14種β-內(nèi)酰胺類抗生素對腸桿菌科細(xì)菌的體外抑菌活性比較

劉志華，魏 榮

（1.河北省承德縣中醫(yī)院檢驗科，河北承德 067000；2.河北省省直機關(guān)第一門診部，河北石家莊 050000）

·論 著·

14種β-內(nèi)酰胺類抗生素對腸桿菌科細(xì)菌的體外抑菌活性比較

劉志華1，魏 榮2

（1.河北省承德縣中醫(yī)院檢驗科，河北承德 067000；2.河北省省直機關(guān)第一門診部，河北石家莊 050000）

目的評價β-內(nèi)酰胺類抗生素對革蘭陰性桿菌的體外抑菌活性。方法采用瓊脂二倍稀釋法測定哌拉西林/三唑巴坦等抗生素對臨床分離革蘭陰性桿菌的最小抑菌濃度（microbial sensitivity testcs，MIC）。結(jié)果頭孢三代抗生素中以頭孢他啶的抑菌作用最強，最差為頭孢曲松和頭孢噻肟；四代頭孢菌素頭孢吡肟的抑菌作用優(yōu)于頭孢他啶，酶抑制復(fù)方制劑中哌拉西林/三唑巴坦的抑菌作用最強。亞胺培南和美羅培南碳?xì)涿赶ｎ惪股匾志饔米顝姡窗l(fā)現(xiàn)耐碳?xì)涿瓜╊惪股氐哪c桿菌科細(xì)菌。結(jié)論三代頭孢菌素中頭孢他啶的抑菌作用最強，與頭孢吡肟的抑菌作用相似，酶抑制復(fù)方制劑中哌拉西林/三唑巴坦的抑菌作用最強，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏實驗結(jié)果選擇用藥。

β-內(nèi)酰胺類；微生物敏感性試驗；腸桿菌科

革蘭陰性桿菌是臨床常見致病菌，耐多藥革蘭陰性桿菌所致感染是臨床治療的棘手問題，特別是超級細(xì)菌（耐碳?xì)涿瓜╊惪股氐哪c桿菌科細(xì)菌）報道以來，腸桿菌科細(xì)菌的耐藥問題逐漸成為臨床關(guān)注的特點［1］。本研究選擇我院腸桿菌作為研究對象，檢測臨床常用β-內(nèi)酰胺類抗生素對腸桿菌進行體外抑菌活性，掌握目前腸桿菌細(xì)菌的藥敏狀態(tài)，以便更好地指導(dǎo)臨床選擇抗生素。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株：臨床菌株均是2005-2010年從患者的血液、尿液、膿汁和痰臨床標(biāo)本中分離而來，排除同一患者的重復(fù)菌株，經(jīng)API鑒定實驗條鑒定后，將各菌株制成108～109CFU/ml菌液，備用。其中大腸埃希菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extend spectrum Beta-lactamases，ESBL）陽性菌（ESBL+）56株，大腸埃希菌ESBL陰性菌（ESBL-）112株，肺炎克雷伯菌ESBL陽性菌（ESBL+）56株，肺炎克雷伯菌ESBL陰性菌（ESBL-）112株，陰溝腸桿菌56株，質(zhì)控菌株為大腸埃希菌25922。

1.1.2 藥物：阿莫西林/棒酸（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司生產(chǎn)），氨芐西林/舒巴坦（浙江迪耳藥業(yè)有限公司生產(chǎn)），哌拉西林（齊魯制藥廠生產(chǎn)），哌拉西林/三唑巴坦（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司生產(chǎn)），頭孢哌酮（華北制藥有限公司生產(chǎn)），頭孢哌酮/舒巴坦（輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)），頭孢噻肟（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司生產(chǎn)），頭孢噻肟/舒巴坦（湘北威爾曼制藥有限公司生產(chǎn)），頭孢曲松（瑞士羅氏有限公司生產(chǎn)），頭孢他啶（上海新先鋒藥業(yè)生產(chǎn)），頭孢吡肟（中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)），亞胺培南（美國默沙東公司生產(chǎn)），美羅培南（深圳海濱制藥生產(chǎn)）。

