肺吸蟲病患者血清 IL-10、IL-6、TGF-β1水平變化及意義

吳瑪莉，徐莉娜，李安梅，唐莉娜，黃雨婷，檀 軍，何光志

(1貴州省疾病預控控制中心，貴陽550004;2貴州大學動物學專業;3貴陽中醫學院)

并殖吸蟲寄生肺部引起的肺吸蟲病廣泛分布于亞洲、非洲及南美洲，是一種人畜共患的重要寄生蟲病，我國分布的并殖吸蟲優勢種主要為衛氏并殖吸蟲和斯氏貍殖吸蟲［1］。貴州省是斯氏貍殖吸蟲疫區，近年流行病學調查顯示感染發病率居高不下。李安梅等2007年對2 090例寄生蟲病住院病例的回顧性調查分析顯示，肺吸蟲病例占3.21%(67例)，僅次于蛔蟲發病率，男女比例 4.151［2］;2008年貴州省醫院門診患者送檢血清陽性率 為18.18%，2009年上升至22.22%，送檢患者中5～14歲者占39.33% ～68.18%，且廣泛分布于全省各地。肺吸蟲病常用臨床診斷方法主要為通過ELISA檢測患者血清或胸腔積液內的抗體［3，4］，但最佳的方法應該既能用于早期感染潛伏期檢測，亦能在治療階段準確評估藥效，這就需要尋找更敏感的診斷生物標記物。Th2控制的免疫反應是蠕蟲感染的一個獨有特征，但不同蟲種具體調控情況不盡相同［5］。2011年11月～2012年1月，我們對24例肺吸蟲病患者血清IL-10、IL-6、轉化生長因子(TGF)-β1水平進行了測定，旨在為今后檢測試劑盒的開發提供理論基礎，并進一步了解肺吸蟲感染的細胞免疫調節機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象為經珠海海泰肺吸蟲抗體試劑盒診斷陽性的患者共 24例，男20例(83%)，女4例(17%);兒童12例(兒童組)，成年人12例(成年組)。其中16例有生食溪蟹的習慣;6例臨床癥狀不明顯，臨床主要表現為胸水14例，有寄生蟲包塊癥狀的兒童患者4例。選擇4例健康志愿者作為對照組，其一般資料與上述患者具有可比性。

1.2 血清IL-10、IL-6、TGF-β1檢測 用普通生化管抽取24例患者及對照組空腹靜脈血2 mL，3 000 r/min離心5 min取上清，放20℃備用。采用聯科生物IL-10、IL-6、TGF-β1試劑盒進行檢測，步驟如下:每孔先后加入50μL樣本稀釋液及50μL標準品、樣本和對照品，再加入5μL檢測抗體，室溫孵育3 h;洗板后每孔加入100μL辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素孵育45 min;洗板后加入100μL顯色底物TMB孵育10～30 min，加入100μL終止液終止反應，在酶標儀上以450 nm檢測OD值。根據標準品繪制標準曲線并計算直線回歸方程(r＞99%)。以各樣品所測OD值結合方程計算細胞因子濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0進行獨立樣本t檢驗。計量數據以ˉx±s表示，先進行Levene方差齊性檢驗，以α=0.05作為檢驗水準(P＞0.05為方差齊，反之則方差不齊);隨后進行均值方程的t檢驗，根據第一步所獲P值選擇相應t值及對應的P值，以P≤0.05或 P≤0.01為差異具有統計學意義。

2 結果

各組血清 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平見圖 1。Levene方差齊性檢驗顯示，肺吸蟲病患者成年組IL-10、IL-6、TGF-β1 水平方差齊(F=4.22，P=0.059;F=1.546，P=0.234;F=0.103，P=0.753)，與對照組比較結果均無顯著差異(t=1.37，P ＞0.05;t=0.78，P ＞0.05;t=0.63，P ＞ 0.05);兒童組 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平方差不齊(F=1.281，P=0.227;F=1.482，P=0.244;F=0.453，P=0.512)，其中IL-10 水平顯著高于照組(t=2.94，P ＜0.05)，IL-6、TGF-β1水平與對照組比較均無顯著差異(t=1.37，P ＞0.05;t=1.40，P ＞0.05)。

