舒肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎實驗研究

魚 濤 趙林濤 馬明弦 陜西省中醫(yī)醫(yī)院（西安710003）

膽汁反流性胃炎（Bile Reflux Gastritis，BRG）是一種臨床上常見的胃部疾病，約占胃炎的24.2%。現(xiàn)在已有大量研究顯示膽汁反流性胃炎與萎縮性胃炎、胃癌、Barrett食管及食管腺癌等癌前疾病和癌癥密切相關(guān)。中藥以其多靶點作用的特點治療膽汁反流性胃炎顯示了廣闊前景，馬明弦主任醫(yī)師總結(jié)多年臨床經(jīng)驗自擬并研制疏肝和胃膠囊治療該病效果滿意。筆者本實驗旨在觀察疏肝和胃膠囊對BRG大鼠胃排空與胃粘膜病理改變的影響，以探討疏肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 ：SD大鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（陜）2007－001，合格證號：0003124。

1.1.3 試劑與儀器：圖像分析系統(tǒng)：BI－2000型，成都泰盟科技有限公司。722N型可見分光光度計：上海元板儀器有限公司生產(chǎn)。試劑：牛磺膽酸鈉 OX BILE，胰蛋白酶 OX BILE，卵磷脂 OX BILE。

1.2 方法

1.2.1 藥物配制與劑量設(shè)置：藥物配制：疏肝和胃組膠囊內(nèi)容物用蒸餾水溶解，達喜和嗎丁啉先用研缽研細再用蒸餾水溶解。劑量設(shè)置：參考臨床用量，疏肝和胃大、中、小劑量為1.12g/kg、0.56g/kg、0.28g/kg，約分別相當臨床人用量的16倍、8倍、4倍，給藥濃度分別為11.2%、5.6%、2.8%。陽性組灌胃嗎丁啉和達喜混合液，嗎丁啉劑量為4mg/kg，相當于臨床人用量的8倍，濃度為0.04%；達喜劑量為0.025g/kg，相當于臨床人用量的8倍，給藥濃度為2%。空白組與模型組灌胃蒸餾水。各組均用蒸餾水稀釋，給藥體積均為10mL/kg。計算方式：如大劑量，1.12g/kg＝10mL/kg×11.2%。

1.2.2 實驗原理、動物分組及給藥方法 實驗原理：以牛磺膽酸鈉、胰酶、卵磷脂溶于水中配制成模擬膽汁反流液（膽汁反流液的制備：牛磺膽酸鈉2.5g，胰酶1.5g，卵磷脂0.25g，溶于100mL蒸餾水中），反流液①可改變胃粘液特性、破壞胃粘膜屏障、刺激肥大細胞釋放組胺、炎性滲出物增多、血流量減少；②使胃竇分泌胃泌素增加、膽汁激活卵磷脂酶A、胰酶引起粘膜損傷、導(dǎo)致炎癥的存在。動物分組及給藥方法：參考文獻方法：取健康大鼠60只，♂♀各半，體重120～160g，根據(jù)體重均衡原則隨機分為空白組、模型組、陽性組、疏肝和胃大、中、小劑量組6組，每組10只。①空白組灌胃蒸餾水，體積10mL/kg，每日1次。②模型組灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。③大劑量組灌胃11.2%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。④中劑量組灌胃5.6%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。⑤小劑量組灌胃2.8%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。⑥陽性組灌胃達喜嗎丁啉混合液，達喜濃度為2%，嗎丁啉濃度為0.04%，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。以上6組均給藥30d。

1.2.3 樣本處理：甲基橙胃殘留率檢測：于末次給藥后禁食12h后，灌胃0.1%甲基橙溶液2mL/只，30min后①用10%的烏拉坦麻醉，備皮，開腹，迅速結(jié)扎賁門和幽門。②切除胃囊，清洗收集胃殘留液，定容至10mL。③以2000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液于分光光度計在420nm處測定吸光度值，以0.1%甲基橙2mL加入10mL蒸餾水搖勻后測量其吸光度值，作為基數(shù)甲基橙光密度，按下列公式計算甲基橙胃殘留率：

甲基橙胃殘留率（%）＝胃甲基橙吸光度值/基數(shù)甲基橙光密度×100%

甲基橙胃殘留率的高低可反映胃排空的快慢（實驗過程中模型、陽性、大、中、小劑量組均死亡2只）胃黏膜病理形態(tài)變化檢測：于末次給藥后禁食12h后，在實驗1基礎(chǔ)上測定完甲基橙殘留率后將胃部延大彎剪開胃壁，并使胃黏膜面外翻，生理鹽水漂洗3遍后浸泡于4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，做厚4μm切片用于HE染色，觀察胃黏膜病理形態(tài)變化。根據(jù)評分標準評分后用T檢驗進統(tǒng)計結(jié)果（實驗過程中模型、陽性、大、中、小劑量組均死亡2只）。評分標準：①炎細胞浸潤輕度：炎細胞浸及黏膜表層，數(shù)量較少，計1分；中度：炎細胞浸入黏膜上2/3層，數(shù)量較多，計2分；重度：大量炎細胞浸入黏膜全層或肌層，計3分。②腸上皮化生輕度：占切片腺體1/3以下，計1分；中度：占切片腺體1/3～2/3，計2分；重度：幾乎整個腺體被腸化上皮所代替，計3分。③腺體增生：根據(jù)腺管組織結(jié)構(gòu)的異型性、上皮細胞的異型性及分化不成熟性，也相應(yīng)分為輕、中、重3級，分別計1、2、3分。無癥狀者計0分。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16.0for windows統(tǒng)計軟件分析實驗結(jié)果，計量資料的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，用配對資料均數(shù)的t檢驗來檢驗其統(tǒng)計學(xué)意義，用P值來表示其差異性。

