原子熒光法測定桑蟬止咳方中甘草砷汞的含量*

蒲星宇，徐靜逍，畢 云，熊麗娟，魏丹霞

(1.云南省藥物研究所，云南昆明 650111;2.云南中醫學院，云南昆明 650500;3.昆明醫科大學，云南昆明 650500;4.昆明市中醫醫院，云南昆明 650011)

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根。具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調和諸藥等功效。桑蟬止咳方是昆明醫科大學在研課題六類新藥臨床前研究項目中的處方，臨床用于治療燥熱型咳嗽。甘草作為方中的重要組成藥物，起著祛痰止咳及處方佐使藥的雙重功效。隨著藥材種植過程中農藥化肥的廣泛使用及環境污染，重金屬污染已經嚴重影響到了藥品質量與安全性評價，特別是其中所含的砷和汞等元素對人體有害，在桑蟬止咳方的質量標準制定和質量監控中，對其重金屬含量水平的控制及檢測尤為重要。本實驗通過原子熒光法測定桑蟬止咳方中原料甘草的砷和汞含量，成本低廉，方法準確可靠。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

FA2004N電子分析天平，上海精密科學儀器有限公司;Speedwave MWS－3無接觸紅外測溫微波壓力消解系統，德國 BERGHOF公司;AFS－3100雙道原子熒光光度計，北京科創海光儀器有限公司;AS－10自動進樣器，編號91929，北京科創海光儀器有限公司;IFS－30雙泵斷續流動系統，編號9189，北京科創海光儀器有限公司;As空心陰極元素燈，編號AH951244，北京科創海光儀器有限公司;Hg空心陽極元素燈，編號BH0A2371，北京科創海光儀器有限公司。Easy－Q DI8純水器 (上海生儀)，Milli－Q Advantage A10(Millipore公司)，可調式電熱板 (型號:ML—3—4，北京市永光明醫療儀器廠)。10—100μL移液槍(北京大龍興創實驗儀器有限公司)。所有的玻璃器皿、容器、量具都用20%硝酸浸泡24h以上，取出后用去離子水沖洗干凈備用。

1.2 試劑

純氬，99.99%，昆明梅塞爾氣體產品有限公司;硼氫化鈉 (AR)，國藥集團化學試劑有限公司，批號:F20051130;氫氧化鈉 (GR)，國藥集團化學試劑有限公司，批號:F20081021;鹽酸(GR)，西隴化工股份有限公司，批號:1004262;硝酸 (GR)重慶川東 (集團)有限公司化學試劑廠，批號:20101008;硫脲 (AR)，國藥集團化學試劑有限公司，批號:20090212;抗壞血酸(AR)，國藥集團化學試劑有限公司，批號:20080107。實驗用水為超純水。1000μg/mL砷(As)標準液 ［GBW(E)080586 SDS332山東省冶金科學院］、1000 μg/mL汞 (Hg)標準液［GBW(E)ZBR802濟南眾標科技有限公司］。

1.3 標準品的配置

取砷標準品母液用2%的硝酸分別配置為5μg/L，10μg/L，15μg/L，20μg/L 的標準品備用;再取汞標準品母液用2%的硝酸分別配置為0.5μg/L，1μg/L，1.5μg/L，2μg/L的標準品備用。

1.4 還原劑和載液的配制

用去離子水配制含2%NaBH4和0.5%NaOH的溶液作為還原劑，再用去離子水配制5%的鹽酸溶液作為載液。

1.5 藥材

甘草購于云南藥材有限公司中藥飲片廠;批號0902127;產地:內蒙古。

2 樣品的前處理

精密稱取供試品甘草約0.5g 3份各放入聚四氟乙烯罐中再加5mL硝酸 (GR)，蓋上蓋子，旋緊，放置過夜，第2天補液2mL硝酸 (GR)，按微波消解裝樣指導放入Speedwave MWS－3無接觸紅外測溫微波壓力消解系統中，按表1程序進行消解:

表1 樣品消解條件

待消解完畢后取出消解罐，冷卻1～2h冷卻到室溫，小心緩慢的打開消解罐，將消解完畢的液體倒入潔凈的250mL三角瓶中，放置在電熱板上，緩慢加熱，至瓶內液體只有約2～3mL時候，加1～2mL去離子水，待煙霧由黃變白，至不冒煙霧再緩慢加熱0.5h，放冷至室溫轉移到25mL容量瓶中，用5%硫脲－5%抗壞血酸的溶液定容到刻度，待測。

3 檢測條件

使用前先將砷和汞元素燈預熱20min以上，待燈能量穩定后，使用去離子水裝樣，運轉20min左右以清洗管道。將標準品和樣品裝樣，上機，按下表的條件進行檢測:

表2 標準品梯度 μg/L

表3 儀器條件

表4 測量條件

表5 繼續流動程序

4 方法與結果

4.1 方法學考察

4.1.1 標準曲線的繪制

按照上述檢測條件，分別做As和Hg的標準曲線，得到結果如下:

4.1.2 儀器精密度實驗

取As和Hg低濃度的標準液，按相應的方法重復進樣6次，As和Hg熒光強度的RSD分別為:0.9%，2.5%.

表6 標準曲線參數

4.1.3 重復性試驗

精密稱取樣品6份，按相應元素的方法制備，再通過相應的方法測定，As和Hg的RSD分別為:1.2%和2.2%.

4.1.4 加標回收率

在一定量的樣品中加入標準液，定容，進行加標回收試驗，根據測定值計算回收率，見下表:

表7 回收試驗結果

4.2 樣品的檢測

根據2、樣品的前處理和3、檢測條件，處理提供的樣品，分別測定As和Hg的含量，根據熒光強度計算重金屬含量 As和 Hg分別為:0.3857mg/Kg;5.8274μg/Kg。

5 討論

氫化物發生－原子熒光法是基于化學反應后，將分析元素轉化為在室溫下為氣態的氫化物。反應所生成的氫化物被引入石英爐中，并且被原子化，受空心陰極燈激發，原子外層電子躍遷到較高能級，并在回到較低能級的過程中輻射出原子熒光。熒光強度與溶液中被測元素的濃度成正比。硼氫化鈉 (鉀)是氫化物反應中最重要的試劑，應保證足夠純度及不含有被測元素。且將硼氫化鈉 (鉀)溶于一定量的氫氧化鈉中以保證硼氫化鈉 (鉀)的穩定性。

樣品溶于硫脲－抗壞血酸中，既是砷從五價態還原到三價態的還原劑，同時也是抗干擾的掩蔽劑。

藥典中測Hg為冷蒸汽吸收法，而根據此法，Hg也可點火爐絲后測量，甚至可以配混標和As同時測量。根據中國藥典2010版［1］一部甘草項下規定:As不得超過百萬分之二，Hg不得超過千萬分之二。桑蟬止咳方中甘草As、Hg含量都符合規定，通過原子熒光測定As，Hg成本低廉，方法準確可靠。

中藥重金屬Hg、Ag等元素被人體吸收后，當蓄積至一定量時可起到免疫系統障礙，神經、內分泌、肝、腎功能受損，而引起一系列嚴重的中毒癥狀，某些元素還能引起腫瘤，因而世界各國對這些有害元素在藥品和食品中的含量制定了嚴格的限量標準［2］。本實驗通過原子熒光法測定桑蟬止咳方中原料甘草的砷和汞含量，從源頭嚴格質量把關，提高了制劑的臨床使用安全性。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:80.

［2］陸宇照，龔躍剛，王興文，等.中藥提取物中重金屬的研究 ［J］.云南中醫學院學報，2001，1(24):1.