一種盲蝽卵的收集與孵化方法

陳培育， 封洪強(qiáng)＊， 李國(guó)平， 郭線茹， 付曉偉， 邱 峰

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所／河南省農(nóng)作物病蟲(chóng)害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部華北南部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450002；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，鄭州 450002）

綠盲蝽（綠后麗盲蝽）［Apolygus lucorum（Meyer－Dür）]和中黑盲蝽（中黑苜蓿盲蝽）［Adelphocoris suturalis（Jakovlev）]均屬半翅目（Hemiptera）盲蝽科（Miridae），是多食性害蟲(chóng)，主要分布在長(zhǎng)江流域和黃河流域，寄主植物眾多，其中棉花是其最主要的寄主植物［1]。近年來(lái)，隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，特別是20世紀(jì)90年代末，我國(guó)開(kāi)始商業(yè)化種植Bt棉以來(lái)，棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera Hübner）等主要鱗翅目害蟲(chóng)的危害得到了有效控制，棉田化學(xué)農(nóng)藥使用量因此而大幅度減少［2－3]。伴隨棉田廣譜性化學(xué)農(nóng)藥施用次數(shù)和用量的降低，盲蝽類(lèi)害蟲(chóng)的種群數(shù)量劇增，危害增強(qiáng)，呈嚴(yán)重災(zāi)變趨勢(shì)發(fā)展，成為當(dāng)前我國(guó)轉(zhuǎn)Bt基因棉花上的主要害蟲(chóng)［4－5]。

成功地進(jìn)行昆蟲(chóng)的室內(nèi)人工飼養(yǎng)，提供蟲(chóng)齡和營(yíng)養(yǎng)狀況一致的標(biāo)準(zhǔn)試蟲(chóng)，是全面開(kāi)展昆蟲(chóng)研究工作的基礎(chǔ)。目前，國(guó)內(nèi)主要采用菜豆（Phaseolus vulgaris Linn.）進(jìn)行盲蝽的群體飼養(yǎng)［6]，但盲蝽將卵產(chǎn)于植物組織中且植物組織容易腐爛，使得盲蝽卵的觀察和收集非常困難，同時(shí)也不能很好地保證孵化率。付曉偉等研究發(fā)現(xiàn)，4層濾紙＋清水可以有效地進(jìn)行中黑盲蝽卵的收集［7]，但是由于濕度對(duì)盲蝽卵的孵化有顯著影響，在室內(nèi)飼養(yǎng)條件（下文所提飼養(yǎng)條件均為：溫度26℃，L∥D＝16h∥8h，RH＝80%±5%）下，2種盲蝽卵的孵化歷期一般為7～15d［8－11]，而濕濾紙一般在室內(nèi)保濕能力不足1d，濕度很難控制，太濕或太干都會(huì)影響卵的孵化［12]，反復(fù)加水不僅繁瑣且無(wú)法保持一個(gè)穩(wěn)定的濕度環(huán)境，這就阻礙了濾紙作為產(chǎn)卵基質(zhì)的進(jìn)一步推廣，從而極大地影響了兩種盲蝽相關(guān)的研究工作。針對(duì)這些問(wèn)題，作者研究了一種盲蝽卵的收集與孵化方法，它不僅成本低廉，便于操作，更能有效地保證整個(gè)盲蝽卵孵化過(guò)程中所需的穩(wěn)定的濕度環(huán)境。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

綠盲蝽和中黑盲蝽分別采自河南省鄭州市黃河灘旁的苜蓿地和河南農(nóng)業(yè)大學(xué)毛莊實(shí)習(xí)基地苜蓿地，在室內(nèi)飼養(yǎng)條件下以鮮嫩的菜豆莢進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.2 卵的收集與孵化

