高效液相色譜法測(cè)定止痛清暈?zāi)z囊中芍藥苷含量

鄭美善，徐蓮花，崔永學(xué)

(吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延邊 133000)

止痛清暈?zāi)z囊是由白芍、甘草、桂枝、姜黃、紅花、威靈仙等9味藥組成的復(fù)方制劑，主要功效為通絡(luò)活血、止痛清暈，用于頸椎病引起的頸部疼痛、肢體麻木、頭暈、視物昏花，亦可用于腦動(dòng)脈硬化引起的供血不足。本制劑的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定方法，為有效控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法對(duì)白芍中的芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Younglin高效液相色譜儀，Younglin Autochro－2000工作站;KQ－200KDE型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)。止痛清暈?zāi)z囊(吉林省汪清縣中醫(yī)院制劑室);芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110736－200526);乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱:Kromasil C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－水(17∶83);流速:0.8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:40℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。在此色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備[1]

精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液(0.201 g/L)0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 mL，分別置5 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物10粒，研細(xì)，取2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

陰性對(duì)照試驗(yàn):取按處方比例及工藝配制缺白芍的陰性樣品，按供試品溶液制備的方法制備陰性對(duì)照品溶液，按上述條件依法測(cè)定。結(jié)果表明，在芍藥苷峰位處，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾(圖 1)。線性關(guān)系考察:精密吸取各對(duì)照品溶液10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以芍藥苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0.0003 X+0.0056，r=0.9997(n=6)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在 0.1608 ～ 0.8040μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣，重復(fù)操作6次。結(jié)果芍藥苷峰面積積分值的 RSD=0.9%，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液適量，分別于 0，2，4，6，8 h時(shí)測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD=0.8%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6份(批號(hào)為20090101)，分別精密稱定，按供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定。結(jié)果的 RSD=0.8%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20100101，含量為0.275 mg/粒)1 g，精密稱定，共取6份，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品(0.0181 g/L)適量，照供試品溶液制備的方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的樣品，依法測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為 20100101，20100102，20100103的3批樣品中芍藥苷的含量分別為0.275，0.274 ，0.276 mg/粒。

3 討論

取樣品2 g，對(duì)不同超聲時(shí)間(20，30，40 min)的提取效果進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲提取時(shí)間影響不大，故選擇超聲提取30 min。參照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》方法，分別用甲醇和乙醇提取，根據(jù)過(guò)濾時(shí)的難易程度和所得色譜峰的情況以及回收率測(cè)定結(jié)果，確認(rèn)用乙醇提取的效果更好。

白芍為止痛清暈?zāi)z囊中的主要藥材之一。用高效液相色譜法測(cè)定止痛清暈?zāi)z囊中白芍主要成分芍藥苷的含量，出峰時(shí)間適宜，陰性對(duì)照無(wú)干擾，樣品峰形和分離效果好。因此，高效液相色譜法簡(jiǎn)便、靈敏、重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于該制劑的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:312.