氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲生長發(fā)育和解毒酶活性的影響

歐善生， 梁 沛， 宋敦倫， 史雪巖， 高希武＊

（1.廣西農業(yè)職業(yè)技術學院，南寧 530007；2.中國農業(yè)大學農學與生物技術學院，北京 100193）

棉鈴蟲［Helicoverpa armigera （Hübner）]是一種世界性害蟲。其寄主范圍廣，主要包括棉花、玉米、小麥、煙草等作物。20世紀80年代末，此蟲在我國主要棉區(qū)連年暴發(fā)成災，特別是1992年在全國范圍內的特大暴發(fā)，造成直接經濟損失近百億元［1]。90年代后期由于轉Bt基因抗蟲棉的種植，有效控制了棉田1代、2代棉鈴蟲危害，棉田防治害蟲所用的化學農藥量明顯減少。但是抗蟲棉生長后期Bt毒素蛋白表達量減少，不足以有效控制棉鈴蟲為害，因此，對棉田后期棉鈴蟲為害的控制仍需化學防治［2－3]。長期不合理使用殺蟲藥劑，易使害蟲產生抗藥性已引起人們重視，但在大量施用殺蟲藥劑的環(huán)境中，一部分害蟲接觸到殺蟲藥劑的亞致死劑量是不可避免的。而殺蟲藥劑的亞致死劑量對害蟲的生長發(fā)育、繁殖以及體內解毒酶系等都可能產生不同程度的影響［4－12]，這方面已引起越來越多的農藥毒理研究者的重視。

氯蟲苯甲酰胺是一種新型鄰酰胺基苯甲酰胺類化學結構的廣譜、高效、低毒的殺蟲藥劑，以胃毒作用為主，兼有觸殺作用，無殺卵活性，廣泛應用于蔬菜、茶葉、棉花等作物防治害蟲，近年來許多棉區(qū)廣泛應用此藥劑防治棉花害蟲，取得了良好的效果，但有關氯蟲苯甲酰胺對棉鈴蟲的毒力及其亞致死劑量對棉鈴蟲生長發(fā)育和體內解毒酶活性的影響的研究，至今未見報道，本研究將為合理使用該藥劑提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥劑和化學試劑：95%氯蟲苯甲酰胺（Bla）原藥（美國杜邦公司）；α－乙酸萘酯（α－naphthyl acetate，α－NA）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sul－fate，SDS）、毒扁豆堿（eserine）、1－氯－2，4－二硝基苯（1－chloro－2，4－dinitrobenzene，CDNB）、還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）、乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、7－乙氧香豆素（7－ethoxycoumarin）均為美國 Sigma公司產品；固藍B鹽（fast blue B salt）Fluka公司進口，上海化學試劑分公司分裝；7－羥基香豆素（7－h(huán)ydroxycoumarin）購自 Alfa Aesar產品；三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）購自天津科密歐化學試劑有限公司；考馬斯亮藍－G250購自上海化學試劑采購供應站。

供試蟲源：棉鈴蟲于1998年采集于河北邯鄲棉田，全部于室內自然飼養(yǎng)，飼養(yǎng)期間不接觸任何藥劑，作為同源實驗種群。棉鈴蟲飼養(yǎng)及試驗條件：溫度（26±1）℃，濕度70%～80%，光周期L∥D＝16h∥8h。

1.2 毒力測定

采用人工培養(yǎng)基混藥法［13]。先用99.5%丙酮溶液將95%氯蟲苯甲酰胺原藥溶解，后用0.1%Triton X－100稀釋成系列劑量梯度，在人工培養(yǎng)基凝固之前將系列劑量藥液分別加入并混勻，使氯蟲苯甲酰胺混入人工培養(yǎng)基后的劑量分別為0.8、0.4、0.2、0.1、0.04、0.02μg／g，以0.1%Triton X－100水溶液作為空白對照。將配好的混藥培養(yǎng)基移入玻璃試管內（試管直徑為1.8cm，高為8.0cm）。然后，每支試管內接入大小一致的1頭3齡初棉鈴蟲幼蟲，試驗共設7個處理，每處理重復3次，每重復20頭3齡初棉鈴蟲幼蟲，48h后檢查死亡蟲數(shù)。

