阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者腭咽組織中IL－6的表達(dá)及意義

西北大學(xué)醫(yī)院（西安710069） 張曉斌 趙繼元

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）是指睡眠時(shí)上氣道塌陷阻塞引起呼吸暫停和低通氣，通常伴有打鼾、睡眠結(jié)構(gòu)紊亂，頻繁發(fā)生血氧飽和度下降，白天嗜睡、注意力不集中等病癥，并可能導(dǎo)致高血壓、冠心病、Ⅱ型糖尿病等多器官多系統(tǒng)損害［1］。據(jù)研究，OSAHS能夠引起城市公交司機(jī)的情緒低落，從而導(dǎo)致惡性交通事故的發(fā)生［2］。其在世界范圍內(nèi)的患病率估計(jì)為2%～10%［3］。OSAHS的病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今仍未完全明了。本實(shí)驗(yàn)從組織層面出發(fā)，試圖揭示IL－6在OSAHS的發(fā)生、發(fā)展中所扮演的重要角色。

資料與方法

1 一般資料 選取西安交通大學(xué)第一、二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2010年10月～2011年5月手術(shù)治療的36例OSAHS患者作為實(shí)驗(yàn)組，其中男性34例，女性2例，42～57歲，平均48.12±5.81歲，平均體重指數(shù)（BMI）29.23±1.86，平均睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）32.78±6.23；所有患者均行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)（PSG），符合 OSAHS的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。另外選擇同期在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院手術(shù)治療的20例慢性扁桃體炎患者作為對(duì)照組，其中男性19例，女性1例，38～55歲，平均45.32±6.28歲，平均體重指數(shù)（BMI）27.58±3.46，平均睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）2.53±1.24；所有患者均無(wú)睡眠時(shí)打鼾、憋氣等臨床病史，并經(jīng)PSG監(jiān)測(cè)排除OSAHS診斷。兩組患者性別、年齡、體重指數(shù)均無(wú)顯著性差異（P ﹥0.05），AHI有顯著性差異（P ﹤0.01）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 取材：實(shí)驗(yàn)組：UPPP術(shù)后可見切除的腭咽軟組織肥厚、松弛，懸雍垂水腫、肥大，將該組織放入事先準(zhǔn)備好的裝有15%甲醛溶液的廣口瓶?jī)?nèi)，加蓋固定48h，倒掉甲醛溶液，加入自來(lái)水浸泡24h（其間換2～3次水），倒掉自來(lái)水，加入80%的酒精，待用。對(duì)照組：所有受試者在局麻下行扁桃體摘除術(shù)時(shí)取其少許扁桃體周圍組織作為研究對(duì)象，然后固定標(biāo)本（過(guò)程同上）。

2.2 免疫組化染色：石蠟包埋，6mm厚度切片；常規(guī)脫蠟，乙醇梯度水化；蒸餾水沖洗，PBS液浸泡5min；抗原修復(fù)后PBS液漂洗；3%H2O2去離子水孵育15min；滴加試劑A室溫孵育15min，傾去，勿洗；滴加一抗于組織上，4℃過(guò)夜；PBS液沖洗后滴加試劑B，37℃孵育15min；PBS液沖洗后滴加試劑C，37℃孵育15min；PBS液沖洗后DAB顯色3～8min；自來(lái)水沖洗，梯度酒精脫水后二甲苯透明浸泡5min左右；中性塑膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。每批均設(shè)嚴(yán)格的陽(yáng)性及陰性對(duì)照，IL－6多克隆抗體，DAB顯色試劑盒及SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

2.3 圖像分析：免疫組化染色結(jié)果采用Gel Doc 2000圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析，用平均光密度值（AOD）表示。

結(jié) 果

1 IL－6免疫組化染色觀察結(jié)果 IL－6在 OSAHS組及對(duì)照組腭咽軟組織的粘膜層、粘膜下小血管壁和部分小唾液腺腺泡周圍均有陽(yáng)性表達(dá)，而IL－6在OSAHS組呈高表達(dá)。圖像及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示兩組表達(dá)量有顯著性差異（P＜0.05），見附表。