圖 1 血清 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平

3 討論

對鼠類動物模型的研究表明，在腸道蠕蟲感染過程中Th2免疫反應必不可少［6］，可產生 IL-4、IL-9、IL-10、IL-13、IL-5、IL-21 等［6，7］，此類反應均由 Th2極化引起［9］。產生 Th2反應對于蠕蟲的寄生是最基本的條件，但平衡控制此種反應亦是必需的。這種控制由T調節(Treg)細胞完成。當前，有幾種可能的機制被用來解釋蠕蟲感染后的抗炎癥反應，包括 IL-10、TGF-β 和 IgG4 封閉抗體產生等［10，11］。寄生蟲分泌結合寄主TGF-β受體的物質，可促進Treg細胞分化，這些體內抑制性的相互作用降低了感染強度［8］。感染了鼠鞭蟲和人蛔蟲的非洲兒童可比同地區未感染者產生更多的 IL-10和TGF-β［11］，而每隔5年對巴西貧困地區1 060例4～11歲感染上述兩種寄生蟲兒童血清細胞因子的檢測結果顯示，IL-10顯著升高［12］。IL-10 由 IL-4 誘導、TGF-β 介導［13，14］，具有廣泛的抗炎特性及免疫調節功能，是最初來源于Th2細胞的一個獨特產物，隨后發現其在各種淋巴細胞及骨髓細胞中表達［17］，并可通過抑制抗原遞呈細胞功能影響T細胞功能，交叉調節Th1細胞的生長和功能。Treg細胞也分泌 IL-10［15］，故后者可能促進更多抗炎癥表型的發展，并介導與這些感染相關的過敏癥狀的調節［12］。

食源性吸蟲感染可激活典型的Th2反應:①華支睪吸蟲:轉基因小鼠 FVB感染后形成囊腫，刺激與Th2反應相關的細胞因子 IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、TGF-β 分泌增加［16］。②并殖吸蟲:斯氏貍殖吸蟲感染大鼠12周時肝組織中的IL-4增加趨勢顯著，肺吸蟲患兒治療后外周血血清中 IL-5顯著下降［17］。③肝片吸蟲:可溶性蟲卵蛋白可導致 TGF-β1和IL-10升高［18］。該病發病以少年兒童為主，若要篩查出可用于人群診斷的分子標志物應該分別研究未成年和成年患者的情況，因為二者感染后引發的免疫反應可能有所不同。本研究顯示，除兒童組血清IL-10水平顯著高于對照組外，余肺吸蟲感染患者血清IL-10、IL-6、TGF-β1水平均與對照組無顯著差異。即血清IL-10水平僅在喜歡食用不熟溪蟹、且有典型包塊癥狀的兒童肺吸蟲感染患者中普遍升高。可能機制為IL-10在兒童肺吸蟲感染中所起作用很可能是抗炎;TGF-β1的調控并非必需;可能有其他免疫分子通路參與了此類感染。本研究中肺吸蟲感染者血清IL-6水平變化不顯著，和通常的Th2反應涉及IL-6分泌不一致，且與我們前期研究在感染大鼠血清中觀察到該因子顯著上升不同(實驗數據未發表)，提示人類和鼠類蠕蟲感染的Th2反應不同。故鼠模雖已廣泛用于蠕蟲免疫學研究，但不可把所有在動物感染上獲得的實驗結論擴展至人類，如鼠類的嗜酸性細胞和人類有根本性差異，其無 IgE Fc受體表達、不會很快脫粒化［19］。以后應該更針對性地關注人類感染蠕蟲后引發的免疫學變化，研究更多病例的流行病學及血清細胞因子分泌情況，以便獲取更敏感特異的診斷標記物。

綜上所述，對具備食蟹史的兒童肺吸蟲感染患者，血清IL-10升高具有一定的潛在診斷價值。

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