不同加工方法對川明參多糖及歐前胡素含量的影響

雷曉莉，張梅

川明參Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan.為傘形科川明參屬植物，其干燥根為四川常用道地中藥材，具有潤肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺熱咳嗽、熱病傷陰，為滋陰要藥[1]。其主產區分布在四川金堂、巴中、蒼溪、中江等地。作為可藥食兩用的藥材，川明參的市場需求量較大。但是目前川明參藥材質量參差不齊，不同的產地加工方法是影響其藥材質量的重要環節，近年來已引起了人們的廣泛重視。為了解各種加工方法對川明參藥材質量的影響，作者在前期工作基礎上[2～4]，采用分光光度法和高效液相色譜法對不同加工方法所制得的川明參藥材中多糖和歐前胡素含量進行測定，為建立川明參科學的加工方法提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10AT型高效液相色譜儀（日本島津）；UV1100可見紫外分光光度計（中國上海天美科學儀器有限公司）。

1.2 試藥

歐前胡素（中國藥品生物制品檢定所，批號：110826-200511）；D-無水葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200302）；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；高純水（實驗室自制）；其余所用試劑均為分析純。

1.3 藥材

2011年購自四川蒼溪縣龍山鎮，由成都中醫藥大學中藥資源教研室裴瑾教授鑒定為傘形科川明參屬植物鮮品川明參Chuanminshen violaceum Sheh et Shen.的根。將川明參根部洗凈，等分為6份，每份隨機抽取川明參根條20支，重復2次，分別按照以下方法進行加工。①直接曬干；②除去外皮后曬干；③煮后曬干；④除去外皮煮后曬干；⑤蒸后曬干；⑥除去外皮蒸后曬干；⑦傳統加工品（市售成品）。

2 實驗方法

2.1 水溶性多糖含量測定[2]

2.1.1測定條件 參考雷曉莉[2]的方法，采用苯酚-硫酸法對川明參多糖含量進行測定。

2.1.2 對照品溶液的制備 取105oC烘干至恒重的無水葡萄糖25 mg，精密稱定。置25 mL的容量瓶中，加少量蒸餾水溶解，定容至刻度，搖勻，配成1 mg mL-1的葡萄糖儲備液，作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別精密稱取①—⑦號川明參樣品細粉約0.5 g，加蒸餾水回流提取3次，每次90 min，合并三次提取液，過濾，濾液濃縮至50 mL。取濃縮液5 mL加入30%三氯乙酸溶液1 mL，振蕩混合均勻后，4℃下靜置過夜，離心（4000 r min-1），棄去沉淀，收集上清液。取上清液1 mL于50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，即得樣品溶液。

2.1.4 線性關系考察 分別精密吸取0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2 mL，2.5 mL對照品溶液于50 mL容量瓶中，稀釋至刻度，再各取2 mL于10 mL具塞試管中，加1.5 mL 5%苯酚試劑，混勻，精密加入6 mL濃硫酸，振搖后放置5 min，置沸水浴中加熱20 min，立即轉入冰水浴中冷卻至室溫，以蒸餾水為空白，在490 nm波長處測定吸光度。以吸光度對葡萄糖含量進行回歸，得回歸方程Y=10.871X+0.1683（r=0.9994）。

2.1.5 樣品的含量測定 分別取樣品溶液按照上述方法顯色后測定吸光度。根據標準曲線方程計算樣品中水溶性多糖的含量，結果見表1。

2.2 歐前胡素含量測定[3]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Luna C18 色譜柱(250 mm × 4.6 mm，5μm)；流動相：甲醇-水（65:35）；流速：1.0 mL min-1；檢測波長：246 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL；理論塔板數按歐前胡素峰記不低于2000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素對照品適量，用甲醇溶解稀釋至每1 mL分別含歐前胡素80.4μg的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取①—⑦號川明參樣品粉末（60目）約2 g，加甲醇20 mL 回流提取2次，每次2 h。提取液過濾，合并后蒸干，殘渣加甲醇溶解后，定容至5 mL，即得供試品溶液。

2.2.4 線性關系考察 取對照品溶液，分別進樣4 μL，8 μL，12 μL，16 μL，20 μL，24 μL，按上述色譜條件，測定歐前胡素峰面積積分值，得回歸方程為：Y=79055X-766677（R2=0.9992）。

2.2.5 樣品的含量測定 分別吸取供試品溶液各1 μL，注入高效液相色譜儀，按選定色譜條件測定，采用外標一點法計算川明參藥材中歐前胡素含量，結果見表2。

3 實驗結果及分析

3.1 對藥材水溶性多糖含量的影響

采用不同方法初加工后川明參藥材中水溶性多糖含量的變化，結果見表1。

表1 產地加工對藥材水溶性多糖含量的影響（x±s,n=3）

從表中可以看出，直接曬干者水溶性多糖含量最高，其次是去皮曬干者，最低者為除去外皮煮后曬干者，水溶性多糖含量僅為10.29%，最高者是最低者的2.77倍。除去外皮的藥材水溶性多糖含量明顯低于不去皮者；經過煮制或者蒸制的藥材水溶性多糖含量較低，與其他加工方法之間存在較大差異。

3.2 對藥材歐前胡素含量的影響

采用不同方法初加工后川明參藥材中歐前胡素含量的變化，結果見表2。

表2 產地加工對藥材歐前胡素含量的影響（x±s,n=3）

從表中可以看出，直接曬干者歐前胡素含量最高，其次是蒸后曬干者，最低者為除去外皮蒸后曬干者，最高者是最低者的8.4倍。除去外皮的藥材歐前胡素含量明顯低于不去皮者，傳統加工品與其他加工方法之間存在顯著性差異。

4 討論

4.1 川明參常用產地加工方法為：新鮮川明參→硫磺熏軟→水中浸泡→去皮→沸水煮制→晾曬。這種傳統的加工方法得到的川明參色白，質硬，外觀較好。但其中有效成分損失較大，多糖含量僅為8.55%，歐前胡素含量為0.0003 mg g-1。究其原因，川明參多糖是水溶性成分，傳統加工過程中藥材與水接觸時間較長，這可能是導致川明參多糖損失較大的直接原因。此外去皮操作也造成了多糖和歐前胡素的直接損失，帶皮川明參中多糖含量、歐前胡素含量明顯高于去皮川明參，川明參皮中二者含量的高低還有待于進一步研究。

4.2 研究結果表明，直接曬干的川明參中多糖和歐前胡素含量最高，但是川明參含糖量高，黏性較重，直接晾曬不易干燥完全，在此過程中可能存在一定程度的代謝活動，造成藥材某些成分的分解，同時也會因水分較多使藥材產生霉爛現象。如采用沸水浸燙或高溫短時間蒸制，可立即破壞根中的各種代謝酶類，避免成分分解，同時還能縮短干燥時間，便于藥材貯存，且有效成分損失相對較少。因此綜合考慮各種因素，對川明參藥材采用不去皮蒸制的方法不失為一種相對較好的產地加工方法。

[1] 四川省中藥材標準[M].四川:四川省衛生廳,1987:11.

[2] 雷曉莉,宋芳芳,彭成,等.不同產地川明參藥材中多糖含量測定[J].中藥與臨床,2011.2(1):49.

[3] 李宏,趙波,劉靜,等.RP-HPLC測定川明參藥材中香豆素含量[J].成都醫學院學報,2010,5(2):122.

[4] 童富淡,胡家恕,宋勤.不同方法加工杭白芍的芍藥苷含量和FTIR光譜特征[J].中國藥學雜志,2006,41(16):1262.