附表 IL－6免疫組化染色結(jié)果［平均光密度值（AOD），（ˉx±s）］

2 OSAHS組IL－6與睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）之間的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析后表明：IL－6與 AHI呈顯著正相關(guān)（r＝＋0.818，P＜0.001）。

討 論

OSAHS是一種嚴(yán)重危害人類健康，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和危及生命的睡眠呼吸障礙性疾病，現(xiàn)已引起各國(guó)學(xué)者的廣泛關(guān)注。近年來(lái)，隨著對(duì)OSAHS研究的不斷深入，各種細(xì)胞因子逐漸成為人們的研究熱點(diǎn)，IL－6就是其中最具代表意義的一種細(xì)胞因子。

IL－6是由單核／巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞也可以分泌IL－6。它是一種多功能細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，在機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、腫瘤免疫以及造血調(diào)控中均起重要作用，是炎癥細(xì)胞因子家族中的關(guān)鍵成分，與組織損傷以及動(dòng)脈壁炎癥反應(yīng)關(guān)系密切。目前許多研究發(fā)現(xiàn)OSAHS患者存在高IL－6血癥，且認(rèn)為OSAHS可能是IL－6分泌異常的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但Kohler［4］等研究后卻發(fā)現(xiàn)IL－6等炎性因子似乎與OSAHS關(guān)系不大，亦不受經(jīng)鼻持續(xù)正壓通氣（nCPAP）的影響。由此可見IL－6與OSAHS的關(guān)系研究尚無(wú)定論，且以上研究均是在血液層面開展的，缺乏組織層面的研究。本實(shí)驗(yàn)充分匹配了性別、年齡、BMI等混雜因素后，發(fā)現(xiàn)IL－6在OSAHS患者腭咽組織中較對(duì)照組明顯呈高表達(dá)。且發(fā)現(xiàn)在OSAHS組IL－6和AHI呈顯著正相關(guān)，即隨著病情程度的加重IL－6的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。

OSAHS患者腭咽軟組織中IL－6呈高表達(dá)的具體機(jī)制尚不清楚，考慮可能與下列因素有關(guān)：①OSAHS患者夜間睡眠時(shí)反復(fù)出現(xiàn)呼吸暫停和低通氣，導(dǎo)致低氧血癥和高碳酸血癥，使得交感神經(jīng)興奮性增高，血中兒茶酚胺類物質(zhì)增多，而IL－6的產(chǎn)生受兒茶酚胺類物質(zhì)的調(diào)節(jié)，因此出現(xiàn)了IL－6在OSAHS患者腭咽軟組織中的高表達(dá)。②缺氧負(fù)荷導(dǎo)致了炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生增多［5］。缺氧可改變中性粒細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)而使其變形性下降，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞在肺內(nèi)大量聚集而被激活，它可釋放大量活性氧，成為肺內(nèi)氧化應(yīng)激的主要來(lái)源，進(jìn)而導(dǎo)致IL－6在OSAHS患者腭咽軟組織的高表達(dá)。③睡眠質(zhì)量對(duì)IL－6的分泌存在影響。OSAHS患者夜間睡眠中反復(fù)出現(xiàn)微覺(jué)醒和睡眠剝奪，從而導(dǎo)致睡眠質(zhì)量的明顯下降。而IL－6是睡眠的主要介導(dǎo)者，睡眠質(zhì)量和IL－6的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)［6］。④OSAHS患者多伴有肥胖和脂質(zhì)代謝紊亂，而脂肪細(xì)胞可自身分泌和刺激IL－6的分泌，從而引起其在組織里的高表達(dá)。上述因素中，缺氧是引起IL－6在OSAHS患者腭咽組織中高表達(dá)的主要原因，因此抗氧化治療可降低其在組織里的表達(dá)水平。

綜上所述，IL－6在OSAHS患者腭咽組織中呈高表達(dá)，提示OSAHS患者體內(nèi)可能存在炎性病理反應(yīng)。IL－6和AHI呈正相關(guān)，因此其在腭咽組織的表達(dá)情況可以作為衡量OSAHS患者病情嚴(yán)重程度的新指標(biāo)。

［1］ 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會(huì)咽喉學(xué)組.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診斷和外科治療指南［J］.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2009，44（2）：95－96.

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