17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯聯合化療抗腫瘤作用研究＊

北京協和醫學院、中國醫學科學院放射醫學研究所天津市分子核醫學重點實驗室（天津300192）吳紅英 王月英 張 恒 李德冠 王小春 李 進 杜利清 王 彥 褚麗萍 孟愛民

惡性腫瘤的治療主要包括手術及放、化療，而放、化療主要副作用是抑制免疫及造血功能。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）是一種新型輻射防護劑。藥效學研究表明，E838小鼠的肝癌、肺癌等有明顯的抑制作用［1］。本實驗按照國家一類新藥報批要求［2］，通過建立人EC901食管癌荷瘤小鼠模型，探討單獨使用E838及聯合5－氟尿嘧啶藥物對食管癌是否具有抑瘤增效作用，為其用于治療腫瘤的研究提供實驗依據。

材料與方法

1 實驗材料

1.1 動物和瘤株：裸鼠20只，8～12周齡，雄性，體重20～22g，由中國醫學科學院動物所提供，許可證號：SCXK（2009－0004），EC901食管癌瘤株由天津醫科大學提供。

1.2 藥物：5－氟尿嘧啶注射液（5－Fu），由天津金耀氨基酸有限公司生產（批號為0904171），將5－Fu用生理鹽水配制成25mg／kg，E838制成7.5mg／kg。

1.3 儀 器：LM2235，Leica切 片 機 （德 國），BX51，奧林巴斯顯微鏡（BX51日本），Sysmex poch－100i全自動血液分析儀（日本）。

2 實驗方法

2.1 EC901荷瘤小鼠模型的建立：用生理鹽水調整細胞數為1×107，取0.1ml接種于每只小鼠右側腋窩下。

2.2 分組及給藥：小鼠接種瘤細胞3d后，將其隨機分為對照組、5－Fu組、E838組、E838聯合5－Fu組，每組5只。E838組、E838聯合5－Fu組腹腔注射E838 0.2ml／只，1次／d，連續9d，5－Fu組及E838聯合5－Fu組，隔日1次腹腔注射5－Fu，0.2ml／只，共4次。

2.3 抑瘤率計算于實驗第12天，將各組小鼠眼球采血，檢測血常規，處死小鼠后，剝取腫瘤組織稱重，計算抑瘤率。抑瘤率（%）＝（1－治療組平均瘤質量／對照組平均瘤質量）×100%。另取小鼠一側股骨，沖洗骨髓腔，收集骨髓細胞，用全自動血液分析儀計數骨髓有核細胞數。

2.4 病理學觀察：取小鼠瘤組織，常規固定、脫水、石蠟包埋，切片。切片HE染色后用中性樹脂封片，用正置顯微鏡進行組織學觀察并采集圖像。

3 統計學處理 結果用均數±標準差表示，兩組數據間用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

1 E838聯合化療對食管癌EC901抑瘤率的影響 E838組、5－Fu組及E838聯合5－Fu組對食管癌EC901的生長均有抑制作用，抑瘤率分別為63.23%、56.32%和73.56%，與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.01），E838聯合5－Fu組可顯著提高抑瘤作用，見表1。

表1 E838聯合化療對小鼠食管癌的抑制作用（ˉx±SD）

2 E838聯合化療對小鼠造血功能的影響 E838組、5－Fu組及E838聯合5－Fu組的骨髓細胞數均高于對照組，與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05），WBC、RBC、HGB數量均高于對照組，但與對照組比較差異無統計學意義，見表2。