1.3 亞致死劑量處理

根據(jù)毒力測定結果，以3齡幼蟲48h的LC10、LC25和LC50值作為亞致死劑量，以0.1%TritonX－100溶液為對照組，試驗共4個處理，每處理共設4次重復，50頭棉鈴蟲幼蟲作為1次重復，按1.2中人工培養(yǎng)基混藥法將各處理劑量（LC10、LC25、LC50和空白對照）分別混入培養(yǎng)基中，把培養(yǎng)基裝入試管后，管內對應接入大小一致的棉鈴蟲3齡初幼蟲，幼蟲取食混藥培養(yǎng)基48h后將活幼蟲轉移到備有未混藥培養(yǎng)基的玻璃試管內自然飼養(yǎng)，羽化后成蟲雌雄配對轉移到白紗布封口的塑料杯（杯高15cm，杯口直徑7cm）內繼續(xù)飼養(yǎng)，進一步觀測各處理組棉鈴蟲生長發(fā)育和解毒酶活性變化。

1.4 產卵量、卵孵化量以及卵歷期測定

在各處理組中（LC10、LC25、LC50和空白對照）隨機選取同日羽化的雌、雄棉鈴蟲成蟲1頭配對，每1個處理設10次重復，每1對雌、雄成蟲作為1次重復。將配對成蟲用玻璃試管移入塑料杯內，頂部用白色棉紗布封蓋塑料杯口，杯底放置塑料瓶蓋盛裝含5%蔗糖與1%維生素B混合溶液的吸水海綿，以此作為成蟲的補充營養(yǎng)。杯的外壁以黑色棉布包圍，不讓其透光，以促使成蟲產卵于封口紗布上，逐日收集并記錄產于封口紗布上的蟲卵量，每日更換新的產卵用的封口紗布，直至雌蛾死亡，每24h記錄雌、雄成蟲歷期，卵孵化數(shù)以及卵歷期等。

1.5 發(fā)育歷期、蟲重、幼蟲存活數(shù)、化蛹數(shù)以及羽化數(shù)的測定

每間隔24h觀察記載各處理組各齡幼蟲歷期、體重和存活數(shù)，幼蟲化蛹后分別記錄化蛹數(shù)、蛹重及雌雄蛹歷期，蛹羽化后記錄羽化數(shù)、成蟲歷期、成蟲性比。把各處理當天產的蟲卵連同產卵用的紗布裝入塑料袋內，用橡皮筋系好，以觀察記載各處理組的蟲卵孵化數(shù)，從各處理組F1代中隨機選取同一天孵化的1齡幼蟲，每處理組設4次重復，25頭幼蟲作為1次重復，每一個玻璃試管內移入1頭幼蟲，用未混藥培養(yǎng)基飼養(yǎng)，觀察記載各齡幼蟲歷期、體重及存活數(shù)，待幼蟲化蛹后分別記錄雌雄蛹歷期、蛹重及化蛹數(shù)，蛹羽化后記錄羽化數(shù)、成蟲歷期、成蟲性比等。

1.6 生命表的組建

結合以上各處理組棉鈴蟲生長發(fā)育和繁殖相關指標值調查結果，組建以氯蟲苯甲酰胺不同劑量混藥培養(yǎng)基為飼喂材料的實驗種群生命表。種群趨勢指數(shù)（I）均按徐汝梅［14]描述的方法計算，公式如下：I＝Nn＋1／Nn。其中 Nn表示上一代種群數(shù)量；Nn＋1表示下一代種群數(shù)量。

1.7 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲解毒酶影響的測定

1.7.1 羧酸酯酶活性測定

取不同處理的棉鈴蟲幼蟲（3齡5頭整蟲，4齡1頭整蟲，5、6齡為3頭中腸），加入預冷的1mL 0.04mol／L、pH 7.0磷酸鹽緩沖液中，冰浴下充分勻漿，10 800r／min、4℃離心10min，取上清液作為酶源冰浴備用。羧酸酯酶活性的測定參照Van Asperen［15]的方法，略有改動。在每個試管中依次加入0.45mL磷酸緩沖液（0.04mol／L，pH7.0）、1.8mL 3×10－4mol／L的α－NA溶液（含有3×10－4mol／L毒扁豆堿）、50μL稀釋后的酶液。混勻后于30℃恒溫水浴中反應15min，然后加入0.9mL顯色液（1%固藍B鹽溶液∶5%SDS溶液＝2∶5，現(xiàn)配現(xiàn)用），搖勻后靜置5min，于600nm處比色測定，對照試管在顯色終止反應后補加酶液50μL。試驗各處理設3次重復，每次重復平行測定3次。用α－萘酚標準曲線和酶液蛋白質含量計算出CarE的比活力，單位為 mmol／（min·mg pro）。

