血必凈對油酸型急性肺損傷家兔血清炎癥因子與肺水轉運的影響

黃敏堅 張遠新 李平

急性肺損傷(ALI)是由各種肺內外致病因素引起的肺部失控性炎癥反應，導致肺泡毛細血管損傷為基本病理生理特點的急性進行性呼吸衰竭，其嚴重階段稱為急性呼吸窘迫綜合征。本文通過制備油酸型急性肺損傷兔模型，采用血必凈注射液進行治療，通過實驗觀察能減輕肺損傷，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組 取新西蘭兔30只，雌雄不限，體重1.8~2.2 kg，平均體重2.0 kg。隨機分為三組：空白對照組，單純急性肺損傷組，血必凈治療組(ALI+血必凈)。每組再按照1 h、12 h、24 h、36 h、48 h分為5個時段，每個時段2只家兔分別進行觀察。

1.2 試劑 試劑油酸(oleic acid，OA)，天津市津北精細化工有限公司產品，血必凈注射液(規格10ml/支，天津紅日藥業有限公司產品)，戊巴比妥鈉，肝素，生理鹽水。

1.3 油酸型ALI動物模型制備 方法：沿家兔耳緣靜脈注入油酸0.8 ml/kg，復制油酸肺損傷動物模型。注入油酸30 min后可出現較典型的ALI表現。ALI診斷標準：氧合指數(PaO2/FiO2)≤300 mm Hg。病理指標：油酸致傷后，肺臟體積增大，表面可見大小不等的暗紅色斑片狀病灶，切面可有淡紅或白色泡沫樣液體溢出；光鏡下觀察，肺組織內有白細胞浸潤，可見肺間質及肺泡水腫，肺出血明顯，肺組織濕/干(W/D)比值明顯升高。

1.4 實驗方法 ALI成模后，治療組予耳緣靜脈注入血必凈注射液10 ml/kg。空白對照組及ALI組予生理鹽水10 ml/kg注射。于1 h、12 h、24 h、36 h、48 h耳緣動脈抽血，應用ELISA方法檢測血清TNF-a、IL-6含量，處死并分離肺組織，取右肺組織進行組織切片，在光鏡下觀察病理形態變化。游離左肺，稱量濕質量(wet weight，W)，經脫水后，再稱量干質量(dry weight，D)，以W/D比值表示肺組織含水量。

1.5 統計學處理 實驗數據均通過SPSS 13.0軟件處理。計量資料以(s)表示，組間差異比較用方差分析，模型前后數據比較用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清TNF-α、IL-6含量的變化見表1、表2。

2.2 單純ALI組W/D比值明顯高于正常對照組，說明油酸致肺損傷后，肺泡內大量的液體溢出；血必凈治療24 h后W/D值明顯下降，即肺水腫有一定程度的減輕。見表3。

表1 血清TNF -α含量的變化(s)ng/ L

表1 血清TNF -α含量的變化(s)ng/ L

*與單純ALI組比較，P<0.05；△與正常對照組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對照組 193.5±28.4 201.2±33.6 197.3±40.4 190.3±37.2 205.7±32.8單純 ALI組 503.5±46.7△ 587.3±47.2△ 562.5±43.1△ 309.4±42.5△ 365.5±32.6△血必凈治療組 496.4±50.2 401.6±48.3* 203.5±46.8* 201.3±46.4* 233.5±40.5*

表2 血清IL-6含量的變化(s)ng/ L

表2 血清IL-6含量的變化(s)ng/ L

*與單純ALI組比較，P<0.05；△與正常對照組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對照組 176.8±30.3 185.2±32.5 180.6±34.6 179.2±31.4 186.3±33.2單純ALI組 268.6±38.7 502.3±40.6△ 658.4±38.5△ 564.3±41.5△ 470.4±37.6△血必凈治療組 296.5±36.3 229.5±38.2* 203.3±37.6* 189.3±40.2* 191.6±38.7*