1.1.3 培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂，由法國Biomerieux公司生產(chǎn)。

1.1.4 多點接種儀：北京醫(yī)科大學(xué)昆侖藥物發(fā)展研究所生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 二倍瓊脂稀釋法：采用二倍瓊脂稀釋法測定最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration， MIC）。先將抗生素分別以無菌磷酸鹽緩沖液倍比稀釋成10個濃度，將各濃度的藥液各10mL分別加入到已融化并冷卻至50℃左右的90mL M-H瓊脂中，混勻后立即傾注平皿，使培養(yǎng)基的抗生素最終濃度依次為0.5、1、2、4……256mg/L。用微量多點接種儀將108～109CFU/mL菌懸液接種到含不同濃度抗生素的上述瓊脂平板表面，置35℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果，以抑制細(xì)菌生長的最低抗生素濃度確定為MIC。并根據(jù)抗生素藥物敏感的臨界濃度，計算對細(xì)菌的敏感率。

1.2.2 ESBL的確證實驗［2］：根據(jù)臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（clinical and laboratory standard institute，CLSI）2010推薦的方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)進行檢測。

2 結(jié) 果

大腸桿菌ESBL的陽性率52.3%，肺炎克雷伯菌的ESBL陽性率44.5%。

14種β-內(nèi)酰胺類抗生素及其復(fù)方制劑的抑菌效果比較：青霉素類抗生素中以哌拉西林/他唑巴坦的抑菌效果最好；三代頭孢菌素中以頭孢他啶的作用最強，其次為頭孢哌酮/舒巴坦，最差為頭孢曲松和頭孢噻肟；四代頭孢菌素頭孢吡肟的抑菌作用優(yōu)于頭孢他啶；亞胺培南和美羅培南碳?xì)涿赶ｎ惪股匾志饔米顝姟Ｒ姳?。

表1 14種β-內(nèi)酰胺類抗生素對腸桿菌科細(xì)菌抑菌效果的比較Table 1 In vitro antibacterial activities of beta-lactam antibiotic against clinical Enterobacteriaceae（%）

3 討 論

革蘭陰性桿菌是臨床常見致病菌，多重耐藥革蘭陰性桿菌所致感染是臨床治療的棘手問題，耐多藥革蘭陰性桿菌主要耐藥機制是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶［3］。β-內(nèi)酰胺酶能夠破壞滲透入菌體內(nèi)的β-內(nèi)酰胺類抗生素的活性［4］。目前，細(xì)菌所產(chǎn)的β-內(nèi)酰胺酶Abmler依據(jù)分子生物學(xué)的序列分析可分為A、B、C、D四大類。大部分ESBL屬于A類酶，ESBL是由質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，主要基因型為TEM類、SHV類，此類基因型除可水解青霉素類和第一、二代頭孢菌素，還可以水解第三代頭孢菌素及單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素如氨曲南，但對頭霉素類和碳青霉烯類無影響，酶抑制劑克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦對其有抑制作用。常見于肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和少數(shù)腸桿菌屬細(xì)菌［2］。治療上可用頭霉素類和碳青霉烯類抗生素和含酶抑制劑抗生素［5］。

本研究中選擇臨床常用14種β-內(nèi)酰胺類抗生素及其復(fù)方制劑作為研究對象，進行抑菌效果比較，結(jié)果表明青霉素類抗生素中以哌拉西林/他唑巴坦的抑菌效果最好；三代頭孢菌素中以頭孢他啶的作用最強，其次為頭孢哌酮/舒巴坦，最差為頭孢曲松和頭孢噻肟；四代頭孢菌素頭孢吡肟的抑菌作用優(yōu)于頭孢他啶；所有檢測的抗生素對產(chǎn)ESBL的細(xì)菌的敏感性都低于非產(chǎn)ESBL的細(xì)菌。因此，ESBL的檢測對臨床用藥有重要的指導(dǎo)價值。自耐碳?xì)涿瓜╊惪股氐哪c桿菌科細(xì)菌報道以來，引起醫(yī)學(xué)界的高度重視［6-7］。亞胺培南和美羅培南碳?xì)涿赶ｎ惪股匾志饔米顝姡匆娔吞細(xì)涿瓜╊惪股氐哪c桿菌科細(xì)菌，這與相關(guān)報道類似［8-9］。