表2 E838聯合化療荷瘤鼠外周血常規的影響（ˉx±SD）

3 病理學檢測 HE染色結果顯示，對照組腫瘤形態不一，無包膜，與正常組織細胞無明顯界限，呈浸潤性生長。腫瘤細胞強嗜堿性藍染，呈典型的惡性特征，核漿比值增大，核異型明顯，中－低分化，見核分裂相，核仁可見（圖1）。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯組腫瘤形態基本呈球形，腫瘤細胞呈索狀排列，瘤內有片狀壞死，存在組織細胞肌化，腫瘤無包膜，與正常組織細胞界限明顯。核漿比值增大核分裂相少見，核仁少見（圖2）。E838聯合5－Fu組腫瘤形態不規則，腫瘤細胞異型性明顯，有包膜。腫瘤細胞藍染，瘤細胞大小形態不規則，有片狀壞死，核分裂相少見，核仁不明顯（圖3）。5－Fu組腫瘤形態規則，腫瘤細胞呈索狀排列，瘤內有脂性空泡，與周圍組織邊界明顯。腫瘤細胞強嗜堿性藍染，瘤細胞大小形態較規則，核分裂像少見，偶見巨細胞（圖4）。

圖1 對照組

圖2 藥物組

圖3 藥物聯合化療組

圖4 化療組

討 論

化療是腫瘤治療的主要手段之一，但由化療藥物帶來的毒副作用如骨髓抑制、胃腸道反應、免疫功能下降等，限制了化療藥物療效的進一步提高，如何降低化療藥物的毒、副反應，提高腫瘤患者的免疫功能［3，4］，并能增加腫瘤對化療藥物的敏感性，使用較低劑量的化療藥物也能充分發揮治療作用，日益成為國內外專家學者努力的方向。近年來我們應用17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）進行的藥效學實驗研究已證實：E838能顯著提高受照射小鼠30d存活率和保護指數［5～7］，具有提升白細胞的作用，毒副作用小。本實驗利用荷瘤裸鼠腫瘤模型，觀察17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯單獨用藥及聯合化療藥物的抑瘤增效作用證明，E838能明顯抑制荷瘤小鼠EC901食管癌的生長，當E838與化療藥合用時可增強抑瘤效果，其抑瘤率高于化療藥組和單獨藥物組，抑制率比治療組升高28.13%、比化療藥組提高39.47%，提示E838聯合5－Fu抗移植瘤生長具有一定增效作用。腫瘤患者的免疫功能不僅與腫瘤的發生和發展密切相關，而且對判斷患者治療效果和評估疾病預后有重要的參考價值。化療藥物可加重機體的免疫抑制，因此提高化療后的免疫功能非常重要。本研究顯示，E838能提高白細胞和骨髓有核細胞數量，說明E838除對腫瘤細胞的生長有抑制作用外，也有改善荷瘤小鼠造血功能的作用。這為E838在腫瘤化療中的應用提供了一定的實驗依據。

［1］ 吳紅英，王月英，李德冠，等.E838聯合γ射線對小鼠肝癌H22抑瘤作用的研究［J］.中國輻 射衛生，2008，17（4）：387－389.

［2］ 衛生部《新藥（西藥 ）臨床前研究指導原則匯編（藥學、藥理學、毒理學 ）》.1993：137.

［3］ 李墨林，李傳剛，舒曉宏，等.化療治愈荷瘤小鼠模型的建立及氟尿嘧啶抑瘤作用的免疫機制［J］.細胞與分子免疫學雜志，2007，23（11）：1010－1013.

［4］ 于洪升，費從合，沈方臻，等.低劑量輻射聯合環磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響的治療研究［J］.中華放射醫學與防護雜志，2004，24（2）：117－119.

［5］ 王月英 王汝勤 孟愛民，等.E838保護化療小鼠造血功能的療效觀察［J］.陜西醫學雜志，2009，38（11）：1443－1444.

［6］ 王月英，王汝勤 ，張良安，等.E838對IRM－2和ICR小鼠的輻射防護作用［J］.中國比較醫學 雜志，2004，12（6）：332－335.

［7］ 王月英，王汝勤，趙忠萍.E838對小鼠輻射防護作用的觀察［J］.中華放射醫學與防護雜志，2005，24（1）：39－40.