銀冬顆粒中總黃酮含量的測(cè)定

李金玲，張聰聰，薛強(qiáng)，張輝，徐曉玉

山銀花性寒，味辛，有散風(fēng)熱，解熱毒的功效[1]。銀冬顆粒是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下精心研制的中藥復(fù)方保健品，具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。主要用于春夏之交瘟疫流行、熱毒所傷，陰虛口渴；或夏季傷暑，煩熱口渴；或嗜食香燥，火毒內(nèi)生等。它是課題組科技扶貧項(xiàng)目“秀山金銀花產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)”的產(chǎn)業(yè)鏈深加工產(chǎn)品，是從秀山灰氈毛忍冬（山銀花）、天冬等物質(zhì)中提取的有效成分，制成的一種藥食兩用保健品，已經(jīng)申報(bào)國(guó)家技術(shù)發(fā)明專利。為了控制銀冬顆粒的質(zhì)量，保證其療效，本文采用紫外分光光度法對(duì)制劑中的總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

JA2003N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；超聲清洗器KQ5200E型（江蘇省昆山市淀山湖鎮(zhèn)）； U3100紫外分光光度計(jì)(日立)。

銀冬顆粒（西南大學(xué)中藥研究所研制，批號(hào)：09112601、09112603、09112704），蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào): 100080-200707)；三氯化鋁、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品12.9 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁的對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品1.5000 g，置25 mL容量瓶中，加入60%乙醇適量超聲溶解30 min，60%乙醇定容，取1.5 mL樣品溶液置10 mL容量瓶中，60%乙醇定容。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（129 μg/ml）0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mL于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 mL，搖勻，靜置6 min；再加10%氯化鋁溶液0.30 mL，搖勻，靜置6 min，搖勻；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，以試劑作空白參比液，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。確立所得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=80.325X–0.0919（r = 0.9997，n=5）。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定5次，記錄吸光度值。吸光度平均值為9.82，RSD%=0.51，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別于0、0.5、1、2、4 h時(shí)，測(cè)定其吸光度并記錄?？傸S酮含量的 RSD%=3.55，表明供試液在4h內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批供試品6份按照供試品溶液的配制方法配置，以試劑（未加對(duì)照品的溶液）為空白參比液在510 nm波長(zhǎng)掃描其最大吸收波長(zhǎng)?？傸S酮的平均含量為48.08 mg/g，RSD %=2.08，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取09112601批樣品0.2000 g，共五份，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.011 g五份于25 mL容量瓶中，按照2.2項(xiàng)下供試品溶液的配制方法配置，以試劑（未加對(duì)照品的溶液）為空白參比液在510 nm波長(zhǎng)掃描其最大吸收波長(zhǎng)，記錄吸光度值。結(jié)果見(jiàn)表1，計(jì)算得平均回收率為：99.85%，RSD= 2.35%。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)Tab.1 Rate of recovery experiment

2.8 樣品總黃酮含量的測(cè)定

取供試品溶液以試劑（未加對(duì)照品的溶液）為空白參比液在510 nm波長(zhǎng)掃描其最大吸收波長(zhǎng)，記錄吸光度值，計(jì)算09112601批樣品中總黃酮的含量為： 44.54 mg/g、43.03 mg/g、45.06 mg/g。

3 討論

以蘆丁為對(duì)照品，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉為顯色劑，根據(jù)黃酮化合物母核中含有堿性氧原子能與游離的鋁離子生成絡(luò)合物，在亞硝酸鈉的堿性溶液中呈紅橙色進(jìn)行比色測(cè)定，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高。

金銀花的花、莖、葉中所含的主要藥用成分是綠原酸和總黃酮，《中國(guó)藥典》也將綠原酸作為金銀花生藥的質(zhì)量控制指標(biāo)，因此銀冬顆粒以綠原酸和總黃酮為銀冬顆粒劑的質(zhì)量控制指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)室前期以綠原酸含量測(cè)定作為制劑質(zhì)量控制的主要部分，為了更好的對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，本文以蘆丁為對(duì)照品，采用分光光度法對(duì)制劑中的總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定方法的研究，結(jié)果表明銀冬顆粒中總黃酮的含量均符合《中國(guó)藥典》對(duì)顆粒劑的要求[2～3]。

[1] 石鉞,石任兵,陸蘊(yùn)如.我國(guó)藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,1999,34(11):724.

[2] 張寶國(guó),王學(xué)禮,劉慶芳.中藥配方顆粒的現(xiàn)狀與發(fā)展動(dòng)態(tài)[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2000,35(7):487.

[3] 王智民,葉祖光,肖詩(shī)鷹,等.對(duì)中藥配方顆粒發(fā)展的幾點(diǎn)建議和應(yīng)用前景分析[J].中國(guó)中藥雜志,2004,29(1):1.