收集卵的裝置由一套培養(yǎng)皿、衛(wèi)生紙、濾紙三部分組成（圖1a）。培養(yǎng)皿使用前要經(jīng)過(guò)高溫消毒，將大小合適的濾紙4層放入培養(yǎng)皿中，加入蒸餾水濕潤(rùn)至濾紙吸足水分但不滴水為止。在2種盲蝽的產(chǎn)卵期內(nèi)，每天傍晚將鋪有4層濕濾紙的培養(yǎng)皿放入養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)收集卵，次日凌晨取出培養(yǎng)皿統(tǒng)計(jì)落卵量后復(fù)加水至倒置培養(yǎng)皿無(wú)水滴出為止。然后，將濕的衛(wèi)生紙團(tuán)放在濾紙中央，蓋上培養(yǎng)皿上蓋后將整套培養(yǎng)皿放入室內(nèi)適宜條件下進(jìn)行孵化。衛(wèi)生紙團(tuán)的高度略大于培養(yǎng)皿的高度，以保證與培養(yǎng)皿蓋的內(nèi)壁充分接觸（圖1b）。從成蟲(chóng)產(chǎn)下卵后第6天開(kāi)始，每天將培養(yǎng)皿中孵化出的若蟲(chóng)接入放有菜豆的養(yǎng)蟲(chóng)盒中進(jìn)行飼養(yǎng)直至全部若蟲(chóng)孵出。

圖1 卵的收集與孵化裝置結(jié)構(gòu)

1.3 褶皺對(duì)產(chǎn)卵的影響

使用鑷子在4層濕濾紙上捏出若干道放射狀帶凸痕的褶皺（圖1）。傍晚，在室內(nèi)將鋪有褶皺濾紙和普通平滑濾紙的培養(yǎng)皿各一個(gè)隨機(jī)排列放入綠盲蝽和中黑盲蝽的養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)，任其產(chǎn)卵。次日凌晨取出，分別統(tǒng)計(jì)有褶皺濾紙上和平滑濾紙上的產(chǎn)卵量，重復(fù)6次。綠盲蝽和中黑盲蝽各6盒，每盒有成蟲(chóng)100～120頭。采用配對(duì)樣本的t檢驗(yàn)分別對(duì)兩種盲蝽的產(chǎn)卵選擇結(jié)果進(jìn)行比較，數(shù)據(jù)分析利用SPSS16.0進(jìn)行。

1.4 加濕衛(wèi)生紙團(tuán)對(duì)卵孵化的影響

傍晚，將鋪有褶皺濾紙的培養(yǎng)皿放入綠盲蝽和中黑盲蝽的養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)，任其產(chǎn)卵。次日凌晨取出，統(tǒng)計(jì)產(chǎn)卵量。設(shè)常規(guī)加水和濾紙中央加濕衛(wèi)生紙團(tuán)兩個(gè)處理，將收集到卵的培養(yǎng)皿放入相同的孵化環(huán)境中進(jìn)行逐日觀察，記錄孵化的若蟲(chóng)量。兩個(gè)處理下兩種盲蝽卵孵化率的差異比較采用卡平方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)卵基質(zhì)對(duì)兩種盲蝽產(chǎn)卵的影響

在相同的飼養(yǎng)條件下，兩種盲蝽均偏好在有褶皺的濾紙上產(chǎn)卵（p＜0.05）。綠盲蝽在有褶皺濾紙上的落卵量為42.17粒（SD＝23.57，n＝6），顯著高于其在無(wú)褶皺濾紙上的平均落卵量12.33粒（SD＝8.335，n＝6）；中黑盲蝽在有褶皺濾紙上的平均落卵量為53.17粒（SD＝38.136，n＝6），顯著高于其在無(wú)褶皺濾紙上的平均落卵量24.58粒（SD＝22.805，n＝6）。

2.2 綠盲蝽和中黑盲蝽卵的孵化情況

使用此裝置進(jìn)行兩種盲蝽卵的收集及孵化，通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)在正常的飼養(yǎng)條件下2種盲蝽卵一般從第6天開(kāi)始有少量若蟲(chóng)孵化，7～10d可以達(dá)到孵化高峰，整個(gè)孵化歷期最長(zhǎng)達(dá)到15d，整體孵化率至少都能達(dá)到80.00%以上（圖2）。

