抗郁湯對孤養加慢性應激抑郁模型大鼠學習記憶能力及5－HT的影響

郝志紅，李未韡

抑郁癥是以心境低落為特征的綜合征，通常表現為長期情緒低落或悲痛欲絕，對生活失去興趣、精神萎靡、學習記憶能力下降、食欲減退等癥狀；嚴重者可出現木僵、幻覺、妄想及自殺念頭等情感性精神障礙癥狀。目前，抗抑郁西藥廣泛運用于臨床，但副反應大，不良反應多?，F已發現一些具有良好的抗抑郁作用的中藥如連翹、柴胡等。抗郁湯由巴戟天、淫羊藿等幾味中藥組成，具有溫腎助陽、養陰柔肝、調整陰陽等功效，在臨床運用中療效顯著。本實驗通過觀察抗郁湯對抑郁模型大鼠體重增長、學習記憶能力及腦內單胺類神經遞質5－羥色胺（5－HT）含量的影響，進一步探討抗郁湯治療抑郁癥的作用及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 清潔級健康雄性3月齡Wistar大鼠60只，體重（190±20）g，由山西醫科大學實驗動物中心提供。

1.1.2 實驗藥物 抗郁湯由巴戟天、淫羊藿等中藥組成，原藥材購自山西醫科大學第二醫院藥房，由山西醫科大學第二醫院制劑室制備為干燥粉末，每1g粉末相當于生藥4.2g，4℃冰箱保存。鹽酸氟西汀，由禮來蘇州制藥有限公司生產，劑量為每粒20mg。

1.1.3 實驗試劑 5－羥色胺硫酸肌酐，中國醫藥公司上?；?/p>

學試劑采購供應站瑞士進口分裝。

1.1.4 實驗儀器 Sartorius電子天平，德國Sartorius公司；微量電子天平，島津BP－211D；3K30臺式高速冷凍離心機，德國SIGMA公司；勻漿機，德國IKA公司；RF－540型熒光分光光度儀，日本島津公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物的分組 將60只大鼠根據體重大小編號，通過隨機數字表采用區組隨機的方法進行分組，以保證各組大鼠實驗前體重均衡。實驗大鼠分為6組：空白對照組（A組）、模型組（B組）、鹽酸氟西汀組（C組）、抗郁湯低劑量組（C組）、抗郁湯中劑量組（D組）、抗郁湯高劑量組（E組），每組各10只。

1.2.2 抑郁模型的建立 適應性喂養1周后，除空白對照組普通喂養（群養）外，余組參照文獻［1，2］，制造為期21d的大鼠孤養加慢性不可預見的中等強度刺激應激抑郁模型。方法是在21d內施加電擊足底（50V交流電，10s／次，每隔1min，20次）、冰水游泳（4℃，5min）、搖晃（1次／s，1min）、夾尾（1min）、禁水（24h）、禁食（24h）、熱應激（45 ℃，5min）刺激，隨機安排每日給予1種刺激，每種刺激出現3次，同一種刺激不能連續出現，使動物不能預知給予的刺激。

1.2.3 給藥方法 空白對照組普通喂養；模型組灌服生理鹽水2mL；根據動物與人體體表面積折算法，藥物用量為人體用藥劑量的20倍、10倍、5倍。用時按生藥與制劑的比例折算，純化水稀釋；鹽酸氟西汀去外殼后，用純化水配成0.18mg／mL混懸液，使用時搖勻。大鼠灌胃容量為0.33mg／100g體重，按大鼠體重給相應藥物量，于每日刺激前30min灌服。

1.2.4 體重的檢測 實驗第21天，按動物序號進行測量。

1.2.5 學習記憶能力的檢測 實驗第21天，采用Morris水迷宮［3］視頻跟蹤系統進行評價。該系統由一個直徑120cm，高50 cm不銹鋼水池、平臺、記錄裝置和分析軟件組成。水溫保持在24℃±2℃，大鼠頭部以苦味酸涂黃色，便于攝像頭捕捉。平臺為直徑9cm，高29cm的圓形隱藏平臺，置于第三象限，水面高于平臺2cm，實驗期間水迷宮外足夠的固定參照物及水池壁上用粉筆畫有固定的圖案（如三角、圓等）供大鼠定位利用，且始終保持不變。

定位航行實驗通過觀測大鼠從入水到找到并爬上平臺所需時間，即逃避潛伏期，避潛伏期的長短可檢測其學習記憶能力。造模前5d進行定位航行訓練，每天固定時間，訓練2次。大鼠均以第一象限為入水點，如果大鼠在60s未找到平臺，逃避潛伏期記為60s然后由實驗者將其牽引至平臺上，停留20s再放回籠中。實驗21d正式檢測時，記錄大鼠2min內逃避潛伏期及找到休息平臺所游過的距離。

