乳腺癌擴增基因1表達與乳腺癌預后的相關性研究

陳 蕾 吳 曉 洪超群 張 灝

1.汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院內科，廣東 汕頭 515031；2.汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院腫瘤研究實驗室，廣東 汕頭 515031；3.汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院，廣東 汕頭 515031；4.汕頭大學醫學院腫瘤研究實驗室，廣東 汕頭 515031

在西歐等發達地區乳腺癌發病率居女性癌瘤首位。近年來我國不論沿海發達地區還是城鄉較落后地區乳腺癌發病率均呈快速上升趨勢，甚至于超過西方發達國家水平。而復發轉移性乳腺癌既是臨床治療的難點，也是引起乳腺癌死亡的主要原因。隨著乳腺癌基因分型的發展和個體化治療研究的深入，乳腺癌是一類高度異質性的腫瘤已得到了醫學界的共識。但基因分型技術還不夠成熟，還有許多未知問題，還有不斷深入研究的必要。同時乳腺癌的復發轉移也是研究的重點并更具臨床意義。因此，乳腺癌在分子病理水平的研究將越來越深入。乳腺癌擴增基因1（amplified in breast cancer 1，AIB1）作為第一個被證實的共激活因子癌基因（oncogenic coactivator）目前已廣泛應用各種腫瘤的研究[1]，探討AIB1在乳腺癌中的表達及其與腫瘤進展與轉移的相關性，也將帶動乳腺癌新的分子觀測點研究的深入。

1 材料與方法

1.1 材料

收集汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院送檢的2003年1月～2008年12月乳腺癌活檢或手術標本113例，整理臨床數據資料。并對于所取患者資料進行電話生存隨訪。入組患者共113例，全部為女性乳腺癌，年齡最大88歲，最小30歲，中位年齡51歲。病灶組織病理類型中浸潤性導管癌92例，占81.4%，浸潤性小葉癌11例，占9.7%，其他10例，占8.8%。113例患者隨訪率為94.7%，其中失訪6例，失訪率為5.3%。死亡46例，占40.7%，生存61例，占54.0%。轉移包括腋窩淋巴結轉移、鎖骨上淋巴結轉移、肺轉移、肝轉移、顱內轉移、骨轉移、胸壁轉移、胸膜轉移等，其中腋窩淋巴結轉移算一個轉移區域。

1.2 免疫組織化學染色操作方法

兔抗人AIB1單克隆抗體 （試劑批號：0308）購自Santa Cruz公司。采用Dako GTVision兩步法，4 μm石蠟組織切片經二甲苯3次逐級脫蠟，每次10 min，無水乙醇2次；梯度乙醇至水；3%H2O2溶液封閉內源性過氧化物酶10 min；采用10 mmol/L EDTA（pH 9.0）微波抗原修復；一抗（1∶450 稀釋）4℃過夜；即用型二抗室溫作用30 min；DAB顯色10 min，蘇木素復染2 min；1%鹽酸乙醇分色；脫水，透明，中性樹膠封片。

1.3 預實驗及結果判定

本課題正式實驗前，先由我院病理科醫師抽取10例非乳腺癌組織標本進行預實驗，以預測AIB1在正常乳腺組織的表達情況，結果顯示AIB1在正常乳腺導管上是沒有表達的，結合預實驗結果和AIB1的相關文獻報道，做出本次結果判斷依據。

結果判定：由汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院病理科醫師采用單盲法閱片，隨機選取5個高倍視野計數腫瘤細胞的陽性細胞數。AIB1以細胞核出現明顯的黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞信號，≥5%視為陽性表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件進行統計學處理，生存分析用Kaplan-meier法，單因素分析采用Log-rank檢驗，多因素分析用COX風險比例模型，確立影響乳腺癌的獨立預后因素。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AIB1蛋白在乳腺癌的表達

