血小板相關(guān)抗體檢測(cè)與骨髓形態(tài)學(xué)在特發(fā)性血小板減少性紫癜診斷中的應(yīng)用價(jià)值

邢江濤，張玉娜，孫 潔，陶朝欣，劉 璐，朱 蕓

（1.河北省石家莊市平安醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊 050021；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院外賓病房，河北石家莊 050000；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊 050000）

血小板相關(guān)抗體檢測(cè)與骨髓形態(tài)學(xué)在特發(fā)性血小板減少性紫癜診斷中的應(yīng)用價(jià)值

邢江濤1，張玉娜1，孫 潔2，陶朝欣1，劉 璐1，朱 蕓3*

（1.河北省石家莊市平安醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊 050021；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院外賓病房，河北石家莊 050000；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊 050000）

目的探討血小板相關(guān)抗體（platelet-associated antibody，PAIg）與骨髓形態(tài)學(xué)在特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）診斷中的臨床價(jià)值，以及PAIg與血小板計(jì)數(shù)的關(guān)系。方法應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)30例ITP患者PAIg，同時(shí)對(duì)血象、骨髓形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。結(jié)果血小板抗體陽(yáng)性率80.0%（24/30），其中IgG79.0%，IgA33.0%，IgM62.0%。3項(xiàng)同時(shí)陽(yáng)性者3例（12.5%），2項(xiàng)同時(shí)陽(yáng)性者12例（50.0%），1項(xiàng)陽(yáng)性率9例（37.5%）。骨髓象顯示巨核細(xì)胞增多，以成熟受阻為主要表現(xiàn)，有少數(shù)患者巨核細(xì)胞正常或減少。結(jié)論3種血小板抗體IgG、IgA、IgM含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但存在以下趨勢(shì)，即血小板計(jì)數(shù)越低，血小板抗體水平越高。PAIg檢測(cè)是診斷ITP的有效指標(biāo)，也可了解ITP的發(fā)展程度，還可以用于治療ITP預(yù)后的療效觀察。

紫癜，血小板減少性，特發(fā)性；抗體；流式細(xì)胞術(shù)

特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是因免疫機(jī)制造成血小板破壞增多的一種出血性疾病，又稱(chēng)免疫性血小板減少性紫癜。ITP診斷缺乏特異性診斷指標(biāo)，骨髓形態(tài)學(xué)檢查多以排除其他血小板減少性疾病而確診。血小板相關(guān)抗體（platelet associated antibodies，PAIg），大多結(jié)合在血小板表面，產(chǎn)生抗血小板抗體，導(dǎo)致血小板破壞增加，數(shù)量減少。近年來(lái)，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)PAIg已成為診斷ITP的重要指標(biāo)。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)30例ITP患者PAIg，同時(shí)對(duì)血象、骨髓象形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察，旨在探討PAIg與骨髓形態(tài)學(xué)在ITP診斷中的臨床價(jià)值，以及PAIg與血小板數(shù)量的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2010年1月—2011年4月門(mén)診及住院ITP患者30例，男性14例，女性16例，年齡3～71歲，平均32.5歲。診斷均符合張之南《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［1］。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器：PAIgG、PAIgA、PAIgM為美國(guó)Caltag公司產(chǎn)品，流式細(xì)胞儀Epics XLⅣ型為美國(guó)貝克曼-庫(kù)爾特公司生產(chǎn)。

1.2.2 血小板分離：抽取空腹血 2mL，放入EDTA-K2抗凝管中，輕輕混合，800r/min離心10min。吸取富含血小板血漿，2 500r/min離心5min。棄上清液，加入PBS洗滌，2 500r/min離心5min，反復(fù)3次，棄上清液，加入PBS重懸血小板，調(diào)至20×106/L左右。

1.2.3 抗體標(biāo)記：取5只試管，分別標(biāo)注同型、IgG、IgA、IgM，加入相應(yīng)單抗各10μL，每管加調(diào)整后的血小板各50μL，室溫避光30min，在標(biāo)記好的各管中加入PBS洗滌，2 500r/min離心5min。棄上清液。加500μL PBS避光10min

1.2.4 檢測(cè)分析：選樣FSLog和SSLog及FL1 3個(gè)參數(shù)，根據(jù)FS和SS圈定血小板，分析血小板FL1（熒光1）熒光強(qiáng)度。每份標(biāo)本獲取設(shè)門(mén)內(nèi)細(xì)胞10 000個(gè)以上，檢測(cè)各個(gè)指標(biāo)的陽(yáng)性率和熒光強(qiáng)度，數(shù)據(jù)分析使用EXPO 32 ADC分析軟件。