圖2 綠盲蝽和中黑盲蝽卵的孵化情況

2.3 不同保濕方法對(duì)兩種盲蝽卵孵化的影響

在相同的孵化條件下，兩種盲蝽卵的孵化率在濾紙中央加濕衛(wèi)生紙團(tuán)的情況下更高（p＜0.01）。綠盲蝽在濾紙中央加濕衛(wèi)生紙團(tuán)情況下的孵化率為86.71%，極顯著高于其在常規(guī)加水情況下的孵化率78.37%（χ2＝23.42，p＜0.01）；中黑盲蝽在濾紙中央加濕衛(wèi)生紙團(tuán)情況下的孵化率為87.64%，也極顯著高于其在常規(guī)加水情況下的孵化率76.49%（χ2＝32.56，p＜0.01）。常規(guī)加水法需要每?jī)商鞂?duì)濾紙進(jìn)行重新濕潤(rùn)，整個(gè)孵化期需加水5～7次，而濾紙中央加濕衛(wèi)生紙團(tuán)法在整個(gè)孵化期則無(wú)需加水。

3 討論

本文描述了一種收集和孵化盲蝽卵的方法，本方法通過(guò)衛(wèi)生紙團(tuán)可以有效地吸收蒸發(fā)到內(nèi)壁上的水分重新濕潤(rùn)濾紙，不僅保證了在卵的整個(gè)孵化期內(nèi)有一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的濕度環(huán)境，而且解決了常規(guī)加水法需要反復(fù)加水而給大量飼養(yǎng)盲蝽增加大量工作量的難題。不同的產(chǎn)卵基質(zhì)和孵化方法導(dǎo)致盲蝽卵的孵化率也不盡相同，棉枝上盲蝽卵的孵化率不足70%［7，11]，苜蓿和菜豆上盲蝽卵的孵化率在80%左右［6，11]，而本文所描述的方法不僅操作簡(jiǎn)單，而且也保證了盲蝽卵的孵化率至少在80%以上。由于盲蝽成蟲(chóng)喜歡將卵產(chǎn)在表面粗糙、有絨毛且濕潤(rùn)的物體上［13]，因此作者使用鑷子捏出帶凸痕的褶皺，誘導(dǎo)盲蝽將卵產(chǎn)在皺褶上，避免了盲蝽將卵產(chǎn)在濾紙中央而被壓在衛(wèi)生紙團(tuán)下不能正常孵化的問(wèn)題。此方法不僅能夠更有效地收集到2種盲蝽的卵，而且便于觀察，操作簡(jiǎn)單，成本也相對(duì)低廉，可用于綠盲蝽和中黑盲蝽卵的生物學(xué)研究，也可用于2種盲蝽的工廠化人工飼養(yǎng)。

由于綠盲蝽和中黑盲蝽將卵產(chǎn)在植物組織中，不便觀察和保存，這就給盲蝽卵的生物學(xué)研究帶來(lái)了許多困難：（1）受限于卵產(chǎn)在植物的組織中不便觀察，難以統(tǒng)計(jì)出產(chǎn)卵數(shù)，只能通過(guò)孵化的若蟲(chóng)數(shù)量來(lái)估計(jì)雌蟲(chóng)的生殖能力［10]；（2）花大量時(shí)間統(tǒng)計(jì)出了落卵量，但是由于隨著時(shí)間的增加，新鮮的植物組織容易失水，導(dǎo)致部分卵不能正常孵化，從而造成整體孵化率不高［7]；（3）采用四季豆收集盲蝽卵，通過(guò)一系列措施確保四季豆在一定時(shí)期內(nèi)不腐爛且保持一定的水分，從而提高盲蝽卵的孵化率。這種方法操作相對(duì)繁瑣，且受四季豆本身品質(zhì)的影響較大［6]。該方法很好地解決了這些問(wèn)題，為準(zhǔn)確地統(tǒng)計(jì)盲蝽的卵量以及孵化率提供了可靠的方法。

