注射用轉化糖中細菌內毒素的檢測

王宗春 姜俊勇 宋金春

注射用轉化糖為復方制劑。臨床用于需要非口服途徑補充能量的患者，尤其是燒創傷、術后、感染等胰島素抵抗(糖尿病狀態)患者及藥物和酒精中毒患者的能量補充。中國藥典2010年版第2部關于注射劑熱原檢查方法有家兔法和細菌內毒素檢查法2種，其中細菌內毒素檢查法具有靈敏度高、重現性好、簡便易行等優點，目前尚未有該制劑細菌內毒素檢查的報道。筆者參照中國藥典2010年版2部［1］，應用鱟試劑法對注射用轉化糖進行研究，為該品種細菌內毒素檢測方法的建立提供依據。

1 實驗材料

1.1 儀器 恒溫水浴箱(江蘇南通嘉程儀器有限公司);微量取液器(50～250 μl)(上海金林生化試劑儀器廠);SW-80A型旋渦混合器(上海醫科大學儀器廠);細菌內毒素檢查用具(廈門鱟試劑實驗廠)。

1.2 藥品與試劑 注射用轉化糖(規格:每瓶果糖12.5g和葡萄糖12.5g，海南靈康制藥有限公司，批號:090701，091123，091227);細菌內毒素檢查用水(BET水，規格:10ml，廈門鱟試劑實驗廠，批號:091201);細菌內毒素工作標準品(規格:10 EU/支，中國生物制品檢定所，批號:2009-7);鱟試劑(規格:0.1ml，標示靈敏度:0.5 EU/ml，廈門鱟試劑實驗廠，批號:091149);鱟試劑(規格:0.1ml，標示靈敏度:0.5 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司，批號:090325)。

2 方法與結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核 按照《中國藥典》2010年版2部附錄XI E細菌內毒素檢查法［1］進行操作，結果見表1。結果表明所用2批鱟試劑靈敏度測定值 λc均在0.5λ～2.0λ(λ為靈敏度標示值)，符合規定，可用于實驗。

表1 鱟試劑靈敏度復核結果

2.2 細菌內毒素限值(L)的確定 細菌內毒素限值L=K/M［1］，式中K為人每千克體重每小時最大可接受的細菌內毒素劑量，注射劑為5 Eu·kg－1·h－1;M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，按照注射用轉化糖說明書用法用量，M為500mg·kg－1·h－1(以果糖計)，因此本品的細菌內毒素限值L=K/M=0.01 EU/mg。

2.3 樣品最小有效稀釋濃度(C)的確定 樣品有效稀釋濃度C=λ/L，其中λ為鱟試劑常用靈敏度，L為細菌內毒素限值，即0.01 EU/mg，目前市售的鱟試劑 λ 常為 0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 EU/ml，對應的樣品最小有效稀釋濃度為50.0、25.0、12.5、6.0、3.0mg/ml(以果糖計)。

2.4 干擾預試驗［2，3］用BET水將注射用轉化糖配制成果糖濃度分別為 50.0、25.0、12.5、6.0、3.0mg/ml的系列溶液，作為供試品陰性對照(NPC)系列。另制備同樣濃度的供試品系列溶液，使每一濃度的供試品溶液中都含有2 λ細菌內毒素，作為供試品陽性對照(PPC)系列。每一供試品濃度重復兩管，按常規設立陽性對照(PC)管和陰性對照(NC)管。用λ為0.5 EU/ml的鱟試劑與上述系列溶液進行反應，依文獻［1］操作，結果見表2。初步判斷當果糖濃度在50.0mg/ml下時，供試品對細菌內毒素檢查無干擾現象。

表2 干擾預試驗結果

2.5 干擾確證試驗 根據干擾預試驗結果，用果糖濃度為50.0mg/ml的供試品溶液及BET水分別稀釋細菌內毒素工作標準品，配成細菌內毒素最終濃度分別為 1.0、0.5、0.25、0.125 EU/ml的系列溶液，分別取0.1ml加入到已復溶的2個不同廠家生產的鱟試劑(λ為0.5 EU/ml)管內，每個濃度平行做4管，另取供試品溶液做2支陰性對照管，依文獻［1］進行干擾試驗，結果見表3，Et/Es在0.5～2(Es為用BET水制成的細菌內毒素標準溶液反應終點濃度的幾何平均值，Et為用供試品溶液制成的內毒素標準溶液反應終點濃度的幾何平均值)，說明果糖濃度為50mg/ml的供試品溶液對鱟試劑與細菌內毒素之間的凝集反應既無抑制作用，也無增強現象。見表3。

表3 干擾試驗結果

2.6 樣品的細菌內毒素檢查 取3批注射用轉化糖，稀釋成果糖濃度為50mg/ml，使用兩個廠家生產的鱟試劑(靈敏度λ均為0.5 EU/ml)，按中國藥典2010年版2部附錄細菌內毒素檢查法檢查，結果全部呈陰性。

3 討論

不同廠商生產的鱟試劑在生產工藝、配方、質量參數等各方面都有一定的差異，有時會影響到鱟試劑的抗干擾能力［4］。故本文采用廈門鱟試劑實驗廠和湛江安度斯生物有限公司2個廠家的鱟試劑對3個批號的樣品進行干擾試驗，結果顯示3批樣品稀釋成果糖濃度在50mg/ml下時，分別使用2個廠家的鱟試劑，樣品不干擾細菌內毒素與鱟試劑的凝集反應，因此使用鱟試劑方法檢查注射用轉化糖中細菌內毒素是可行的。

1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).第2010版.北京:中國醫藥科技出版社，2010.附錄99-102.

2 馬建麗，陳新文，王明媚，等.細菌內毒素檢測法用于蔗糖鐵注射液檢測的可行性研究.中國藥物應用與監測，2009，6:147-149.

3 王曉蕾，白林，陸路，等.注射用炎琥寧細菌內毒素檢查法.中國藥物應用與監測，2007，4:41-43.

4 高玉清，紀敬娟，冀增.美洛昔康注射液細菌內毒素檢查法的研究.河北醫藥，2009，31:1661-1662.