透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌中VEGF、Ki－67的表達(dá)及其相關(guān)性分析＊

福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院、福建省立醫(yī)院病理科（福州350001） 晉 龍 劉曙光 眭玉霞

透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌（clear cell renal cell cancer，ccRCC）是起源于腎實(shí)質(zhì)泌尿小管上皮系統(tǒng)的惡性腫瘤，約占腎細(xì)胞癌（Renal cell cancer，RCC）的60%～85%［1］。ccRCC的發(fā)生、發(fā)展受多種基因調(diào)控。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelialgrowth factor，VEGF）能夠促進(jìn)腫瘤血管生成，從而促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。Ki－67是細(xì)胞增殖的一種標(biāo)記，其表達(dá)與腫瘤的惡性生物學(xué)行為和預(yù)后相關(guān)。本研究通過(guò)觀察VEGF和Ki－67在人ccRCC組織中的表達(dá)情況，探討其與臨床病理因素關(guān)系以及二者之間的相關(guān)性。

材料與方法

1 材 料 選取2008年7月～2011年9月福建省立醫(yī)院病理科收集的手術(shù)切除ccRCC標(biāo)本64例，術(shù)前均未行放化療，術(shù)后由兩位資深病理醫(yī)師診斷為ccRCC。其中男47例，女17例，年齡36～77歲，≥60歲25例，＜60歲39例；臨床分期按2004年 WHO RCC TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：I期25例，II期19例，III期14例，Ⅳ期6例；Furhman病理分級(jí)：1級(jí)27例，2級(jí)22例，3級(jí)11例，4級(jí)4例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例。另選取同期15例正常腎組織作為對(duì)照。

2 方 法

2.1 免疫組化方法：所有手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)l0%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋后行4μm連續(xù)切片，每例均行HE染色和SP法免疫組織化學(xué)染色、光鏡觀察。免疫組織化學(xué)染色按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。用已知VEGF陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)腸腺癌組織切片和Ki－67陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌切片作其陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗分別作陰性對(duì)照。VEGF與Ki－67均為鼠抗人單克隆抗體，SP試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

2.2 結(jié)果判定：VEGF陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞胞漿染成棕黃色或淺黃色，Ki－67陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，以陽(yáng)性細(xì)胞百分率為判斷標(biāo)準(zhǔn)，＜10%細(xì)胞著色為陰性，10%以上細(xì)胞著色為陽(yáng)性。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，VEGF和Ki－67陽(yáng)性表達(dá)率和各項(xiàng)病理因素的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn)或確切概率法分析，VEGF與Ki－67二者之間表達(dá)關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析。

結(jié) 果

1 VEGF、Ki－67表達(dá)與ccRCC臨床病理特征的關(guān)系：ccRCC中VEGF、Ki－67陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.88%（46／64）、53.13%（34／64），而正常腎組織分別為26.67%（5／15）、13.33%（2／15），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。VEGF和 Ki－67的陽(yáng)性表達(dá)率與臨床分期、Furhman病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與患者性別、年齡無(wú)明顯相關(guān)，見(jiàn)表1。

表1 VEGF、Ki－67表達(dá)與ccRCC臨床病理特征的關(guān)系（例）

2 VEGF與 Ki－67表達(dá)的相關(guān)性分析：64例ccRCC組織中，VEGF和Ki－67同時(shí)表達(dá)性者29例（45.31%），同 時(shí) 表 達(dá) 陰 性 者 13 例 （20.31%），僅VEGF表達(dá)者17例（26.56%），僅 Ki－67表達(dá)者5例（7.81%），采用Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示 VEGF與Ki－67的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P＝0.011）。

表2 VEGF與Ki－67表達(dá)的相關(guān)性

討 論

腎細(xì)胞癌（RCC）是泌尿系最常見(jiàn)的腫瘤之一，以高發(fā)局部侵襲和遠(yuǎn)外轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)［2］，近年來(lái)，其發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)。透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌（ccRCC）是其中最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，其浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)由多個(gè)基因參與的復(fù)雜的過(guò)程。

研究證實(shí)，惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞可誘導(dǎo)血管生成，并依賴(lài)血管生成進(jìn)行侵襲性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，而抑制血管生成能顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)。VEGF是一種由正常組織細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞分泌的糖蛋白，分子量為34～45KD，是腫瘤血管形成過(guò)程中作用最強(qiáng)、特異性最高的血管增生因子，其主要功能是通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞上的酪氨酸激酶受體結(jié)合，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、游走和增殖，促進(jìn)血管生成，同時(shí)使新生微血管通透性增加，促進(jìn)血漿蛋白外滲形成纖維蛋白網(wǎng)，有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血管，促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移［3］。研究表明，肝癌、胃癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤中都存在VEGF過(guò)度表達(dá)，且與腫瘤的分級(jí)分期有關(guān)［4，5］。在本組研究中，ccRCC 組織中 VEGF 表達(dá)明顯高于正常腎組織，且VEGF表達(dá)隨著臨床分期、病理分級(jí)增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增強(qiáng)，由于RCC的血運(yùn)非常豐富，高表達(dá)VEGF的預(yù)示腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移幾率高，患者預(yù)后不良，另一方面也提示，抑制VEGF通路的靶向藥物可能有助于延長(zhǎng)ccRCC患者的生存期，并減緩腫瘤進(jìn)發(fā)展。

腫瘤細(xì)胞的增殖是腫瘤分化與轉(zhuǎn)移的重要影響因素。Ki－67是增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種抗原，是由分子量為345KD和395KD兩條多肽鏈組成的核蛋白，其基因位于10號(hào)染色體上。Ki－67表達(dá)與細(xì)胞周期密切相關(guān)，在G2、M 期表達(dá)最強(qiáng)，而在 G0、Gl早期不表達(dá)。Ki－67半衰期短，細(xì)胞脫離增殖周期后迅速被降解，被認(rèn)為是一個(gè)可靠、全面反映腫瘤細(xì)胞增殖活性的標(biāo)志物。目前研究顯示，胃癌、膀胱癌、大腸癌、乳腺癌及淋巴瘤等多種腫瘤中Ki－67呈過(guò)量表達(dá)，并與腫瘤的惡性生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)［6］。本研究發(fā)現(xiàn)ccRCC組織中Ki－67表達(dá)明顯高于正常腎組織，Ki－67表達(dá)與ccRCC臨床分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，說(shuō)明Ki－67的表達(dá)與ccRCC的惡性程度及預(yù)后有關(guān)。

此外，本研究結(jié)果還顯示VEGF與Ki－67的表達(dá)呈正相關(guān)，與張魯東等［6］研究結(jié)果一致。說(shuō)明ccRCC血管的生長(zhǎng)越豐富，腫瘤細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng)，二者在促進(jìn)腫瘤新生血管形成和腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖的機(jī)制中可能存在協(xié)同作用，VEGF和Ki－67共同表達(dá)陽(yáng)性提示患者預(yù)后相對(duì)較差。

圖1 VEGF在透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)

圖2 Ki－67在透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)

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