高效液相色譜–二級管陣列檢測器法測定化妝品中鄰苯二甲酸酯

孫文閃，田富饒，楊蘭花

(義烏出入境檢驗檢疫局，浙江義烏 322000)

高效液相色譜–二級管陣列檢測器法測定化妝品中鄰苯二甲酸酯

孫文閃，田富饒，楊蘭花

(義烏出入境檢驗檢疫局，浙江義烏 322000)

用甲醇將化妝品樣品超聲提取15 min，離心、過濾，以XDB–C18分析柱分離分析，二級管陣列檢測器檢測，結(jié)合保留時間和光譜定性分析，采用高效液相色譜法測定化妝品中的鄰苯二甲酸酯，外標法定量。鄰苯二甲酸酯鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基已)酯(DEHP)在0.5～10.0 mg/L濃度范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＞0.999 8。BBP，DBP，DEHP在1.000，2.000 mg/L添加水平的回收率為92%～105%，相對標準偏差(RSD)小于4%(n=6)，檢出限分別為14，12，6 mg/kg。該方法適用于化妝品中BBP，DBP和DEHP含量的檢測。

高效液相色譜–二級管陣列檢測器；BBP；DBP ；DEHP

環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是一類具有干擾人類和其它動物內(nèi)分泌的有毒有機污染物，也稱為環(huán)境激素。鄰苯二甲酸酯作為環(huán)境激素中的一類，主要作為增塑劑、軟化劑、載體等應(yīng)用在化妝品、洗滌劑、建筑材料和潤滑油中?；瘖y品中鄰苯二甲酸酯應(yīng)用較多的產(chǎn)品有香水、指甲油、頭發(fā)噴霧劑、香波、洗滌用品等，其功效主要在于使指甲油能降低指甲的脆性而避免碎裂；使發(fā)膠在頭發(fā)表層形成柔韌的膜而避免頭發(fā)僵硬等。女性過多使用含有鄰苯二甲酸酯的化妝品，會增加患乳腺癌的概率，而且容易引起孕婦流產(chǎn)及胎兒畸形；對男性而言，鄰苯二甲酸酯可干擾內(nèi)分泌，使男子精液量和精子數(shù)量減少，造成男性不育或后代畸形等。因此，世界各個國家和地區(qū)對化妝品中鄰苯二甲酸酯均有嚴格的限制標準，歐盟及美日等國均已將此類化合物列為優(yōu)先控制污染物。歐盟規(guī)定化妝品中鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基已)酯(DEHP)不得添加，3項總和小于等于100 mg/kg；東盟規(guī)定化妝品中DBP，BBP，DEHP不得添加，3項總和小于等于100 mg/kg；韓國規(guī)定化妝品中DBP、BBP和DEHP不得添加，3項總和不得超過0.01%；加拿大規(guī)定護理產(chǎn)品DINP，DIDP，DNOP，DEHP，DBP和BBP的含量不超過0.1%；我國規(guī)定化妝品中DBP，BBP和DEHP不得添加，3項總和小于等于100 mg/kg。因此建立一種化妝品中鄰苯二甲酸酯簡單、快速、有效的檢測方法對政府部門的監(jiān)管有重要的意義。

鄰苯二甲酸酯的檢測方法有氣相色譜法［1，2］、液相色譜法［3–5］、氣質(zhì)聯(lián)用法［6，7］、液質(zhì)聯(lián)用法［8］。筆者建立了二極管陣列檢測器的高效液相色譜法，該方法具有樣品前處理簡單、快速、靈敏度高、成本低、測定結(jié)果準確可靠等特點，為化妝品中鄰苯二甲酸酯的檢測提供了一種有效的分析手段。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1200型，附帶二極管陣列檢測器，美國安捷倫公司；

氣相色譜–質(zhì)譜儀：Agilent 6890N–5973GC/MSD型，美國安捷倫公司；

超聲波清洗器：D–78224型，德國Elma公司；

高速離心機：3–30K型，德國Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒–托利多儀器（上海）有限公司；