蔡曉明等研制出一種中黑盲蝽的人工飼料［12]，宋國(guó)晶等用正交試驗(yàn)法優(yōu)選了綠盲蝽若蟲(chóng)人工飼料配方［14]，為兩種盲蝽的工廠化人工飼養(yǎng)奠定了基礎(chǔ)。兩種盲蝽人工飼料都是裝在石蠟?zāi)ぃ╬arafilm）制成的袋子里或用石蠟?zāi)ぐ娠暳锨蝻曃沟模焕诿を懋a(chǎn)卵。使用濕濾紙可以很好地收集盲蝽卵，但由于未掌握孵化技術(shù)，無(wú)法連續(xù)繼代飼養(yǎng)［12]。本文所描述的方法很好地解決了濾紙上盲蝽卵的孵化問(wèn)題，為使用人工飼料連續(xù)飼養(yǎng)兩種盲蝽奠定了基礎(chǔ)。

［1]陸宴輝，吳孔明.盲蝽蟓的生物學(xué)及控制技術(shù)［M].北京：金盾出版社，2008.

［2]Pray C，Huang J，Ma D，et al.Impact of Bt cotton in China［J].World Development，2001，29（5）：813－825.

［3]Wu K，Guo Y，LüN，et al.Efficacy of transgenic cotton containing acry1Ac gene fromBacillus thuringiensis against Helicoverpa armigera（Lepidoptera：Noctuidae）in northern China［J].Journal of Economic Entomology，2003，96（4）：1322－1328.

［4]Wu K，Lu Y，F(xiàn)eng H，et al.Suppression of cotton bollworm in multiple crops in China in areas with Bt toxin containing cotton［J].Science，2008，321（5896）：1676－1678.

［5]Lu Y，Wu K，Jiang Y，et al.Mirid bug outbreaks in multiple crops correlated with wide－scale adoption of Bt cotton in China［J].Science，2010（5982）：1151－1154.

［6]陸宴輝，吳孔明，蔡曉明，等.利用四季豆飼養(yǎng)盲蝽的方法［J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2008，35（3）：216－219.

［7]付曉偉，封洪強(qiáng)，邱峰，等.中黑盲蝽在轉(zhuǎn)Bt基因棉和常規(guī)棉上的實(shí)驗(yàn)種群生命表 ［J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2008，35（4）：339－344.

［8]黃佩忠，丁志寬，何永垠，等.中黑盲蝽主要生物學(xué)特性觀察［J].昆蟲(chóng)知識(shí)，1998，25（4）：208－211.

［9]陸宴輝.盲蝽蟓生態(tài)適應(yīng)性研究［D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，2008.

［10]門(mén)興元，于毅，張安盛，等.不同溫度下綠盲蝽實(shí)驗(yàn)種群生命表研究［J].昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2008，51（11）：1216－1219.

［11]郭小奇，付曉偉，封洪強(qiáng)，等.不同寄主對(duì)中黑盲蝽（Adelphocoris suturalis）生長(zhǎng)發(fā)育和生殖的影響［J].生態(tài)學(xué)報(bào)，2008，28（4）：1515－1520.

［12]蔡曉明，封洪強(qiáng)，原國(guó)輝，等.中黑盲蝽人工飼料的初步研究［J].植物保護(hù)，2005，31（6）：45－47.

［13]蔡曉明，封洪強(qiáng)，原國(guó)輝，等.中黑盲蝽（半翅目：盲蝽科）產(chǎn)卵習(xí)性的研究［C].河南省植保學(xué)會(huì)第八次、河南省昆蟲(chóng)學(xué)會(huì)第七次、河南植病學(xué)會(huì)第二次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集，2005：219－221.

［14]宋國(guó)晶，李國(guó)平，封洪強(qiáng)，等.用正交試驗(yàn)法優(yōu)選綠盲蝽若蟲(chóng)人工飼料配方［J].植物保護(hù)，2010，36（6）：96－99.