1.7.2 谷胱甘肽S－轉移酶活性測定

取樣方法同1.7.1，加入預冷的0.1mol／L、pH 6.5磷酸鹽緩沖液（含1.0mmol／L EDTA），冰浴下充分勻漿，10 800r／min、4℃離心10min，取上清液作為酶源冰浴備用。參照Habig等［16]的方法。以2，4－二硝基氯苯（CDNB）為底物，在酶催化下形成谷胱甘肽－S－芳基復合體，在340nm處出現(xiàn)最大吸收峰。比色皿中依次加入790μL 0.1mol／L pH 6.5磷酸緩沖液，30μL 15mmol／L CDNB，50μL 粗 酶 液 和 30μL 30mmol／L GSH，反應總體積0.9mL，迅速混勻后，在340nm下用時間驅動程序監(jiān)測其吸光值在2min內的變化，并計算反應速度（ΔA340／min）。試驗各處理設3次重復，每次重復平行測定3次。按照公式計算GSTs的 比 活 力：GSTs 比 活 力 ［mmol／（min·mg pro）]＝（ΔA340·υ）／（ε·L·反應時間（min））／（酶液蛋白含量·V（酶液體積mL））。式中，ΔA340為每分鐘光吸收的變化值（ΔA340／min）、υ為酶促反應體系（0.9mL）、ε為產物的消光系數(shù)9.6L／（mmol／cm），L為比色杯的光程（1cm）。

1.7.3 細胞色素P450O－脫乙基酶活性測定

取樣方法同1.7.1，加入預冷的1.5mL 0.1mol／L、pH 7.5磷酸鹽緩沖液（含10%甘油，1mmol／L DTT，1mmol／L PMSF和1mmol／L EDTA），冰浴下充分勻漿，10 800r／min、4℃離心10min，取上清液作為酶源冰浴備用。參照Aitio［17]方法，并加以改進。試管中依次加入705μL Tris－HCl緩沖液（0.1mol／L，pH 7.8），25μL 2mmol／L 7－乙氧香豆素，20μL 6mmol／L NADPH 和250μL酶液。置于34℃220r恒溫搖床下反應10min后，立即將反應試管放入冰中終止反應，并加入300μL 15%（W／V）三氯乙酸（即TCA）終止反應，對照補加酶液。10 800r／min，離心3min，取1mL上清液加入450μL 1.6mol／L、pH 10.3甘氨酸－氫氧化鈉。用LS55熒光分光光度儀（Perkin Elmer，USA）測定產物7－羥基香豆素的熒光值。激發(fā)波長368nm，發(fā)射波長456nm，狹縫寬度分別為5nm和10nm。對照在加入三氯乙酸后補加酶液。試驗各處理設3次重復，每次重復平行測定3次。用7－羥基香豆素標準品做標準曲線，得出吸光值對應的7－羥基香豆素劑量，計算出比活力，單位［pmol／（min·mg pro）]。

1.7.4 蛋白質含量測定

參照Bradford的考馬斯亮藍 G－250法［18]，并加以改進。

1.8 數(shù)據(jù)分析

采用 GraphPad InStat3.0軟件［19]對不同處理組試蟲發(fā)育歷期、蟲重、存活率等進行one－way ANOVA分析，采用POLO軟件進行LC10、LC25、LC50計算。

2 結果與分析

2.1 氯蟲苯甲酰胺對棉鈴蟲幼蟲毒力的測定

通過氯蟲苯甲酰胺6個不同濃度對棉鈴蟲幼蟲毒力測定后，對測定結果用POLO軟件進行計算，LC10、LC25、LC50值分別為0.022（0.008～0.086）、0.072（0.050～0.183）μg／g和0.193（0.287～0.542）μg／g，Slope±SE為1.360±0.304，χ2值為13.419，以 LC10、LC25、LC50相應劑量作為亞致死劑量處理棉鈴蟲3齡初幼蟲。經過反向驗證，即配制含氯蟲苯甲酰胺0.022、0.072μg／g和0.193μg／g的混藥培養(yǎng)基，分別處理相應的棉鈴蟲種群3齡初幼蟲，48h后校正死亡率分別為9.80%、24.82%和49.78%，分別接近10%、25%和50%。