超純水儀：Milli-Q型，美國密理博公司；

有機性樣品濾膜：0.45 μm；

甲醇、乙腈：色譜純；

BBP、DBP、DEHP標準品：純度為99.8%，上海安普公司；

實驗用水為超純水。

1.2 標準儲備液配制

準確稱取DBP，BBP，DEHP各100 mg，用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，配制成標準儲備液，濃度為1.000 mg/mL，于4℃保存，臨用時將標準儲備液用甲醇稀釋成所需濃度的混合標準工作溶液。

1.3 樣品處理

實驗過程中盡量避免使用塑料材料制成的器皿，所有的玻璃器皿經(jīng)丙酮清洗后再用甲醇潤洗自然風干后使用。

稱取化妝品（固體、膏狀）0.500 g，精確至1 mg，置于50 mL的錐形瓶中，準確加入甲醇25 mL，用旋渦振蕩器振蕩混勻，于超聲波清洗儀器超聲15 min，以12 000 r/min高速離心機離心15 min，上清液經(jīng)注射器過濾（0.45μm有機型濾膜），待上機測定。對于水狀樣品準確稱取0.100 g，精確到1 mg，置于25 mL帶有10 mL刻度比色管，加入甲醇定容至10 mL，于超聲波清洗儀器超聲15 min，經(jīng)注射器過濾（0.45μm有機型濾膜），待上機測定。

1.4 色譜條件

（1）液相色譜條件

色譜柱：XDB–Cl8柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；進樣量：20 μL；柱溫：40℃；流動相：乙腈–水，梯度洗脫程序見表l，后運行時間5 min；檢測波長：224 nm；光譜存儲范圍：190～400 nm。

表1 梯度洗脫程序

（2）氣相色譜–質(zhì)譜條件

色譜柱：HP–5MS柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，5% phenyl methyl-siloxane（苯甲基硅氧烷）；柱溫程序：初始溫度為50℃，保持2 min后以40℃/min的速率升至210℃，然后以30℃/min的速率升至280℃，保持10 min；進樣口溫度：280℃；色譜–質(zhì)譜接口溫度：280℃；載氣：氦氣，流速為1 mL/min；電離方式：EI，70 eV；掃描方式：全掃描；進樣方式：分流，分流比5∶1；溶劑延遲：4.5 min；進樣量：1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測器和檢測波長的選擇

紫外色譜圖中有許多干擾的色譜峰，如果從峰的保留時間來定性，雜質(zhì)峰會產(chǎn)生很多干擾，因此選擇二極管陣列檢測器，用保留時間和光譜來進行判斷，提高了樣品定性分析的準確性。為了進一步確認光譜定性的可靠性，用GC–MS進一步確認，發(fā)現(xiàn)當樣品在190～400 nm范圍內(nèi)的光譜與標準物質(zhì)的光譜吻合時，樣品的質(zhì)譜圖與標準物質(zhì)的一樣；相反，當樣品的光譜與標準物質(zhì)的光譜不一致時，在GC–MS上的質(zhì)譜圖和標準物質(zhì)的不一樣。由此可見二極管檢測器對樣品的定性分析有重要的意義。DBP，BBP，DEHP在190～400 nm范圍內(nèi)的DAD光譜分別如圖1、圖2、圖3所示。由圖1～圖3可知，3種鄰苯二甲酸酯類化合物在224 nm處均為紫外吸收的峰值，故選擇224 nm作為檢測波長。

圖1 DBP的DAD光譜圖

2.2 流動相的選擇

圖2 BBP的DAD光譜

圖3 DEHP的DAD光譜

分別采用甲醇、水–乙腈、水作為流動相進行試驗，結(jié)果表明，DBP，BBP，DEHP這3種目標物達不到良好的基線分離；如采用純甲醇或者乙腈為流動相，DEHP能夠得到很好的峰形，且出峰快，但是BBP和DBP的出峰時間太短，并且無法完全分開；用甲醇、水進行梯度洗脫，分離效果不好，并且分析的時間也較長；采用1.2洗脫程序，可以將3種物質(zhì)很好地分離，并且得到理想的峰形，同時也可以將樣品中的雜質(zhì)進行有效分離，分析時間相對較短。圖4、圖5、圖6分別為標準物質(zhì)、樣品和加標后樣品的色譜圖。

