牛妊娠早期精準(zhǔn)ELISA檢測

Kathy Velek Shona Michaud Kate Boucher Anna Rice Lori Plourde Nevena Djuranovic Christoph Egli Peter Welles Valerie Leathers

1.IDEXX Laboratories Inc.,Westbrook-Maine 04092；2.IDEXX Switzerland AG,Liebefeld-Bern 3097

精準(zhǔn)及時的牛妊娠檢測，是當(dāng)今牧場繁殖管理方案的一項重要組成部分。獸醫(yī)和牧場主通過檢測盡早發(fā)現(xiàn)空懷牛，能夠及時配種并縮短胎間距，從而幫助牧場實現(xiàn)產(chǎn)奶量和利潤的最大化（圖1）。

另外，通過頻繁妊娠檢測也能夠優(yōu)化胎間距，空懷天數(shù)每增加1d，養(yǎng)殖成本可增加32.9元/d或5美元/d。愛德士公司研發(fā)了ELISA妊娠檢測方法，最早能夠在配種后28d精準(zhǔn)檢測，為獸醫(yī)和牧場主提供了另外一種空懷牛早期鑒定的工具。

1 材料與方法

愛德士牛妊娠檢測試劑盒，以牛血清或血漿中存在的早期妊娠相關(guān)糖蛋白（PAGs）作為判斷妊娠的標(biāo)志。試劑盒中抗-PAG抗體包被在固相板上，結(jié)合樣品中可能含有的PAGs。生物素偶聯(lián)PAG二抗與鏈霉親和素辣根過氧化物酶（SA-HRP）一起作為檢測試劑。TMB底物作為含有PAG樣本的顯色劑，并用終止液停止酶促反應(yīng)。在450nm波長下讀數(shù)，顯色超過試驗閾值的孔被認定為陽性，表明牛妊娠；若沒有顯色或顯色不明顯，表明牛空懷（圖2）。

從奶牛場或肉牛場采集血清或血漿，來評估愛德士公司妊娠檢測試劑的敏感性和特異性。實驗中總共使用783份血清樣本和1001份血漿樣本，這些樣本來自美國各地，包括緬因州、佛蒙特州、紐約州、威斯康星州、賓尼法吉亞州、華盛頓州、印第安納州以及瑞士和中國。根據(jù)產(chǎn)品說明書操作，用愛德士ELISA檢測樣品。牛的妊娠狀況通過超聲波和直腸檢查來確認。

2 結(jié)果與分析

檢測采自整個妊娠期的樣品，結(jié)果表明妊娠期PAG水平始終保持在閾值之上（圖3）。

圖1 牛只泌乳曲線

圖2 檢測方案

圖3 通過愛德士ELISA檢測牛早期PAG水平

通過大批量現(xiàn)場樣本檢測，得到總體的敏感性和特異性。結(jié)果表明，授精后28d已確認妊娠牛的621份血漿樣品和552血清樣品敏感性均為99.5%。231份血清樣品和380份血漿樣品的特異性分別為93.1%和94.7%。用于評估特異性的樣本為經(jīng)超聲波或直腸檢查確認的已配空懷牛以及產(chǎn)后60d以上和未配種的牛只（圖4）。

產(chǎn)犢后，愛德士ELISA方法檢測發(fā)現(xiàn)PAG水平下降（圖5）。產(chǎn)后60d檢測血清（n=65）和血漿（n=90），PAGs含量值降到基準(zhǔn)線以下，特異性為100%。

3 討 論

圖4 超聲波和直腸檢查結(jié)果

圖5 血清樣本PAG水平

對愛德士妊娠試劑盒的評估表明，妊娠檢測產(chǎn)品對于現(xiàn)有的繁殖管理方案是非常有用的補充。這為受精后28d乃至整個妊娠過程中診斷妊娠牛和空懷牛提供了可靠的方法。獸醫(yī)和牧場主通過不斷地確認妊娠狀況來發(fā)現(xiàn)空懷牛，縮短胎間距。因為產(chǎn)后PAG水平迅速降到基準(zhǔn)線以下，所以ELISA能夠在產(chǎn)犢后60d使用，作為新一輪妊娠檢測的可靠方法。獸醫(yī)在常規(guī)畜群檢測中，可使用愛德士ELISA對配后時間短、直腸無法準(zhǔn)確檢測的個體牛只進行妊娠狀況評估。

另外，當(dāng)養(yǎng)殖戶不具備常規(guī)獸醫(yī)診斷服務(wù)或者直腸檢測經(jīng)驗不足時，獸醫(yī)可以推薦使用愛德士ELISA檢測。與其他診斷檢測一樣，愛德士牛妊娠檢測試劑盒作為牧場整體健康和繁殖管理方案的一部分，應(yīng)該在獸醫(yī)指導(dǎo)下使用。

[1]FRENCH P D，NEBEL，R L.The simulated economic cost of extended calving intervals in dairy herds and comparison of reproductive management programs[J].Journal of Dairy Science，2003，86（S1）:54.