2.2 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量處理3齡幼蟲后對其當代和子代生長發(fā)育的影響

2.2.1 對F0代和F1代生長發(fā)育的影響

測定結果見表1。從表中可知，各劑量處理后，F(xiàn)0代和F1代的幼蟲、預蛹、蛹發(fā)育歷期均比對照組歷期長，但成蟲歷期比對照組縮短。各劑量處理后，F(xiàn)0代3～6齡幼蟲歷期分別延長：LC10組為1.8、0.3、2.2、1.2d，預蛹期和雌雄蛹平均歷期分別延長0.6d和0.4d，雌雄成蟲平均歷期縮短0.8d；LC25組幼蟲歷期分別延長為2.5、1.1、2.0、2.9d，預蛹和蛹歷期分別延長1.5d和1.4d，雌雄成蟲平均歷期縮短1.3d；LC50組幼蟲歷期分別延長為3.8、2.6、2.4、3.7d，預蛹和蛹歷期分別延長3.4d和3.6d，雌雄成蟲平均歷期縮短2.5d。

F1代3～6齡幼蟲歷期也分別延長：LC10組為0.6、0.2、0.6、1.0d，預蛹期和蛹期分別延長0.1d和0.05d，雌雄成蟲平均歷期縮短0.1d；LC25組幼蟲歷期分別延長為1.2、1.3、1.0、1.3d，預蛹期和蛹期分別延長1.0d和0.65d，雌雄成蟲平均歷期縮短0.3d；LC50組幼蟲歷期分別延長為2.2、1.5、1.9、1.9d，預蛹期和蛹期分別延長1.4d和0.70d，雌雄成蟲平均歷期縮短0.5d。

表1 氯蟲苯甲酰胺LC10、LC25和LC50劑量對棉鈴蟲發(fā)育歷期的影響1）

續(xù)表1

2.2.2 對F0代和F1代幼蟲、蛹體重的影響

測定結果見表2。從表中看出，各劑量處理后，F(xiàn)0代和F1代幼蟲和蛹體重均比對照組體重輕，其中F0代3～6齡幼蟲、蛹的體重減輕：LC10組幼蟲分別為0.01、0.017、0.040、0.143g／頭，雌雄蛹平均減輕0.023g／頭；LC25組幼蟲分別為0.02、0.030、0.106、0.150g／頭，雌雄蛹平均減輕0.045g／頭；LC50組幼蟲分別為0.037、0.045、0.150、0.180g／頭，雌雄蛹平均減輕0.080g／頭。

F1代4～6齡幼蟲、蛹的體重比對照組減輕：LC10組幼蟲分別為0.002、0.002、0.003g／頭，雌雄蛹平均減輕0.016g／頭；LC25組幼蟲體重分別為0.006、0.010、0.004g／頭，雌雄蛹平均減輕0.016g／頭；LC50組幼蟲體重分別為0.006、0.013、0.006g／頭，雌雄蛹平均減輕0.020g／頭。表現(xiàn)出隨著劑量的增大，蟲體減輕越顯著。

表2 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量（LC10、LC25和LC50）對棉鈴蟲幼蟲、蛹體重的影響1）

2.2.3 對F0代和F1代生命表的影響

結果見表3。從表中看出，各劑量（LC10、LC25和LC50）處理后，F(xiàn)0代和F1代各齡幼蟲的存活率、化蛹率、羽化率，雌蟲平均產卵量、卵的孵化率均比對照組低，且隨著劑量的增大，受影響越明顯，但雌蟲比例略有提高。其中各劑量處理后，F(xiàn)0代雌蟲比例分別比對照組提高：LC10組為1.8%、LC25組為2.3%、LC50組為2.5%；平均產卵量分別比對照組減少：LC10組為100.4粒／雌、LC25組為125.2粒／雌、LC50組為228粒／雌；種群趨勢指數(shù)分別比對照組下降16.27%、58.51%和71.17%。