對于全組患者標本進行AIB1免疫組化檢測，113例乳腺癌標本中，103例為可評價標本，10例為不可評價標本，可用乳腺癌標本AIB1表達的陽性率為55.3%（57/103）。

2.2 AIB1與乳腺癌臨床病理特征的關系

單因素分析顯示，AIB1表達與腋窩淋巴結轉移、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體-2（Her-2）表達、病理類型、絕經狀態、生存時間之間均有相關性，Logrank檢驗得出差異有統計學意義（P＜0.05）；而與遠處轉移部位、是否三陰型無相關性，Log-rank檢驗得出差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。患者AIB1不同表達與生存曲線比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1。

2.3 COX多因素分析

COX風險比例模型多因素分析結果顯示，AIB1不是影響乳腺癌總生存的獨立預后因素（OR=0.548，P=0.128），影響乳腺癌總生存的獨立預后因素分別是遠處轉移部位的多少（OR=1.526，P=0.002）和腋窩淋巴結轉移的數目（OR=1.813，P=0.034）。 見表 2。

3 討論

表1 乳腺癌擴增基因1與乳腺癌臨床病理特征的關系（n=103，例）

乳腺癌擴增基因1（AIB1基因）定位于人染色體20q12，最初發現于人乳腺癌擴增的染色體區，故首次命名為乳腺癌擴增性抗原 （amplified in breast cancer 1，AIB1），它與乳腺癌的發生、發展、內分泌治療耐藥及不良預后關系密切。AIB1的過度表達可能通過影響許多重要的信號通路而啟動或抑制腫瘤的發生[1]。Anzick等[2]的研究表明，AIB1通過與雌激素受體相互作用，能強烈地增強雌激素受體的促進靶基因轉錄的效應，進而引起細胞增殖和腫瘤形成。Bouras等[3]、Xie等[4]的研究表明，AIB1的擴增和高表達也可出現在ER、PR為陰性的乳腺癌和其他實體瘤上，如食管癌、大腸癌。現已發現的有AIB1、AIB3、AIB4。AIB1作為第一個被證實的共激活因子癌基因目前已廣泛應用各種腫瘤的研究[5-7]。有研究表明AIB1與腫瘤的浸潤轉移具有相關性[8-11]。Lee等[12]研究表明AIB1表達在ER陰性的乳腺癌與較差的預后相關。Song等[13]研究認為AIB1表達可以作為肝細胞癌術后預測預后的獨立生物標志物。Kefalopoulou等[14]研究認為AIB1等表達與腦膠質瘤的預后相關。

表2 COX風險比例模型

本研究通過檢測乳腺癌組織標本中的AIB1表達，探討AIB1與乳腺癌臨床病理特征之間的關系，并得出一系列有意義的結果，這使筆者認識到生物標志物研究對于臨床實踐的指導意義。本研究單因素分析顯示，AIB1表達與腋窩淋巴結轉移、ER、PR、Her-2表達、病理類型、絕經狀態、生存時間均有相關性，Log-rank檢驗得出差異有統計學意義 （P<0.05）；而與遠處轉移部位、是否三陰型無相關性，Log-rank檢驗得出差異無統計學意義（P>0.05）。COX回歸模型多因素分析結果顯示，AIB1不是影響乳腺癌總生存率的獨立預后因素（P=0.128），影響乳腺癌總生存率的獨立預后因素分別是遠處轉移部位的多少和腋窩淋巴結轉移的數目 （P=0.002、P=0.034）。說明轉移部位越多，或者腋窩淋巴結轉移的數目越多，患者生存時間越短。這與臨床實踐及文獻報道相符。

綜上所述，本研究認為AIB1表達與乳腺癌腋窩淋巴結轉移、ER、PR、生存時間等臨床病理特征密切相關，檢測AIB1蛋白表達情況有助于判斷乳腺癌的預后，可以作為乳腺癌生物標志物進行進一步臨床對比研究。

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