1.2.6 腦內單胺類神經遞質5－HT含量的測定 用20%的戊拉坦，按5mL／kg腹腔注射麻醉大鼠，放血處死大鼠后，盡快斷頭剝取全腦，去除小腦后將腦組織稱重，放入預冷酸性正丁醇溶液中勻漿，混勻后離心取上清液，按熒光分光光度法［4］測定大鼠腦內單胺遞質5－HT的含量。

1.3 統計學處理 采用SPSS12.0統計軟件包進行分析。計量資料用均數±標準差（±s）表示。數據采用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗。

2 結 果

2.1 體重增長變化 第21天，與A組相比，B組體重增長緩慢，差異有統計學意義（P＜0.05）；與B組相比，C組、E組、F組體重增加，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；D組較B組體重有所增加，但差異無統計學意義（P＞0.05）；與C組相比，D組體重增長緩慢，差異有統計學意義（P＜0.05）；E組、F組與C組體重差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠體重變化（x±s） g

2.2 大鼠的學習記憶能力評價 第21天在逃避潛伏期中，與A組相比，B組逃避潛伏期、游泳距離增加（P＜0.01）；與B組相比，各給藥組逃避潛伏期、游泳距離下降（P＜0.05或P＜0.01）；與C組相比，D組、E組、F組逃避潛伏期差異無統計學意義（P＞0.05）；與C組相比，D組、E組游泳距離增加（P＜0.05），F組與C組差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 各組大鼠的學習記憶能力評價（x±s）

2.3 腦內單胺類神經遞質5－HT含量變化 與A組相比，B組、D組、E組5－HT含量減少（P＜0.05或P＜0.01）；與B組相比，D組5－HT含量有所增加，但差異無統計學意義。C組、E組、F組5－HT含量較B組顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）；與C組相比，D組5－HT含量有所減少，但無統計學意義；E組、F組與C組差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表3。

表3 腦內單胺類神經遞質含量變化比較（x±s）

3 討 論

本實驗所采用的慢性不可預見性應激抑郁模型是目前常用的動物模型。對于大鼠來說，連續21d的傷害性刺激相當于人長期處于負性情緒和生活事件中，目前認為其為抑郁癥病因。長期負性情緒及不良的生活環境使得腦組織中單胺類神經遞質含量下降，單胺遞質的作用與相應的受體亞型有關，單胺類神經遞質的受體多與G蛋白偶聯，通過不同的G蛋白激活或抑制不同的信號轉導途徑，影響基因轉錄和表達，從而使神經細胞功能發生一定的變化。

抑郁癥屬中醫情志病的范疇，其癥狀散見于中醫古籍中的癲狂、臟躁、百合病、郁證等病證中。中醫學認為抑郁癥是由情志不遂、氣機郁結而致，因郁及氣血、五臟，出現氣血失調、臟腑功能失調，變生諸多不足之證，出現脾虛、腎虛、氣郁化火、郁久傷陰、陰虛火旺等證型，所謂“久病必虛”。抑郁癥初期為肝郁，中期為心脾兩虛，后期為腎虛。

抗郁湯由巴戟天、淫羊藿等中藥組成。中藥巴戟天是常用的補腎壯陽藥，主治大風邪氣、可強筋骨、安五臟、補中、增志、益氣。在采用現代藥理學方法研究巴戟天［5］的藥理作用過程中，發現其具有抗抑郁作用；中藥淫陽藿是傳統的補益藥，具有補腎陽、強筋骨、益精氣、補腰膝、強心力、祛風濕等作用?，F代藥理研究表明，淫羊藿主要化學成分為黃酮類化合物、木脂素及生物堿淫羊藿具有多種藥效功能，主要集中在免疫、生殖系統及心腦血管系統等方面。

抗郁湯具有補腎助陽、養陰柔肝、調整陰陽等功效。在臨床運用中，以其為基礎方加減化裁治療抑郁癥，常常獲效。在本實驗中，抗郁湯中、高劑量組與西藥鹽酸氟西汀對照組療效相當，存在一定量效關系?？褂魷墒挂钟裟Ｐ痛笫篌w重增加，學習記憶能力改善；提高其腦內單胺類神經遞質5－HT含量。

［1］ Katz RJ，Carroll BJ.Acute and chronic stress effects on open field activity in the rat：Implications for a model of depression［J］.Neurosci Biobehav Rev，1981，5（2）：247－251.

［2］ Kate RJ，Sibel M.Animal model of depression：Tests of three structurally and pharmacologically novel antidepressant comdpouns［J］.Pharmacol Biochem Behav，1982，16（6）：973－977.

［3］ Kaegker S T，Sinner C，Chatterjee S，etal.Hyperforin enhances the extracellular concentrations of eatecholamines，serotonin and glutamate in the rat locus coeruleus［J］.Neuroscience Letters，1999，262（3）：199－202.

［4］ 匡培根，周新富，徐波.腦組織中單胺類神經遞質的提取和熒光光度測定法［J］.中國人民解放軍軍醫進修學院學報，1982，3（2）：181.

［5］ 崔承彬，楊明，姚志偉，等.中藥巴戟天中抗抑郁活性成分的研究［J］.中國中藥雜志，1995，20（1）：36.