各劑量處理后，F(xiàn)1代雌蟲比例分別比對照組提高：LC10組為 1.8%、LC25組為 3.3%、LC50組為4.3%；平均產卵量分別比對照組減少：LC10組為10.3粒／雌、LC25組為182.9粒／雌、LC50組為232.6粒／雌；種群趨勢指數(shù)分別比對照組下降13.66%、52.61%和66.63%。

2.3 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲幼蟲解毒酶的影響

2.3.1 對棉鈴蟲幼蟲CarE活性的影響

結果見表4。從表中可知，用亞致死劑量（LC10、LC25和LC50）處理3齡幼蟲48h后，各處理組棉鈴蟲3～6齡幼蟲CarE比活力均高于相應對照組幼蟲CarE比活力，且各齡幼蟲CarE比活力隨著處理劑量增大而升高，其中LC10組各齡幼蟲CarE比活力依次為1.23、2.39、4.46mmol／（min·mg pro）和6.31mmol／（min·mg pro）；LC25組各齡幼蟲CarE比活力依次為2.54、2.88、4.93mmol／（min· mg pro）和6.52mmol／（min·mg pro）；LC50組各齡幼蟲 CarE比活力依次為2.93、3.37、5.35mmol／（min·mg pro）和6.97mmol／（min·mg pro）；各處理組的6齡幼蟲CarE比活力分別比對照組提高了5%、8%和16%，且4齡、5齡各處理組棉鈴蟲CarE比活力之間差異顯著（p＜0.05）。

表3 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲當代和F1代世代生命表的影響1）

表4 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對不同齡期棉鈴蟲幼蟲CarE活性的影響1）

2.3.2 對棉鈴蟲P450－ECOD活性的影響

結果見表5。從表中可知，用亞致死劑量（LC10、LC25和LC50）處理3齡幼蟲48h后，各處理組棉鈴蟲3～6齡幼蟲體內的P450－ECOD比活力均高于相應對照組幼蟲P450－ECOD比活力，且各齡幼蟲P450－ECOD比活力隨著處理劑量增大而升高，其中LC10組各齡幼蟲P450－ECOD比活力依此分別為1.32、1.64、2.01pmol／（min·mg pro）和2.25pmol／（min·mg pro）；LC25組各齡幼蟲P450－ECOD比活力依此分別為1.63、1.85、2.24pmol／（min·mg pro）和2.64pmol／（min·mg pro）；LC50組各齡幼蟲P450－ECOD比活力依此分別為1.87、2.48、2.92pmol／（min·mg pro）和3.03pmol／（min·mg pro）；各處理組的6齡幼蟲P450－ECOD比活力分別比對照組提高了23%、50%和66%，且5齡、6齡各處理組棉鈴蟲P450－ECOD比活力之間差異顯著（p＜0.05）。

表5 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲不同齡期幼蟲細胞色素P450O－脫乙基酶活性的影響1）

2.3.3 對棉鈴蟲GSTs活性的影響

結果見表6。從表中看出，3種亞致死劑量處理3齡幼蟲48h后，各處理組棉鈴蟲3～6齡幼蟲體內的GSTs比活力均低于相應對照組幼蟲GSTs比活力，且各齡幼蟲GSTs比活力隨著處理劑量增加而降低，其中LC10組各齡幼蟲 GSTs 比活力依次為2.53、2.79、2.90mmol／（min·mg pro）和3.24mmol／（min·mg pro）；LC25組各齡幼蟲GSTs比活力依次為2.25、2.48、2.67mmol／（min·mg pro）和3.05mmol／（min·mg pro）；LC50組各齡幼蟲GSTs比活力依次為2.08、2.29、2.46mmol／（min·mg pro）和2.79mmol／（min·mg pro）；各處理組的6齡幼蟲GSTs比活力分別比對照組降低了10.99%、16.21%和23.35%，且各處理組5齡幼蟲GSTs比活力之間差異顯著（p＜0.05）。