1.2.5 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：30例骨髓涂片、外周血涂片經(jīng)瑞-姬染色后，在光學(xué)顯微鏡下，血涂片計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，骨髓涂片計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，計(jì)數(shù)全片巨核細(xì)胞總數(shù)，并進(jìn)行分類(lèi)，求其百分比。觀察各型巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用Minitab統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以±s表示，采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PAIg陽(yáng)性情況：PAIg陽(yáng)性率80.0%（24/ 30），其中IgG79.0%，IgA33.0%，IgM62.0%。3項(xiàng)同時(shí)陽(yáng)性3例（12.5%，3/24）。2項(xiàng)同時(shí)陽(yáng)性12例（50.0%，12/24），其中IgG、IgM陽(yáng)性9例，IgG、IgA陽(yáng)性 2例，IgA、IgM陽(yáng)性 1例。1項(xiàng)陽(yáng)性 9例（37.5%，9/24），其中IgG5例，IgA 2例，IgM 2例。

2.2 PAIg與血小板數(shù)量分析：根據(jù)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果將樣本劃分為高（ ＞50×109/L）、中（30～50× 109/L）、低（＜30×109/L）3組，3組IgG、IgA、IgM含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但存在以下趨勢(shì)，即血小板計(jì)數(shù)越低，血小板抗體水平越高，見(jiàn)表1。

表1 血小板計(jì)數(shù)與PAIg的關(guān)系Table 1 Comparison of platelet count and platelet antibody detection（±s，%）

表1 血小板計(jì)數(shù)與PAIg的關(guān)系Table 1 Comparison of platelet count and platelet antibody detection（±s，%）

Platelet count（×109/L） n IgG IgA IgM＞50（52～94）5 3.51±4.42 1.48±1.56 2.84±2.19 30～50（32～40） 6 10.10±12.63 3.08±3.24 8.35±9.10＜30（5～21） 13 12.30±11.32 3.99±6.41 12.17±13.50 F 1.215 0.434 1.287 P 0.317 0.654 0.298

2.3 外周血及骨髓象形態(tài)學(xué)：①血紅蛋白正常27例（90.0%），伴有缺鐵表現(xiàn)3例（10.0%）。②白細(xì)胞正常25例（83.3%），白細(xì)胞增高5例（16.7%）。③血小板減低30例（100.0%）。④增生活躍16例（53.3%），增生明顯14例（46.7%）。⑤粒/紅比值正常16例（53.3%），減低13例（43.3%），增高1例（3.3%）。⑥巨核細(xì)胞增高25例（83.3%），減低4例（13.3%），正常1例（3.3%）；巨核細(xì)胞分類(lèi)，幼稚型巨核細(xì)胞4.0%，顆粒型巨核細(xì)胞80.0% ～100.0%，產(chǎn)板型巨核細(xì)胞4.0% ～12.0%，裸核型巨核細(xì)胞4.0%～12.0%。

3 討 論

ITP屬于自身免疫性疾病，患者臨床以皮膚、黏膜、臟器出血及血小板減少為主要表現(xiàn)。關(guān)于ITP診斷現(xiàn)狀，近期國(guó)際工作小組及美國(guó)血液學(xué)年會(huì)提出，3個(gè)月以?xún)?nèi)稱(chēng)“新診斷的ITP”，3～12個(gè)月稱(chēng)為“持續(xù)性ITP”，12個(gè)月以上稱(chēng)為“慢性ITP”，有需要治療的出血癥狀或出現(xiàn)新的出血癥狀為“重癥ITP”［2］。對(duì)于血小板＞30×109/L的患者，如果沒(méi)有出血，可以不給予治療［3］。ITP發(fā)病機(jī)制多認(rèn)為與免疫異常有關(guān)［4-5］。PAIg是造成免疫性血小板減少的主要原因，PAIg大多結(jié)合在血小板表面，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)PAIg已成為診斷ITP的重要指標(biāo)［6-8］。關(guān)于PAIgA、PAIgG、PAIgM與血小板計(jì)數(shù)關(guān)系的報(bào)道，結(jié)果也不完全一致。薛磊等［9］檢測(cè)了59例ITP患者，PAIgA94.9%，PAIgM 88.1%，PAIgG 94.9%，3種同時(shí)陽(yáng)性率78.0%，其中以PAIgA表達(dá)最高。方擁軍等［10］檢測(cè)了53例ITP患者，PAIgG（77.00±20.99）%，PAIgM（62.00±24.91）%，PAIgA（48.98±25.36）%，以PAIgG表達(dá)最高。本研究 PAIg檢 測(cè) 總 陽(yáng) 性 率 80.0%，其 中PAIgG79.0%，PAIgM62.0%，PAIgA33.0%，2種以上混合性抗體陽(yáng)性率62.5%，結(jié)果略低于文獻(xiàn)報(bào)道［9-10］。本研究3種血小板抗體含量間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但存在以下趨勢(shì)，PAIgG＞PAIgM＞PAIgA，血小板計(jì)數(shù)越低，血小板抗體水平越高。與相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致［6，10-11］。

