HPLC法測定羚羊感冒顆粒中的牛蒡子苷含量

2012-06-14 07:02:12吳伯英

中藥與臨床 2012年3期

關鍵詞：方法

吳伯英

羚羊感冒顆粒具有清熱解表之功能，用于流行性感冒，傷風咳嗽，頭暈發熱，咽喉腫痛等癥[1]，處方由羚羊角、金銀花、桔梗、連翹、牛蒡子、荊芥穗、淡豆豉、淡竹葉、甘草、薄荷腦、薄荷素油等11味中藥組成。原標準中無含量測定指標，為了有效控制產品的內在質量，保證其療效，我們對該品種進行標準提高研究，由于牛蒡子具有疏散風熱，宣肺透疹，解毒利咽的作用，是羚羊感冒顆粒的主要藥味。故選擇牛蒡子中所含牛蒡苷作為指標成分，本文采用高效液相色譜法測定其含量，獲得滿意的結果，方法準確可靠。

1 試劑與試藥

高效液相色譜儀（美國Waters公司），配置（Waters2695泵，Waters2487檢測器，Empower色譜工作站，色譜柱Kromasil C18150mm×4.6mm，5μm），電子分析天平（塞多利斯Sartorius BP-210D型，十萬分之一）。牛蒡子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供, 批號 110819 -200505)；羚羊感冒顆粒樣品共7批：黑龍江省濟仁藥業有限公司提供3批中試樣品（批號060101、060102、061101），太極集團重慶桐君閣制藥廠提供4批中試樣品（批號77060001、77060002、77060003、010404001）；缺牛蒡子陰性對照樣品：自制。流動相用甲醇為色譜純（SIGMA-ALDRICH 批號S93191），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱: Kromasil C18（100mm×4.6mm，5μm），流動相：乙腈-水（25∶75）；檢測波長：278nm；進樣量：10μl；柱溫：35℃；流速：0.5mL.min-1。

2.2 供試品溶液的制備

取本品顆粒約2.5g，精密稱定，置具塞瓶中，精密加入50 %甲醇，稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷，稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取牛蒡子苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，搖勻，即得。

2.4 陰性對照品的制備

取羚羊角0.5g，研成細粉，淡豆豉10g，用60%乙醇、25%的乙醇作溶劑進行滲漉；漉液蒸至無乙醇味，濃縮成稠膏，備用；連翹24g、荊芥穗12g，蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與金銀花24g、桔梗16g、淡竹葉12g、甘草10g用蒸餾后的水溶液加水煎煮二次，每次0.5小時，合并煎液，濾過，濾液與清膏合并，濃縮至約98mL，靜置24小時，取上清液，濃縮至相對密度為1.38～1.40(80℃)的清膏。取清膏、蔗糖粉42.5g、淀粉42.5g及羚羊角細粉，混勻，制成顆粒，干燥，加入薄荷腦0.1g，薄荷素油0.1mL及上述連翹等揮發油，混勻，制成100g，即得缺牛蒡子的陰性對照品。

2.5 方法學考察

圖1 羚羊感冒顆粒(缺牛蒡子)HPLC圖譜

圖2 牛蒡子苷對照品HPLC圖譜

2.5.1 專屬性考察取缺牛蒡子的陰性對照品，按上述規定的方法進樣分析。試驗結果表明，缺牛蒡子的陰性對照品色譜中，在與牛蒡子苷對照品色譜峰相同保留時間處無色譜峰（見圖1、圖2），說明本方法無陰性干擾，專屬性強。

2.5.2 穩定性考察按上述規定的方法將新配制的牛蒡子苷對照品溶液精密進樣10μL以及新制備的供試品溶液（批號：060101）精密進樣10μL，測定峰面積，以后每間隔一定時間測定一次，記錄牛蒡子苷色譜峰面積的變化。結果見表1。試驗結果表明：對照品溶液的RSD和供試品溶液的RSD均小于2.0%，說明對照品溶液與供試品溶液均在24h內均穩定。

表1 穩定性考察結果

2.5.3 精密度考察精密吸取供試品溶液和牛蒡子苷對照品溶液10μL，重復進樣6次，記錄牛蒡子苷色譜峰峰面積，結果見表2。結果表明，儀器的精密度良好。

表2 精密度考察結果

2.5.4 線性關系考察按照上述規定的方法，將牛蒡子苷對照品溶液，精密稀釋成系列濃度，注入液相色譜儀，測定，以牛蒡子苷色譜峰峰面積（Y），對進樣量（X）直線回歸，得回歸方程Y =1279543.1X+28914.3 ( r=0.9999，n=6)。結果見表3。

表3 牛蒡子苷線性關系考察結果

試驗結果表明，線性關系良好，線性范圍為0.29888μg～3.7360μg。2.5.5 重復性考察取同一批號羚羊感冒顆粒樣品（060101）6份，按上述規定的方法，將供試品溶液平行制備6份，分別進樣10μL，同時取對照品溶液(0.03976 mL.min-1) 10μl進樣測定，測定牛蒡子苷含量并計算RSD，結果見表4。