表6 氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對不同齡期棉鈴蟲幼蟲GSTs活性的影響

3 結論與討論

在室內用氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量（LC10、LC25和LC50）對棉鈴蟲3齡幼蟲處理48h后飼養(yǎng)，對F0代和F1代各蟲態(tài)生長發(fā)育及幼蟲體內解毒酶活性均有不同程度的影響，其中各劑量處理后，F(xiàn)0代各處理組3～6齡幼蟲歷期均比對照組延長0.2～3.8d，平均蛹期比對照組延長0.4～3.6d，但成蟲平均歷期比對照組縮短0.8～2.5d，種群趨勢指數(shù)分別比對照組下降16.27%、58.51%和71.17%；F1代各處理組1～6齡幼蟲歷期均比對照組延長0.2～2.6d，平均蛹期比對照組延長0.05～0.70d，成蟲平均歷期比對照組縮短0.1～0.5d，種群趨勢指數(shù)分別比對照組下降13.66%、52.61%和66.63%；各劑量處理后，各處理組3～6齡幼蟲體內的羧酸酯酶（CarE）和細胞色素P450O－脫乙基酶（P450－ECOD）的比活力均高于對照組，其中6齡幼蟲這兩種酶比活力分別比對照組提高了5%～16%和23%～66%，但谷胱甘肽硫轉移酶（GSTs）比活力比對照組降低，其中6齡幼蟲GSTs比活力分別比對照組降低了16.23%、58.51%和71.17%。總體表現(xiàn)為：在LC10～LC50劑量范圍內，隨著劑量的增大，幼蟲、預蛹和蛹歷期延長，成蟲平均歷期縮短，幼蟲和蛹體重減輕，種群趨勢指數(shù)下降，CarE和P450－ECOD比活力升高，GSTs比活力降低。上述結果可為棉田合理使用氯蟲苯甲酰胺提供依據(jù)。

據(jù)報道，殺蟲藥劑的亞致死劑量對害蟲生長發(fā)育會產生不同程度的影響。郝赤等曾報道了氰戊菊酯和甲氰菊酯亞致死劑量對棉鈴蟲的生長發(fā)育具有一定的抑制作用［20]；尹顯慧等報道了用亞致死劑量的多殺菌素（LD25和LD50）處理小菜蛾，隨著處理劑量的增加，幼蟲的發(fā)育歷期顯著延長，處理組的蛹重顯著低于對照組［21]。張琴等采用飼料混毒法測定了氯蟲苯甲酰胺對甜菜夜蛾敏感基線和幼蟲體重的影響，結果表明，隨著處理劑量的提高，幼蟲體重顯著降低［22]。本研究結果與前人有關研究結果基本一致，但氯蟲苯甲酰胺對棉鈴蟲的敏感基線仍待測定。

殺蟲藥劑的亞致死劑量對害蟲的生殖影響很大。姜衛(wèi)華等用氟蟲腈亞致死劑量分別處理浙江蒼南縣抗性二化螟和安徽太湖縣敏感二化螟，結果表明，處理后2個種群的存活率、產卵量、孵化率均明顯降低［23]。本研究發(fā)現(xiàn)氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量處理棉鈴蟲后，棉鈴蟲平均產卵量減小，孵化率降低，種群趨勢指數(shù)下降，與前述研究結果一致，均表現(xiàn)出殺蟲藥劑的亞致死劑量對害蟲繁殖具有一定的不利性。

同一種殺蟲藥劑的亞致死劑量對不同種類害蟲體內的解毒酶影響有差別。據(jù)邢靜等報道，氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量（LD10、LD25和LD50）對小菜蛾處理72h后，蟲體內P450－ECOD比活力受到一定的抑制［24]；而本研究用氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量（LC10、LC25和LC50）對棉鈴蟲3齡幼蟲處理48h后，3～6齡幼蟲的P450－ECOD比活力均高于對照組的比活力，結果相反。由此可知，該殺蟲藥劑的亞致死劑量對蔬菜等作物其他害蟲體內的解毒酶的影響仍待測定。

本研究結果雖已明確了氯蟲苯甲酰胺亞致死劑量對棉鈴蟲幼蟲體內的CarE和P450－ECOD比活力影響是隨著劑量增大而升高，GSTs比活力是隨著劑量增大而下降，但前2種酶對氯蟲苯甲酰胺解毒作用的大小，還有待進一步的研究。

［1]夏敬源.北方棉鈴蟲暴發(fā)成災原因與治理對策［J].中國棉花，1993（2）：9－12.

［2]崔金杰，夏敬源.轉Bt基因棉對棉鈴蟲抗性的時空動態(tài)［J].棉花學報，1999，11（3）：143－144.