表3 三組家兔各時段W/D比值(s)ng/L

表3 三組家兔各時段W/D比值(s)ng/L

*與正常對照組比較，P<0.05；△與單純ALI組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對照組 6.58±0.43 6.39±0.46 6.40±0.38 6.52±0.40 6.83±0.42單純 ALI組 10.37±0.39* 10.87±0.40* 10.32±0.41* 10.79±0.47* 10.59±0.48*血必凈治療組 6.85±0.42△ 6.27±0.45△ 6.14±0.37△ 6.22±0.46△ 6.43±0.42△

3 討論

急性肺損傷是臨床上常見的急癥之一。因其發病機理至今尚未完全清楚，病死率極高。且多數病例常于發病數天內死亡。因此，ALI至今仍是臨床比較棘手的問題之一[1]。研究證實，急性肺損傷(ALI)病理生理為炎癥反應導致肺毛細血管內皮和肺泡上皮損傷，肺微血管內皮細胞腫脹、結構破壞，發生凋亡或壞死[1]。由中性粒細胞為主介導的肺臟局部炎癥反應致肺毛細血管通透性增高性肺水腫，肺泡液滲出，形成富含蛋白質的肺水腫及透明膜形成，并伴有肺間質纖維化。TNF-α是引起ALI的啟動因子，它可通過誘導NO，內皮素、氧自由基、多肽遞質、脂質遞質和黏附分子等的產生而發揮作用[2]。促炎癥細胞因子主要由肺內炎癥細胞、上皮細胞、內皮細胞和纖維母細胞在局部產生[3]。本實驗通過家兔耳緣靜脈注射油酸復制急性肺損傷模型。油酸是一種具有較強毒性的飽和脂肪酸，主要通過氧化應激反應、促凝血活性增高以及內皮素作用等機制導致肺損傷，破壞肺泡上皮屏障，同時油酸對肺毛細血管內皮細胞、肺泡Ⅱ型上皮細胞等有直接毒性作用，降低肺泡上皮主動清除肺泡內液體的效率[4]。通過注射油酸后動物即出現呼吸窘迫、紫紺，呼吸頻率明顯增快，1 h后血氣分析示嚴重的低氧血癥。病理檢查發現肺間質和肺泡水腫、肺間質和肺泡出血、毛細血管充血、中性粒細胞浸潤等急性肺損傷的基本病變。在ALI模型制備成功后1 h，血清TNF-α開始升高，于傷后12 h 升高達峰值，24 h已開始下降，但在48 h仍高于正常對照組。IL-6 于傷后1 h開始升高、12~24 h 仍有非常明顯的增高，TNF -α、IL-6 在創傷后不同時間升高，可能提示他們的因果關系。TNF -α早期出現，說明其是ALI的關鍵性始動因子，而IL-6的隨之出現并且持續較長時間，則可能是細胞因子群活化后級聯反應不斷擴大的增強因子[5]。

近年來，關于中醫藥治療ALI越來越受到重視，從臨床上觀察能改善癥狀，但具體的機理仍在探討中。血必凈注射液主要組成為丹參、川芎嗪、阿魏酸、芍藥苷、紅花黃色素A等[6]。文獻報道，血必凈注射液能在體內外有效拮抗LPS，抑制體內多種炎性介質的病理生理作用，具有抗細菌毒素、降低內毒素水平、調節免疫及炎性介質、改善微循環、保護血管內皮細胞等作用，對應激性臟器損傷具有良好的保護作用。并通過保護血管內皮細胞，通過提高超氧化物歧化酶活性等途徑，保護和修復應激狀態下受損的臟器[7]。本實驗研究顯示，血必凈注射液組與對照組比較血清TNF-α、IL-6活性明顯改善(P<0.05)，W/D值明顯下降，滲出減輕。提示血必凈注射液對ALI家兔具有肺保護效應，可減輕ALI肺組織炎性細胞浸潤、淤血和上皮細胞損傷，但其具體機制還需進一步探討。

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[2]肖光華，吳敏，宓越群.急性肺損傷中醫病機及治法探討[J].上海中醫藥雜志，2008，25(10)：54-55.

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[4]黃曉軍，王選錠.急性肺損傷抗氧化治療的研究進展[J].臨床內科雜志，2004，21(10)：652-654.

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[7]劉建新，余林中.中藥保護急性肺損傷作用機理研究進展陜西中醫學院學報[J].2009，12(6)：83-85.