由于廣譜抗生素的長期應(yīng)用，革蘭陰性桿菌產(chǎn)生酶的種類和耐藥性也在不斷變化，因此，臨床醫(yī)師一定要了解本院感染疾病常見的酶的分布及耐藥情況的變遷，合理應(yīng)用抗生素，減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，從而提高臨床療效。

［1］ YANG Q，WANG H，SUN H，et al.Phenotypic and genotypic characterization of Enterobacteriaceae with decreased susceptibility to carbapenems：results from large hospital-based surveillance studies in China［J］.Antimicrob Agents Chemother，2010，54（1）：573-577.

［2］ 汪夏，朱德妹，胡付品，等.2009年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測［J］.中國感染與化療雜志，2010，10（5）：325-334.

［3］ 肖永紅，王進，趙彩云，等.2006-2007年Mohnarin細(xì)菌耐藥監(jiān)測［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2008，18（8）：1051-1056.

［4］ KRAKER ME，WOLKEWITZ M，DAVERY PG，et al.Burden of antimicrobial resistance in European hospitals：excess mortality and length of hospital stay associated with bloodstream infections due to Escherichia coli resistant to third - generation cephalosporins［J］.J Antimecrob Chemother，2011，66（2）：398-407.

［5］ 朱德妹，汪復(fù)，胡付品，等.2010年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測［J］.中國感染與化療雜志，2011，11（5）：321-329.

［6］ KAHLMETER G. Breakpoints for intravenously used cephalospporinsin enterobacteraceae-EUCAST and CLSI breadpoints［J］.Cin Microbiol Infect，2008，14（Suppl 1）：169-174.

［7］ 劉文靜，楊啟文，徐迎春，等.2010年CLSI三代頭孢菌素折點改變對我國大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌及奇異變形桿菌藥物敏感性結(jié)果解釋的評估［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2010，33（10）：942-947.

［8］ 時東彥，趙建宏.2008年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院臨床分離菌分布及耐藥譜型監(jiān)測［J］.中國感染與化療雜志，2011，11（1）：57-60.

［9］ 時東彥，趙建宏，楊敬芳，等.2004-2005非重癥監(jiān)護病房革蘭陰性桿菌分布及耐藥性監(jiān)測［J］.臨床薈萃，2007，22（12）：887-889.

（本文編輯：劉斯靜）

IN VITRO ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF Beta-LACTAM ANTIBIOTICS AGAINST CLINICAL ENTEROBACTERIACEAE

LIU Zhihua1，WEI Rong2
（1.Deparment of Laboratory，Traditional Chinese Medicine Hospital of Chengde County，Hebei Province，Chengde 067000，China；2.The First Out-Patient Department of Hebei Provincial Institution，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo evaluate in vitro antibacterial activities of Beta-lactam antibiotic against clinical Enterobacteriaceae.MethodsThe minimal inhibitory concentrations（MIC）of antibiotic against clinical isolates of bacteria was tested by standard agar dilution method.ResultsThe antimicrobial action of ceftazidine was the strongest against Enterobacteriaceae among the third generation cephalosporins；cefepimewas more activecompared with ceftazidine.Antibacterial activities of piperacillin/tazobactam was the strongest among β-Lactamaseinhibitors.Resistant strain to carbapenems was not found.ConclusionThe surveillance of antimicrobial resistance was very important for guiding rational antimicrobial therapy.

Beta-lactams；microbial sensitivity tests；enterobacteriaceae

R446.5

A

1007-3205（2012）09-1042-03

2012-02-23；

2012-05-07

劉志華（1975-），女，滿族，河北承德人，河北省承德縣中醫(yī)院檢驗師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床檢驗學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.020