新型鹵酚化合物3’，4’－二羥基－3－氯二苯甲酮對大鼠缺血／再灌注心肌的保護作用

王 義，馮秀娥，趙 雷，李青山

心肌缺血／再灌注損傷（MIRI）時迅速產生的活性氧類物質會使血管內皮細胞的完整性遭到破壞，造成通透性增加，而導致水腫的發生，同時細胞核DNA被自由基攻擊造成氧化傷害，這是MIRI病理過程的重要觸發因素［1－3］。從海藻中提取得到的多種鹵酚化合物均表現出很好的抗氧化活性。本課題組以天然來源的鹵酚化合物為先導化合物，進行了結構優化和修飾，合成了系列鹵酚衍生物，體外活性篩選結果顯示，全新結構化合物3’，4’－二羥基－3－氯二苯甲酮（LM46）對過氧化氫損傷的人臍靜脈內皮細胞具保護活性［4，5］。本實驗利用在體大鼠 MIRI研究LM46可能具有的藥物后處理心肌保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性健康SD大鼠，體重230g～260g，由山西醫科大學實驗動物中心。HX－200動物呼吸機（成都泰盟科技有限公司）；RM6240B生物信號采集處理系統，YPJO1型壓力換能器（成都醫療儀器廠）。

LM46注射液由本課題組提供，Even’s blue染液購自Sigma公司；2，3，5－氯化三苯基四氮唑（TTC）染液購自 AMRESCO公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法 將實驗動物隨機分為6組，每組8只。即假手術組、模型組、溶劑對照組及LM46低、中、高劑量組（5mg／kg、10 mg／kg、15mg／kg）。大鼠 MIRI建立參照文獻［6，7］，記錄正常Ⅱ導聯心電圖（ECG）。在動脈圓錐與左心耳之間冠狀動脈左前降支（LAD）處穿線，除假手術組外，其余各組在LAD下拉緊結扎線使硅膠管壓迫LAD造成血流阻斷（以ECGⅡ導聯ST段抬高0.1mV或T波高聳，心肌顏色變為暗紅色，作為LAD結扎成功的標志）。LAD供血區域左心室左前壁缺血40min后，松開結扎線，恢復血液LAD再灌流。假手術組只穿過不結扎。再灌注過程開始1min內，模型組和假手術組靜脈注射生理鹽水1mL／kg，溶劑組靜脈注射空白溶劑1mL／kg作為對照，LM46分別經股靜脈推注相應組別實驗用藥物，再灌注3h。

1.3 指標檢測 測定各組大鼠心臟梗死面積［8］。血清酶學指標檢測，TAB法測得血清中MDA含量。LDH、CK活力測定均按照試劑盒說明書規范操作［9］。

1.4 統計學處理 計量資料以均數±標準差（x±s）表示。應用SPSS15.0軟件組間單因素方差分析。

2 結 果

2.1 不同計量LM46對缺血／再灌注心肌梗死面積的影響（見表1） 危險區面積占左心室面積的百分比（AAR／LV）在各組間無統計學意義，表明在造模過程中，結扎LAD的手法穩定，各組模型的缺血程度大體相當。LM46不同劑量組心肌梗死面積占危險區面積的百分比（AN／AAR），顯著小于模型組和溶劑對照組，且呈現明確的量效關系。

表1 LM46后處理對心肌梗死面積的影響（x±s）

2.2 大鼠血清SOD活力及 MDA含量的測定（見表2） 各不同給藥組血清中SOD活力顯著高于模型組和溶劑對照組，MDA含量顯著低于模型組和溶劑對照組，且呈現明確的量效關系。

表2 LM46后處理對SOD活力、MDA的影響（x±s）

2.3 大鼠血清LDH、CK活力測定（見表3） 給藥組血清中CK、LDH活力顯著低于模型組和溶劑對照組，且呈現明確的量效關系。

表3 LM46后處理對LDH、CK活力的影響（x±s）

3 討 論

本研究結果顯示，與模型組相比，在5mg／kg～15mg／kg劑量范圍內，不同劑量LM46對大鼠MIRI具有明顯的保護作用。

脂質過氧化作用及能量代謝異常是導致MIRI的重要因素。心肌缺血時，由于心肌內源性氧自由基清除劑減少。再灌注以后，分子氧再次進入心肌組織中，氧自由基水平繼續上升。自由基會使血管內皮細胞的完整性遭破壞，造成通透性增加，而導致水腫的發生，同時細胞核中的DNA會被自由基攻擊造成氧化傷害，甚至細胞死亡［10，11］。

心肌缺血再灌注損傷后SOD活力下降，氧自由基增多，導致氧自由基氧化不飽和脂肪酸釋放的降解產物MDA含量升高，丙二醛可引起大分子物質如蛋白質、脂類等相互交聯、聚合，從而破壞了細胞膜的結構和功能，使胞漿酶如CK和LDH釋放增加，加速心肌細胞損害程度［12］。

本研究將本課題組首次合成的海洋鹵酚化合物LM46應用于大鼠MIRI保護作用的研究。結果顯示，缺血／再灌注發生時，SOD的活力明顯降低，MDA含量明顯升高，證明存在自由基代謝紊亂。經過LM46干預后，SOD活力升高，MDA含量下降，LDH和CK的活力明顯下降，表明LM46有顯著抗氧化能力，從而減輕缺血／再灌注損傷［13］。本研究針對海洋鹵酚化合物應用于心血管系統疾病進行了初步探討，為以后海洋鹵酚化合物在該領域的研究打下基礎。

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