圖4 BBP，DBP，DEHP標準溶液的色譜圖

圖5 不含BBP，DBP，DEHP化妝品樣品的色譜圖

圖6 加入BBP，DBP，DEHP標準物質(zhì)后化妝品樣品的色譜圖

2.3 提取溶劑

根據(jù)各種物質(zhì)的理化性質(zhì)，選擇甲醇、甲醇–水、乙腈作為提取溶劑，結(jié)果表明，乙腈的提取效果最差且毒性大；甲醇–水系統(tǒng)引入了大量的水溶性雜質(zhì)；甲醇對各物質(zhì)的提取效果最好，是理想的提取溶劑，且毒性相對較小，操作簡單。

2.4 提取時間

按照1.3樣品前處理方法，分別在l0，l5，20，25，30 min測定提取物的峰面積，結(jié)果見表1。由表1可知，最佳提取時間為15 min。

表1 不同提取時間的提取效果

2.5 線性方程和檢出限

利用BBP，DBP，DEHP的標準儲備液配制成三者的混合標準工作溶液，濃度依次為10，4，2，1，0.5 mg/L，按照1.4的條件分別進行測定，分別以BBP，DBP，DEHP的濃度(x)對相應(yīng)的峰面積(y)進行線性回歸，在0.5～10 mg/L范圍內(nèi)線性方程分別為y=64.722x–0.993，y=65.100x–0.399，y=53.098x+0.111，相關(guān)系數(shù)依次為0.999 9，0.999 9，0.999 8。以3倍信噪比計算BBP，DBP，DEHP的檢出限分別為14，12，6 mg/kg。

2.6 精密度試驗

對BBP，DBP，DEHP濃度為2 mg/L的混合標準溶液連續(xù)進樣6次，測定結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果

2.7 回收試驗

對不含BBP，DBP，DEHP的化妝品樣品進行加標回收試驗，加入2個不同濃度的混合標準溶液，每個濃度做6個平行，按1.3方法進行樣品處理，在1.4的條件下測定，結(jié)果見表3。從表3可以看出BBP，DBP，DEHP加標回收率為92%～105%，滿足常規(guī)檢測需要。

表3 回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

建立了化妝品中鄰苯二甲酸酯類的高效液相色譜–二極管陣列檢測器測定方法，樣品前處理簡單，操作方便，線性范圍較寬，檢出限低，精密度和準確度高，同時檢測成本較低，可滿足用戶的實際需要，為化妝品質(zhì)量監(jiān)督提供技術(shù)支撐。

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Determination of Phthalates in Cosmetics by HPLC–DAD

Sun Wenshan，Tian Furao，Yang Lanhua，
(Yiwu Entry–Exit Inspection＆Quarantine Bureau，Yiwu 322000，China)

The sample was extracted with methanol for 15 min ultrasoniealy. After being centrifuged and fi ltrated with 0.45 μm fi lm，XDB–C18analytical column was employed for separation and analysis, and DAD detector was used to test directly.External standard method was used for quanti fi cation.Linear relationship was found well in the range of 0.5–10.0 mg/L for BBP，DBP and DEHP with correlation coe fi cient more than 0.999 8. The recoveries ranged from 92% to 105%at addition levels of 1.000，2.000 mg/L for them. The relative standard deviation was less than 4%(n=6).The detection limit of BBP，DBP, DEHP were 14，12，6 mg/kg respectively.The method is suitable for detection of BBP，DBP and DEHP in cosmetics.

HPLC–DAD; benzyl butyl phthalate; dibutyl phthalate; di(2-ethylhexy1)phthalate

A

1008-6145(2012)03–0056–04

10.3969/j.issn.1008–6145.2012.03.015

聯(lián)系人：孫文閃；E-mail: sunwentianxiawu@163.com

2012–01–10