肝病相關(guān)自身抗體檢測在自身免疫性肝病診斷中的價值研究

高會霞 劉玉珍

自身免疫性肝病是一組病因和發(fā)病機理尚不完全清楚、但多數(shù)認為和自身免疫有關(guān)的肝臟疾病，臨床常見的主要有自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)及原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC).早期診斷及治療對這些疾病發(fā)展及預(yù)后至關(guān)重要，而實驗室檢查特別是自身抗體檢查對這些疾病的診斷有重要意義。本研究對我院2914 份自身抗體檢驗結(jié)果并結(jié)合臨床進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年10月至2010年10月我醫(yī)院門診及住院就診肝病患者2914 例送檢標本，并對自身抗體陽性529病例的查閱臨床資料。乃入病例中，男139例，女390例;平均年齡(49±15)歲;診斷為PBC的61例和AIH的57例患者均符合美國肝病學(xué)會2000年版PBC和AIH診療指南。

1.2 方法

1.2.1 檢測患者外周血自身抗體及其滴度:采用德國歐蒙實驗診斷公司肝臟馬賽克，間接免疫熒光法檢測患者外周血自身抗體:抗核抗體(ANA)、抗線粒體抗體(AMA)、抗平滑肌抗體(ASMA)、抗肝腎微粒體抗體(LKM)、，抗肝細胞膜抗體(LMA)、抗肝細胞溶質(zhì)抗原1型抗體(LC-1)、抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)，抗線粒體抗體(AMA)-M2亞型，。待檢血清自1:100起稀釋，與組織細胞孵育30分鐘;加入異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗體結(jié)合30分鐘;洗片、封片后熒光顯微鏡觀察結(jié)果。組織或細胞內(nèi)出現(xiàn)特異性綠色熒光、血清稀釋度〉1∶100為陽性。

1.2.2 ELISA法檢測全部血清的病毒學(xué)肝炎指標:HbsAg、抗-HBs、HbeAg、抗-HBe、抗-HBc、HAVIgM、HCVIgG、HEVIgM、CMV-IgM、EB-IgM等。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率進行描述，應(yīng)用四格表χ2檢驗，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 2714 份臨床送檢標本中肝病相關(guān)自身抗體檢測結(jié)果自身抗體陽性472例，陽性率17.4%，抗核抗體(ANA)陽性418例，陽性率15.4%，抗線粒體抗體(AMA)陽性124例，陽性率4.57%，抗平滑肌抗體陽性91例，陽性率3.35%，抗肝腎微粒體抗體(LKM)陽性12例，陽性率0.59%，抗肝細胞膜抗體陽性(LMA)8例，陽性率0.29%，抗肝細胞溶質(zhì)抗原1型抗體(LC-1)陽性5例，陽性率0.18%，抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)陽性3例，陽性率0.11%，2914 例送檢標本中診斷為AIH 59例，檢出率為2.17%，診斷為 PBC 61例，檢出率為2.24%。自身抗體陽性患者74.57%診斷為病毒性肝炎及相關(guān)疾病。見表1。

表1 472例不同肝病患者自身抗體檢測結(jié)果 例(%)

2.2 不同肝病患者自身抗體與臨床診斷的關(guān)系 PBC組和AIH組血清中各種自身抗體陽性率及滴度明顯高于其他肝病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.01)。77.0%的PBC患者 ANA陽性，滴度均為1∶320以上，而且PBC患者中73.8%的AMAM2亞型陽性;98.3%的AIH患者ANA陽性，滴度均為1∶320以上，在AIH中可見23.7%的ASMA陽性，且98%熒光模型為滴度大于1∶320的抗肌動蛋白型，并可見20.3%的LKM、8.5%的LC-1、3.4%的LSP抗體陽性。在其他肝病中多見ANA抗體陽性，且多為低滴度。見表1。

2.3 AIH和PBC的熒光模型 ANA的核型特征顯著，抗核模型抗體在PBC中的比例51.1%顯著高于在AIH中比例6.9%，AIH中多以顆粒型、著絲點型、以及二者的混合核型常見。見圖 1、表 2。

圖1 ANA在AIH與PBC中的熒光模型

表2 ANA陽性的AIH和PBC患者的熒光模型例(%)

2.4 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能比較 ANA檢測陽性滴度≥1∶320乙型肝炎患者與滴度1∶100及ANA陰性乙型肝炎患者ALT AST ALP GGT之間均數(shù)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能指標比較 U/L

表3 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能指標比較 U/L

ALT AST GGT ALP TBIL ALB ANA陽性≥1∶320 512±47 312±15 411±287 504±371 58±35 32±9類別187±21 117±33 92±61 142±73 63±37 33±10 ANA陽性1∶100 212±13 110±26 88±55 139±67 53±46 31±11 ANA陰性