骨髓形態(tài)學(xué)檢查診斷ITP，雖然以排除其他血小板減少性疾病而確診，但它是診斷ITP不可缺少的基礎(chǔ)技術(shù)手段之一。ITP的極少數(shù)患者有輕度貧血或白細(xì)胞增高，骨髓象增生程度多以增生活躍或明顯活躍為主。巨核細(xì)胞增多或正常，極少數(shù)患者巨核細(xì)胞減少或缺如，以顆粒型巨核細(xì)胞增多為主，產(chǎn)板型巨核細(xì)胞減少。以巨核細(xì)胞成熟受阻為主要表現(xiàn)，可能是巨核細(xì)胞和血小板含有共同抗原，PAIg也可抑制骨髓中的巨核細(xì)胞發(fā)育，影響血小板的產(chǎn)生，使其發(fā)生成熟障礙。個(gè)別患者由于出血可伴有輕度缺鐵性貧血或伴有感染表現(xiàn)。近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，流式細(xì)胞儀以快速檢測(cè)、靈敏度高、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、所需標(biāo)本量少等優(yōu)點(diǎn)在臨床診斷及研究中得到廣泛應(yīng)用，即使血小板計(jì)數(shù)＜10×109/L仍可分析。流式細(xì)胞儀也存在特異性差的不足，如果僅依靠PAIg檢測(cè)診斷ITP，可能會(huì)導(dǎo)致誤診。臨床上引起血小板減少的疾病有很多，如白血病、骨髓增生異常綜合征、再生障礙性貧血等血液系統(tǒng)疾病［12］，骨髓形態(tài)學(xué)與PAIg聯(lián)合檢測(cè)才能保證ITP的正確診斷。隨著對(duì)ITP發(fā)病機(jī)制的研究不斷深入［13-14］，對(duì)于ITP的診斷與治療將不斷完善。

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（本文編輯：劉斯靜）

THE APPLICATION VALUE OF DETECTING PLATELET ASSOCIATED ANTIBODY AND BONE MARROW MORPHOLOGY IN THE DIAGNOSIS FOR IDIOPATHIC THROMBOCYTOPENIC PURPURA

XING Jiangtao1，zHANG Yuna1，SUN Jie2，TAO Chaoxin1，LIU Lu1，zHU Yun3*
（1.Department of Laboratory，Shijiazhuang Pingan Hospital，Hebei Province Shijiazhuang 050021，China；2.Department of Foreign Guests Ward，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；3.Department of Laboratory，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo investigate the value of platelet-associated antibody（PAIg）and bone marrow morphology in the diagnosis of idiopathic thrombocytopenic purpura（ITP）and the correlation between the platelet relative antibody and number of platelet count.MethodsThe platelet associated IgG（PAIgG）in peripheral blood of the 30 patients with ITP were detected by flow cytometry（FCM），meanwhile the hemogram bone marrow morphology were observed.ResultsIn the 30 patients，there were 24 cases whose platelet antibody was positive，the positive rate was 80.0%，of which IgG 79.0%，IgA 33.0%，IgM 62.0%，among them there were 3 cases whose three platelet antibodies simultaneous positive（12.5%），12 cases whose two antibodies positive（50.0%），and 9 cases whose one positive（37.5%），The Bone marrow examination of most ITP patients revealed that the numbers of the megalokaryocyte（MK）were increased and its main manifestation was the maturation arrest of MK.But in a few ITP patients the numbers of the MK were normal or decreased.ConclusionThere is a tendency in the levels of PAIgG，PAIgA，PAIgM，The lower expression of platelet count，the higher expression of platelet antibodies.Therefore the PAIgG can be used as an effective indicator in the diagnosis，clinicaltreatment and prognostic evaluation of ITP.

purpura，thrombocytopenic，idiopathic；antibodies；flow cytometry

R554.6

A

1007-3205（2012）11-1283-03

2012-04-12；

2012-07-04

邢江濤（1976-），男，河北廊坊人，河北省石家莊市平安醫(yī)院主管檢驗(yàn)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事血液病形態(tài)學(xué)診斷及染色體技術(shù)研究。

*通訊作者。E-mail：zhuyun_2008@yahoo.com.cn

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.11.018