舒血通絡膠囊對動脈粥樣硬化大鼠AngⅡ、NO表達及血液相關指標的影響1）

李子斌，甘照儒

舒血通絡膠囊具有抗氧化、清除自由基、改善血液流變性、減輕微循環障礙、改善組織或器官的血液循環作用。為進一步探討舒血通絡膠囊對動脈粥樣硬化（AS）的防治作用及其機制，現對AS模型大鼠血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）、一氧化氮（NO），腹主動脈壁中血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）等指標觀察如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 健康雌性SD大鼠60只，體重200g～250 g，由廣西中醫學院實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物及試劑 舒血通絡膠囊（當歸、生地、桃仁、紅花、三七、川芎、黃芪、郁金、石菖蒲、山楂、熟地、香附、木香、甘草）由廣西中醫學院附屬瑞康醫院藥劑室提供；維生素D3晶體粉末，由山東東營天潤生物科技有限公司提供；TC、TG、LDL－C試劑盒由上海復星長征醫學科學有限公司提供；大鼠AngⅡ定量檢測試劑盒，由上海百沃科技有限公司提供。

1.1.3 主要儀器 微量臺式高速離心機，美國生產；日立7150全自動生化分析儀，日本生產；病理組織漂烘儀，中國常州市華利電子有限責任公司生產；全自動彩色圖像處理系統，德國生產；顯微圖像分析系統，美國生產。

1.2 動物分組與給藥 健康雌性SD大鼠60只隨機分組?？瞻捉M（標準飲食組20只）；模型組（灌服生理鹽水組20只）；方藥組（灌服舒血通絡膠囊組20只）。大鼠自由飲食，光照每日12h（08：00～20：00），標準環境飼養，溫度23.0 ℃±0.5 ℃，濕度（50.0±0.5）%。根據雌性SD大鼠的體重，在0、24h和48h分別給予維生素D34×105U／kg灌胃，然后繼續喂以標準飼料（重量比為碳水化合物60%，粗蛋白20%～21%，粗脂肪5%）9周，造成大鼠AS模型，成功率90%，造膜時間連續9周。然后給模型對照組、方藥組分別灌服生理鹽水每日每次3mL和舒血通絡膠囊25g／（kg·d），相當于成人每天口服劑量的10倍量，連續灌胃15d。

1.3 標本采集及處理 造模成功后，將空白組、模型組、方藥組大鼠腹主動脈采血各3mL，并取腹主動脈壁各5mm。在全自動生化分析儀檢測大鼠動脈血血脂情況。摘取腹主動脈壁5 mm，標本冷凍后，行5μm厚的連續冠狀切片，每隔10張抽取1張，粘于玻片上室溫保存留用作AngⅡ致炎癥細胞免疫組化染色。HE染色后觀察腹主動脈壁斑塊沉積及炎癥細胞增生情況。

1.4 統計學處理 應用SPSS13.0統計分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示。

2 結 果

2.1 3組大鼠血脂比較（見表1）

表1 3組大鼠血脂比較（x±s） mmol／L

2.2 AngⅡ在3組AS大鼠腹主動脈血管壁中的變化（見表2）用免疫組化法測定AngⅡ，模型組中大鼠腹主動脈血管壁中AngⅡ含量明顯較空白組和方藥組增高。

2.3 重氮化反應法測定各組血清NO濃度（見表3）

2.4 3組大鼠腹主動脈血管切片HE染色結果 光鏡下對照組大鼠腹主動脈管腔不規則，內膜和中膜均增厚，斑塊明顯隆起于管腔內，斑塊內含有大量炎癥細胞。而空白組與方藥組管腔較規則，內膜中膜未見明顯增厚未見斑塊明顯隆起。

表2 AngⅡ在3組AS大鼠腹主動脈血管壁中的變化（x±s）

表3 各組大鼠血清中NO濃度（x±s）

3 討 論

實驗表明［1］，單純使用維生素D3連續灌胃的方法可以成功造出大鼠AS模型，方法簡單易行，成功率高。AngⅡ可刺激多種細胞分泌多種炎癥因子，炎癥與AS存在高度相關性。多種細胞因子可誘導產生炎癥標志物，炎癥因子與炎癥標志物直接參與AS的形成，同時也介導甚至加強AngⅡ的致AS作用［2］。其中巨噬細胞表達與AngⅡ關系密切，且在AS形成過程中起著重要作用，具體表現：巨噬細胞具有吞噬膽固醇、參與炎癥和免疫反應、參與增值反應促進血管平滑肌細胞的遷移和增值，同時還可表達多種金屬蛋白酶和絲氨酸蛋白酶類，使細胞外基質退化，斑塊不穩定甚至有破裂的趨勢［3］。

NO具有抗氧化、清除自由基、抑制低密度脂蛋白在血管壁被氧化，防止氧化低密度脂蛋白（ox－LDL）的產生，而影響脂質浸潤［4］；能抑制NF－κB的激活和核內遷移，阻抑激活的內皮細胞表達黏附分子，減少嗜中性粒細胞和單核細胞的黏附和活化，減少血管壁的炎癥反應；能抑制血小板黏附、聚集，抑制凝血酶誘導的血小板活性因子的表達以減少血栓形成；能阻止凋亡，保持內皮細胞的完整性；還能有效地抑制血管平滑肌細胞（SMC）增殖、遷移和細胞外基質的合成，對AS病理形成和發展具有阻抑作用［5］。

近年來關于AS的研究頗多，現代醫學研究認為，AS的形成主要是由于脂質浸潤、血小板黏附聚集、炎癥反應、血管內皮受損、免疫功能失調、血管平滑肌細胞的增殖、遷移，自由基損傷等原因。中醫學認為AS的形成是痰、濁、瘀、虛共同作用的結果。從藥物的組分來看，舒血通絡膠囊具有活血化瘀、行氣化痰、補腎益精的功效，故可以起到抗AS的作用。本研究結果表明，舒血通絡膠囊可以顯著降低AS大鼠升高的血脂水平，降低AS大鼠腹主動脈壁中AngⅡ含量，升高血清中NO的含量。提示舒血通絡膠囊抗AS的作用機制可能是通過抑制AS大鼠血管壁AngⅡ的生成、升高血清中NO的含量來實現的。

本研究提示舒血通絡膠囊具有抗氧化、清除自由基、改善血液流變性、減輕微循環障礙、改善組織或器官的血液循環等作用，對動脈粥樣硬化有改善作用。

［1］ 沈麗，盧維晟.不同方法建立動脈粥樣硬化大鼠模型的比較［J］.心臟雜志，2005，17（1）：18－20.

［2］ Boyle JJ.Macrophage actuation in atherosclerosclerosis：Pathogenesis and phyarmacology of plaque repture［J］.Curr Vasc Pharmacol，2005，3（1）：63－68.

［3］ Ferraric CM，Strawn WB.Role of the rennin angiotensin aldosterone system and proinflammatory mediators in cardiovascular dis－ease［J］.Am J Cardiol，2006，98（1）：121－128.

［4］ 武宏敏，張建新.一氧化氮與心肌缺血再灌注損傷［J］.河北醫藥，2008，30（6）：836－838.

［5］ 周京紅.一氧化氮和動脈粥樣硬化［J］.生物技術通訊，2007，18（5）：879－881.