3 討論

近年來，隨著自身抗體的檢測越來越受到臨床及實驗室的重視，臨床醫(yī)生對自身免疫性肝病認識程度明顯提高，相繼有文章報道，但對于自身免疫性肝病的發(fā)病率及患病率的報道較少。本研究連續(xù)收集我院門診及住院就診肝病患者2914 例送檢標本，具有一定的參考價值。

從查閱到的529例患者的臨床資料分析，AIH患者59例，檢出率為2.17%，其中ANA陽性率最高(58/59)98.3%，且滴度大于1∶320，可見ANA的檢測在AIH的診斷中的重要性。未發(fā)現(xiàn)ANA較特定的熒光模型，表明ANA單個抗體無診斷價值。在AIH中可見23.7%的ASMA陽性，且98%熒光模型為滴度大于1∶320的抗肌動蛋白型(抗-actin)，其他肝病患者中ASMA陽性率低，且多為低滴度。可見高滴度的抗actin是Ⅰ型AIH的特異性標志，與報道一致，故臨床上開展抗actin抗體檢測能增加Ⅰ型AIH的診斷率。LKM是Ⅱ型AIH的標志性抗體，本組資料中LKM陽性率(12/59)20.3%，顯著高于其他肝病，因此檢測LKM可提高ANA陰性的AIH患者診斷率。LMA陽性率(8/59)13.6%，LC-1陽性率(5/59)8.5%，LSP陽性率(3/59)3.4%，這幾種抗體是Ⅱ型AIH另三個標志性抗體，對AIH的診斷具有較高的特異性。

本研究中PBC的檢出率為2.24%，AMA陽性是本病最重要的免疫學(xué)診斷指標，AMAM2亞型為 PBC 特異性抗體［1，2］，通過檢測AMA-M2可早期發(fā)現(xiàn)PBC［3］。本資料61例 PBC患者中AMAM2亞型的陽性率是74%，在其他肝病中未見AMAM2亞型陽性，說明M2抗體對PBC診斷最具特異性，與國內(nèi)外的報道一致［4］。PBC患者出現(xiàn)的ANA的陽性率為77%，其主要熒光模型中為核膜型(51.1%)、著絲點型(21.1%)，并顯著高于其他肝病，可見ANA熒光模型分析對AMA陰性的PBC有相當(dāng)重要的意義。

本研究結(jié)果還提示病毒性肝炎(HBV、HCV、HEV等)可見低滴度(1∶100)的 ANA、ASMA、AMA，高滴度少見，可見低滴度自身抗體對自身免疫性肝病無明確診斷意義。對于病毒性肝炎患者臨床查出病毒指標后，不再對病人進行自身抗體檢測，而明確此次發(fā)病原因是自身免疫性疾病并發(fā)了病毒感染還是病毒性肝炎發(fā)病是非常重要的，通常高滴度自身抗體的存在與自身免疫性疾病密切相關(guān)［4，5］。本文比較了 ANA滴度≥1∶320、1∶100 及陰性乙型肝炎患者肝功能，發(fā)現(xiàn) ANA≥1∶320陽性乙型肝炎患者的ALT、AST、ALP GGT明顯高于ANA 1∶100及陰性乙型肝炎患者，提示病毒感染過程中自身免疫反應(yīng)加重了患者肝損傷［6］，而臨床上治療兩種疾病方法不同，如將ANA≥1∶320陽性乙型肝炎患者進行抗病毒治療，可能更加增強自身免疫性細胞，將會加重原有病情。因此在為患者進行抗病毒治療前，需進行自身抗體及滴度檢測以實施有針對性的個體治療［7，8］。

綜上所述，自身抗體檢測不僅對自身免疫性肝病的臨床診斷、鑒別診斷、治療的具有重要意義，對其他抗病毒治療的乙肝患者進行自身抗體檢測有助于疾病的治療。

1 Margare FB，David EJJ.Antimitochondral and other autoantibodies in primary biliary cirrhosis.Autoimmune liver disease.2nd ed.Amstendam:Elsevier，1998.287-304.

2 Talwalkar JA，Lindor KD.Primary bilary cirrhosis.Lancet，2003，362:3-61.

3 Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.The follow-up of a symtom atic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adullt population samples.J Gastroentenrol，2001，36:248-254.

4 馬燕，林炳亮，嚴穎，等.自身免疫性肝病的回顧性研究.國際內(nèi)科學(xué)雜志，2008，35:501-504.

5 劉燕敏，閆惠平，汪俊韜.肝功能異常患者中自身抗體及自身免疫性肝病的檢測.中華肝臟雜志，2004，12:360-362.

6 張海萍，閆惠平，馮霞，等.乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及臨床相關(guān)性.首都醫(yī)科大學(xué)報，2007，2:154-157.

7 張利方，李方，石莉萍，等.自身免疫性肝炎和乙型肝炎患者自身抗體檢測及對比分析.微循環(huán)學(xué)雜志，2010，20:40-41，46.

8 張利方，鄭山根，周萍.自身免疫性肝病患者自身抗體檢測及臨床意義.免疫學(xué)雜志，2009，25:416-417.