MMP-9與Ki-67在胃癌中的表達

曲義坤 徐 劍 楊 婷 劉偉新

(佳木斯大學附屬第一醫院普外二科，黑龍江 佳木斯 154002)

胃癌是我國死亡率最高的惡性腫瘤，臨床上一般采取手術切除或者放化療的方法進行治療，但是若發生浸潤和轉移常造成手術切除困難、術后復發及化療失敗。本文探討基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)及Ki-67在胃癌浸潤復發轉移過程中的作用，尋找胃癌復發轉移的預測指標。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機選取佳木斯大學附屬第一醫院2009年12月至2011年12月普外科切除的，且資料完整的胃癌病例80例進行研究，病理類型均經病理科醫師診斷證實。有完整的臨床資料，男61例，女19例。根據組織學分級分為高、中分化組61例，低分化組19例;根據浸潤深度分為未浸潤漿膜層組38例，浸潤漿膜層組42例;根據有無淋巴結轉移分為無淋巴結轉移組56例，有淋巴結轉移組24例。同時取癌旁5 cm正常組織作為對照組。手術標本經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續切取5μm組織片，進行蘇木素-伊紅(HE)和免疫組織化學染色，所有患者術前均未接受化療和放療。

1.2 試劑和染色方法 鼠抗人MMP-9、Ki-67單克隆抗體及免疫組化SABC試劑盒購于武漢博士德生物技術公司。嚴格按試劑盒說明操作。顯微鏡下觀察，陽性顯色為棕黃色。

1.3 結果判定 MMP-9位于細胞質和(或)細胞膜呈棕黃色;Ki-67表達在細胞核內，出現棕黃色顆粒。陽性細胞＜10%為陰性(-)，陽性細胞10% ～25%為弱陽性(+)，陽性細胞26% ～50%為中陽性(?)，陽性細胞＞50%為強陽性(?)。為簡化計算，陽性表達包括+～?。

1.4 統計學分析 應用SPSS16.0軟件行χ2檢驗。

2 結果

2.1 胃癌組織中MMP-9的表達 MMP-9在正常胃黏膜中很少表達(5例)，在胃癌組織中的MMP-9陽性細胞很多(55例，68.8%)，與對照組相比，差異具有顯著性(χ2=66.67，P=0.000)。陽性物質主要在細胞質和細胞膜中達，整體呈散在、片狀或灶狀分布。見圖1。

2.2 Ki-67在胃癌組織中的表達 Ki-67蛋白主要表達于胃癌細胞核(61例，76.3%)，為棕褐色，呈巢團狀或灶狀分布，在正常胃黏膜組織中表達很少(3例)，差異具有統計學意義(χ2=87.60，P=0.000)。見圖1。

2.3 MMP-9和Ki-67表達與胃癌病理特征的關系 80例胃癌組織中，MMP-9在未浸潤漿膜層組和浸潤漿膜層組的表達率分別為42.1%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中陽性表達率分別為60.7%和94.7%;無淋巴轉移組和有淋巴結轉移組陽性表達率分別為41.6%和80.4% ，他們之間的差異均具有統計學意義(P＜0.01)。Ki-67在未浸潤漿膜層組和浸潤漿膜層組的表達率分別為57.9%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中陽性表達率分別為68.9%和100%;有淋巴結轉移組和無淋巴轉移組陽性表達率分別為85.7%和54.2% ，其差異均具有統計學意義(P＜0.01)。

圖1 MMP-9、Ki-67在胃癌組織中的表達(SABC，×200)

3 討論

大量研究表明，腫瘤從開始形成到浸潤和轉移，經歷三個重要階段:細胞粘連、局部蛋白酶解及細胞動力增加和遷移〔1〕。MMP-9是一種蛋白水解酶，屬于MMP家族膠原酶B，作用底物包括基底膜重要組成成分Ⅳ膠原，主要功能是降解破壞細胞外基質成分〔1〕。本研究顯示，隨著腫瘤惡性程度增加，MMP-9表達量明顯增加。因為在侵襲和轉移過程中，腫瘤細胞依靠自身分泌或誘導其他細胞分泌的MMP-9，使基底膜和細胞外基質結構被降解破壞，從而為腫瘤細胞的轉移開辟了道路，導致腫瘤轉移〔2，3〕，分化程度較低的腫瘤細胞分泌MMP-9的能力較強，從而能夠更加有效地破壞細胞外基質，為腫瘤的浸潤和轉移提供條件。

Ki-67抗原是與增殖細胞相關的核抗原，分布于核內，其表達量隨細胞周期的不同而發生改變，在G1中期到后期出現表達，S期和G2期逐漸增加，有絲分裂期達到高峰。它在細胞周期中起“計時器”分子的作用，或在細胞增殖的調控中發揮著重要的作用〔4，5〕。在正常人體組織，Ki-67蛋白表達可發生在甲狀腺皮質細胞、胸腺皮質細胞及未分化細胞，而其他組織的細胞幾乎無表達〔5〕。Tzanakis等〔6〕研究表明，Ki-67 表達可反映腫瘤細胞的增殖活性，與惡性腫瘤的發展、轉移和預后高度相關，隨惡性腫瘤臨床分期增加和分化程度的降低，Ki-67表達強度增加;胃癌分化程度越低，Ki-67表達越強。本研究結果也顯示，隨著腫瘤惡性程度的增加，Ki-67表達也會增多。Ki-67表達率隨著胃黏膜不典型增生程度的加重呈上升趨勢，由于Ki-67抗體標記了增生細胞核，因此它可以反映腫瘤的增殖程度。惡性腫瘤組織增殖迅速，Ki-67表達的陽性細胞增多，并且隨臨床分期增高，分化程度降低，腫瘤細胞增殖更迅速，Ki-67的表達相應增強;Ki-67表達與胃不典型增生程度、胃癌不同分化程度及胃癌組織學分型密切相關。檢測Ki-67的表達水平，有助于胃癌惡性程度的判斷〔7〕，對指導臨床治療有一定意義。

1 Lukaszewicz-Zajac M，Mroczko B，Szmitkowski M.The significance of metalloproteinases and their inhibitors in gastric cancer〔J〕.Postepy Hig Med Dosw(Online)，2009;63:258-65.

2 Kim JH，Pyun JA，Lee KJ，et al.Study on association between single nucleotide polymorphisms of MMP7，MMP8，MMP9 genes and development of gastric cancer and lymph node metastasis〔J〕.Korean J Gastroenterol，2011;58(5):245-51.

3 王 俊，袁志誠，施 洋.p53，Ki67，VEGF和MMP-9在膠質瘤中的表達及意義〔J〕.江蘇大學學報(醫學版)，2007;17(3):228-31.

4 Yerushalmi R，Woods R，Ravdin PM，et al.Ki67 in breast cancer:prognostic and predictive potential〔J〕.Lancet Oncol，2010;11(2):174-83.

5 Heatley MK.Ki67 protein:the immaculate deception〔J〕.Histopathology，2002;40(5):483.

6 Tzanakis NE，Peros G，Karakitsos P，et al.Prognostic significance of p53 and Ki67 proteins expression in Greek gastric cancer patients〔J〕.Acta Chir Belg，2009;109(5):606-11.

7 Antonini C，Forgiarini O，Chiara A，et al.Hepatoid adenocarcinoma of the stomach.Case report and review of the literature〔J〕.Pathologica，1997;89(3):310-6.