2 結(jié) 果

夕陽的余暉漸漸散去，禱過山下師生四人升起了一堆篝火。奇巧生搭了一頂簡易帳篷，軒轅明從口袋里掏出幾個大果子遞給大家：“吃吧，這是剛才在樹上摘的，暫時果腹。”

2.1 對胃排空的影響 見表1。

表1 舒肝和胃膠囊對大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s）

表1 舒肝和胃膠囊對大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s）

與模型組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01

組別 n 劑量 甲基橙胃殘留率（%空白組 10 —— 31.9±3.0▲38.7±5.4模型組 8 —— 42.4±4.6陽性組 8 達喜0.025g/kg嗎丁啉4mg/kg 29.0±4.1▲疏肝和胃大劑量組 8 1.12g/kg 33.9±6.2▲疏肝和胃中劑量組 8 0.56g/kg 35.5±4.8▲疏肝和胃小劑量組 8 0.28g/kg

由表1可見，模型組甲基橙胃殘留率明顯高于空白組（P＜0.01）。與模型組比較，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組及陽性組，可使大鼠甲基橙胃殘留率明顯低于模型組（P＜0.01）。

以上表明，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率，促進大鼠胃排空。

2.2 對胃黏膜病理改變的影響 見表2。

表2 舒肝和胃膠囊對膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s）

表2 舒肝和胃膠囊對膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s）

注：與模型對照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01.

評分結(jié)果腺體增生 炎細胞浸潤 腸上皮化生正常對照組 10 0.0±0.0▲ 0.6±0.5▲ 0.0±0.0分組 n▲模型組 8 1.5±0.5 2.3±0.5 2.8±0.5陽性組 8 1.0±0.0▲ 1.3±0.7△ 1.5±0.5▲舒肝和胃大劑量組 8 1.2±0.7△ 1.6±0.5▲ 1.4±0.5▲舒肝和胃中劑量組 8 1.4±0.5 2.3±0.5△ 2.1±0.6▲舒肝和胃小劑量組8 0.5±0.5 1.8±0.5 1.6±0.5

從表2可見，與空白對照組比較，模型組胃黏腺體增生、膜炎細胞浸潤、腸上皮化生評分明顯提高（P＜0.01），說明反流性胃炎模型成立。與模型組比較，本品1.12g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評分（P＜0.01）、炎細胞浸潤評分（P＜0.01）、腸上皮化生評分（P＜0.01）；0.58g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評分（P＜0.05）、腸上皮化生評分（P＜0.01）；陽性組可降低低胃黏膜腺體增生評分（P ＜0.01）、炎細胞浸潤評分（P＜0.05）、腸上皮化生評分（P ＜0.01）。（見圖1－6）

圖1 各組胃黏膜病理改變

以上表明，本品1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細胞浸潤、腸上皮化生；0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。

3 討 論 膽汁反流性胃炎近似于中醫(yī)“膽倒”、“嘔吐”、“反胃”、“嘈雜”等病癥，發(fā)病多于情志失調(diào)、飲食不節(jié)、勞倦過度等有關(guān)，病機為臟腑失和、氣機升降失調(diào)，病位在膽、胃，涉及肝脾，病性為本虛標實，以脾胃虛弱、運化無力為本，以膽胃郁滯、膽邪逆胃、濕熱蘊阻為標。以胃脘疼痛、痞滿、燒心、口苦、嘔吐酸苦、噯氣等為主要臨床表現(xiàn)。舒肝和胃膠囊以柴胡溫膽湯加蓽橙茄、金錢草而成，溫膽湯名為溫膽，實為清膽，方中以柴胡、半夏為君，柴胡舒肝理氣，半夏燥濕化痰、和胃降逆，以陳皮、茯苓、枳實、竹茹、蓽澄茄、金錢草為臣，陳皮、茯苓、竹茹健脾化濕、理氣和胃，枳實、蓽澄茄降逆行氣，金錢草清熱利膽，生姜、大棗和中培土，且制半夏之毒，炙甘草益氣和中、調(diào)和諸藥為使，全方諸藥合用，膽胃同治，化痰濕而不燥，清熱而不寒，燥濕化痰與理氣并用，利膽與和胃兼顧，痰濕熱得清，膽胃得和，諸癥可解。

BRG發(fā)生的機制與幽門功能紊亂，胃竇與十二指腸逆蠕動增多、胃竇收縮減弱等因素有關(guān)。陳化珠等研究認為，BRG患者膽囊排空明顯不良，餐后膽囊膽汁潴留顯著增多。膽汁可以改變胃粘液特性，使胃粘膜上皮細胞溶解，破壞胃粘膜屏障，使H＋逆向彌散，H＋刺激肥大細胞釋放組胺，組胺使血管擴張，滲透性增加，炎性滲出物增加，并使毛細血管瘀血，血流量減少。膽汁可使胃竇分泌胃泌素增加。當膽汁、胰液混合時，膽汁激活卵磷脂酶A，使卵磷脂變?yōu)槿苎蚜字福茐奈刚衬ど掀ぜ毎．攭A性十二指腸液和酸性胃液中和，pH值接近中性時，胰酶激活也可引起粘膜損傷，這些因素導(dǎo)致胃粘膜慢性炎癥持續(xù)存在，長期的慢性炎癥又使胃粘膜屏障功能進一步降低，造成惡性循環(huán)。筆者實驗研究顯示，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率，促進大鼠胃排空。舒肝和胃膠囊1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細胞浸潤、腸上皮化生；0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。提示舒肝和胃膠囊正是通過對胃黏膜的保護作用以及提高胃排空率來達到對膽汁反流性胃炎的治療作用。