照組和中藥組，每組20只，雌雄各半。兩組動物飼料及消毒墊料一致。

1.2 受試藥物

兒童喉乳頭狀瘤方由蒲公英、連翹、半夏、浙貝母、白花蛇舌草、青果、土茯苓、生甘草等藥組成。藥物飲片由北京中醫藥大學第一臨床醫學院藥劑科提供，藥材來源于北京康仁堂藥業有限公司（批號：110401，生產日期：2011年4月16日）。

1.3 實驗條件

實驗小鼠按雌雄分籠，每籠5只。室溫：15～25℃，濕度：60%～70%。給藥前后，以全價顆粒飼料喂養，自由飲水。

1.4 主要器材

灌胃器、燒杯、量筒、電子天平等。

2 方法與結果

2.1 方法

2.1.1 急性毒理實驗

2.1.1.1 預實驗 按急性毒理實驗方法[1-2]，選用KM小鼠40只，禁食、不禁水12 h。把中藥配制成最大濃度的混懸液，含生藥2.633 g/mL（以不堵塞灌胃器為限度）。每只小鼠每次灌胃約為0.8 mL/20 g（體重），24 h內灌胃3次，間隔4 h。然后按常規飼養，并觀察小鼠的毒性反應情況（外觀、活動、呼吸、分泌物、排便、死亡等），且連續稱重7 d。因以最大給藥濃度、最大給藥容量，均未測出半數致死量（LD50），故做最大給藥量實驗。

2.1.1.2 最大給藥量實驗 在預試驗的基礎上，采用最大給藥量法，選用昆明種小白鼠20只，雌雄各半，體重（20±2）g。 給藥前均禁食、不禁水12 h。并按預實驗方法配藥，以每只小鼠給予最大生藥濃度2.633 g/mL，最大體積0.8 mL/20 g的藥液灌胃，以觀察14 d內小鼠的外觀、飲食、活動、排泄、死亡等情況。14 d后以頸椎脫臼法處死小鼠，解剖后觀察其重要臟器（心、肝、脾、肺、腎、胃、腸等）的變化。

2.1.2 統計學方法

采用Epidata 2.0建立數據庫，并進行雙人雙錄入核對；數據采用SPSS 17.0軟件進行統計學處理。各項指標中，計量資料數據以均數±標準差（）表示，采用t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2.2 結果

2.2.1 一般表現

給藥后14 d內，實驗組小鼠飲食正常，皮毛光滑，活動自如，大小便正常，無異常分泌物，其呼吸系統（呼吸平穩）、神經系統（未見廝打及嗜睡情況）、消化系統（排便正常，給藥當天為棕褐色便，2～3 d后均恢復正常，未見腹瀉）與泌尿系統（尿量及顏色正常）均未見異常，小鼠全部存活。其每天最大給藥量為290.666 g/kg，相當于臨床兒童用藥量的206倍。

2.2.2 體重變化情況

給藥后14 d內，兩組小鼠體重均增加，通過分析給藥后7、14 d兩個時間內中藥組與對照組的體重變化，發現兩組體重差異無統計學意義（P>0.05），兩組小鼠體重均隨時間呈現遞增的趨勢，且雄性體重均高于雌性。14 d內中藥組雄性小鼠體重增長（8.02±1.16）g，對照組雄性小鼠體重增長（8.21±1.03）g，兩組體重增長差異無統計學意義（P>0.05）。14 d內中藥組雌性小鼠體重增長（3.14±1.35）g，對照組雌性小鼠體重增長（3.04±1.17）g，兩組體重增長差異無統計學意義（P>0.05）。兩組小鼠體重變化均在生理范圍之內。見表1。

2.2.3 主要臟器觀察

對兩組小鼠進行斷頸處死后，進行實體解剖，對心、肝、脾、肺、腎、腸道進行觀察，均未見臟器腫大、萎縮、壞死等異?，F象，主要臟器外形完整，無任何不良病變。提示本藥無毒，其臨床用藥量是一個安全的劑量，臨床用藥安全。

3 討論

本方對術后患兒的治療有顯著的意義。方以“二陳湯”為基礎進行化裁。“二陳湯”為宋代《太平惠民合劑局方》所載。其中，半夏，燥濕化痰；陳皮，理氣燥濕，順氣消痰；甘草，可潤肺和中，而本方用生者，取其“用氣平而瀉火”之意[3]。據研究發現，本病多以“痰濕阻喉”證為主，《醫方集解》曾言：“治痰通用二陳”[4]，故用本方頗為妥當。同時，方中又加入薏苡仁，甘淡利濕，而兼顧小兒脾胃；浙貝母，體堅味苦，以祛風痰；蒲公英、連翹、白花蛇舌草，三者可清熱解毒，消腫散結，且白花蛇舌草一味，可專治咽喉腫痛；三七、劉寄奴祛瘀生新；青果，解毒利咽；地膚子、土茯苓，利濕消腫；西洋參，以顧護小兒氣陰之不足。全方共湊“化痰祛瘀，扶正解毒”之效。

表1 最大給藥量實驗體重變化表（，g）

表1 最大給藥量實驗體重變化表（，g）

通過對相關單味藥文獻分析，本方中諸藥藥性有抗炎、抗腫瘤、抗癌的功效。其中，連翹、浙貝母、生甘草尚有抗病毒的效用。另外，本病與尖銳濕疣同屬一種病毒感染，所以，在條目中又列“治疣”一項，并發現本方中有四味藥有此特效。據現代藥理學研究表明，白花蛇舌草中含多糖類物質，對淋巴細胞具有刺激作用，可顯著增強機體免疫活性，具有抑制腫瘤細胞增殖的功效，而且，據研究其在體內能刺激網狀內皮系統增生，促進抗體形成，使網狀細胞、白細胞的吞噬能力增強，從而達到抗病毒、抗炎的作用。同時，土茯苓中的總皂苷成分，具有抗腫瘤作用，而總黃酮成分可以抗脂質過氧化并且可以增加機體免疫能力[5]。另據體內和體外實驗研究證明：西洋參中的單體化合物游離色氨酸、游離脂肪酸和多糖類物質均具有抗腫瘤活性[6-7]，臨床應用獲得滿意的療效。青果中含有黃酮類物質及沒食子酸，是其抑菌防腐的主要藥效成分，有較好的抗炎、鎮痛和抑菌作用，據臨床報道，其對慢性咽喉腫痛亦有佳效[8-9]。佐藥甘草中含有甘草甜素，可發揮類激素作用，對多種病毒有明顯的抑制效果，并可有效提高機體的免疫功能。

本研究在預實驗中未測出半數致死量（LD50），故進行最大給藥量實驗。結果提示，小鼠每天最大給藥量為290.666 g/kg，相當于臨床兒童用藥量的206倍，14 d后模型小鼠在全身體征，內臟狀況觀察均為出現異常情況。并隔日測量體重，分析兩組小鼠體重變化，提示兩組體重無顯著性差異，中藥組體重隨時間呈遞增趨勢，雄性高于雌性。與正常組相吻合。同時，本研究還發現，在給藥期間，小鼠精神狀態較穩定，未見撕咬等情況，提示本藥未見精神毒性作用。通過上述分析，本方對于喉乳頭狀瘤病兒童的臨床應用，較為安全。

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