［3]楊恩會，林雁，吳益東.棉鈴蟲對氰戊菊酯、辛硫磷混劑的抗性演化及解毒酶活性變化［J].昆蟲學報，2006，49（2）：247－248.

［4]張常忠，高希武，鄭炳宗.棉鈴蟲谷胱甘肽S－轉移酶的活性分布和發(fā)育變化及植物次生物質的誘導作用［J].農藥學學報，2001，3（1）：30－35.

［5]Cutler G C，Scott－Dupree C D，Haris C R.Toxicity of the insect growth regulator novalron to the non－target predatory bug Podisus maculivebtris（Heteroptera：Pentatomidae）［J].Bio－logical Control，2006，38：196－204.

［6]董利霞，譚曉偉，芮昌輝.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽亞致死劑量對不同敏感性棉鈴蟲解毒酶活性的影響［J].植物保護，2011，37（5）：164－168.

［7]Bao H B，Liu S H，Gu J H.Sublethal effects of four insecticides on the reproduction and wing formation of brown planthopper，Nilaparvata lugens［J].Pest Management Science，2009，65（2）：170－174.

［8]Wang D，Gong P Y，Li M，et al.Sublethal effects of spinosad on survival，growth and reproduction of Helicoverpa armigera（Lepidoptera：Noctuidae）［J].Pest Management Science，2009，65（2）：223－227.

［9]Teixeira L A，Gut L J，Wise J C，et al.Lethal and sublethal effects of chlorantraniliprole on three species of Rhagoletisfruit flies（Diptera：Tephritidae）［J].Pest Manag Sci，2009，65：137－143.

［10]Mohammad R L，Ahad S，Mohammad G.Sublethal effects of imidacloprid and pymetrozine on population growth parameters of cabbage aphid，Brevicoryne brassicae on rapeseed，Brassica napus L.［J].Insect Science，2007，14（3）：207－212.

［11]梁沛，夏冰，高希武，等.阿維菌素和高效氯氰菊酯亞致死劑量對小菜蛾谷胱甘肽S－轉移酶的影響［J].中國農業(yè)大學學報，2003，8（3）：65－68.

［12]王建軍，董紅剛，袁林澤.亞致死茚蟲威對斜紋夜蛾生長發(fā)育及解毒酶活性的影響［J].揚州大學學報，2009，30（4）：85－89.

［13]何康，劉瑞龍，盧良恕，等.中國農業(yè)百科全書（農藥卷）［M].北京：農業(yè)出版社，1993：391.

［14]徐汝梅.昆蟲種群生態(tài)學［M].北京：北京師范大學出版社，1987：61－84.

［15]Van Aspern K.A study of housefly esterase by means of a sensitive colorimetric method［J].J Insect Physio，1962，8：401－406.

［16]Habig W H.Assays for differentiation of glutathione S－transferase［M]∥William B J，ed.Method in Enzymology.New－York：Academic Press，1981：398－405.

［17]Aitio A A.simple and sensitive assay of 7－ethoxycoumarin deethylation［J].Anal Biochem，1978，85（2）：488－491.

［18]Bradford M M.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein－day binding［J].Anal Biochem，1976，72：248－252.

［19]GraphPad Software.InStat guide to choosing and interpreting statistical tests，1998，GraphPad Software，Inc.，San Diego California USA，www.graphpad.com.

［20]郝赤，李會仙，魏波，等.氰戊菊酯和甲氰菊酯對棉鈴蟲的亞致死效應［J].現(xiàn)代農藥，2005，4（5）：39－42.

［21]尹顯慧，吳青君，李學鋒，等.多殺菌素亞致死劑量對小菜蛾解毒酶系活力的影響［J].農藥學學報，2008，10（1）：28－34.

［22]張琴，王少麗，楊愿愿，等.氯蟲苯甲酰胺對甜菜夜蛾敏感基線的測定和幼蟲體重的影響［J].長江蔬菜，2010（18）：87－89.

［23]姜衛(wèi)華，韓召軍，張國華.氟蟲腈對二化螟抗、感種群的亞致死效應［J].南京農業(yè)大學學報，2004，27（2）：51－54.

［24]邢靜.氯蟲苯甲酰胺對小菜蛾生長發(fā)育和解毒酶的亞致死效應［D].北京：中國農業(yè)大學，2011：16－36.