乙型肝炎病毒DNA與血清標志物的檢測結果分析

李亞威，張 征，孫靜娜，趙小潔，趙 帥，代麗麗

（河北醫科大學第一醫院檢驗科，河北石家莊 050031）

·論 著·

乙型肝炎病毒DNA與血清標志物的檢測結果分析

李亞威，張 征，孫靜娜，趙小潔，趙 帥，代麗麗

（河北醫科大學第一醫院檢驗科，河北石家莊 050031）

目的探討血清乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）水平與HBV血清標志物（HBV-marks，HBV-M）的相關性。方法采用實時熒光定量PCR對649例HBV感染者血清標本中HBV-DNA含量進行檢測，同時用酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）法檢測其HBV-M。結果246例乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）陽性標本中HBV-DNA陽性率為100.0%，與HBeAg陰性標本的陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.01）；乙型肝炎表面抗原（hepatitis B s antigen，HBsAg）陽性標本和HBsAg陰性標本，HBV-DNA檢測結果比較差異有統計學意義（P＜0.01）。結論患者血清HBV-DNA的陽性率與HBV-M的存在狀態相關，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）法檢測HBV-DNA能更準確、直接地反映體內病毒復制情況。

肝炎，乙型；DNA；診斷試驗，常規

乙型肝炎（乙肝）病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是世界范圍內流行的疾病，我國是HBV的高發區，HBV感染率60%～70%［1］，2006年乙肝血清流行病學數據表明，乙肝病毒表面抗原（hepatitis B s antigen，HBsAg）攜帶者為0.93億，其中乙肝患者大約有3 000萬。因此，準確、迅速的診斷對乙肝的治療和預后極為重要。本研究采用先進的熒光定量聚合酶鏈反應（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）技術檢測血清HBV脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）含量，并同時采用酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）法檢測乙肝病毒標志物（HBV-marks，HBV-M），旨在探討HBV-DNA與HBVM的關系，為乙肝的臨床診斷、抗病毒藥物的選擇及療效觀察提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象：649份血清標本來自我院2010年1—6月門診及住院的乙型肝炎患者，其中男性278例，女性351例，年齡8～76歲，平均46歲。

1.2 檢測方法：采用實時熒光定量 PCR檢測HBV-DNA含量；采用ELISA法檢測HBV-M。

1.3 試劑：HBV-DNA（FQ-PCR法）檢測試劑由上海科華有限公司提供。HBV-M（ELISA法）試劑盒由上海科華生物工程有限公司提供。

1.4 儀器：杭州博日有限公司生產FQD-33A實時熒光PCR擴增儀，北京普朗新技術有限公司生產的DNX29620洗板機，DNM29602GM酶標儀。

1.5 統計學方法：應用SPSS11.5統計軟件進行數據處理，計數資料以百分率表示，采用 χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HbeAg）（+）標本（第1～2組）共246例，HBV-DNA陽性率為100.0%，HBeAg（-）標本（第3～13組）共403例，HBV-DNA陽性率23.1%。HBsAg（+）標本（第1～6組）共339例，HBV-DNA陽性率為79.4%，HBsAg（-）標本（第7～13組）共202例，HBV-DNA陽性率0.0%。

HBeAg（+）標本與HBeAg（-）標本比較，差異有統計學意義（P＜0.01），二者HBV-DNA的平均含量差異有統計學意義（P＜0.01）。HBsAg（+）標本與HBsAg（-）標本比較，差異有統計學意義（P＜0.01），二者HBV-DNA的平均含量差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1 血清HBV-M模式和HBV-DNA的FQ-PCR檢測結果Table 1 The result between HBV-M and HBV-DNA FQ-PCR

3 討 論

HBV感染的病原學診斷主要依靠免疫血清學方法檢測HBV-M和分子生物學方法檢測HBVDNA。HBV-M主要反映HBV的免疫狀態，而HBV-DNA是病毒復制活動最直接和可靠的標志，也是HBV感染最為直接的證據［2］。

HBsAg是診斷HBV感染最靈敏、最常用的血清學標志物［3］。HBeAg與HBV-DNA具有非常高的相關性，是判斷HBV復制的良好指標，HBV-DNA檢出率最高（100.0%），而且測定均值也最高，HBV-DNA與HBeAg存在明顯正相關，提示病毒復制活躍，傳染性強，這也同樣說明存在 HBeAg是HBV復制活躍的標志。小三陽組雖然HBeAg陰性，但病毒并沒有停止復制，只是復制減緩或部分患者出現病毒基因變異。這樣的感染更易對患者造成傷害，嚴重者可發展為肝硬化或肝癌［4］。HBsAg陽性而HBcAb陽性的HBV感染者中，HBV-DNA陽性的原因可能是HBV前C信號肽裂解位點變異后影響HBeAg的翻譯后加工，導致大量的HBeAg前體在細胞中蓄積，這可能導致 HBV感染者血清HBeAg陰性，并改變病毒致病力［5］。在第 5組HBsAg，HBsAb陽性的7例患者中有2例HBVDNA陽性，檢出率為29.9%，可能是其他血清標志物濃度太低而免疫法未檢出。在第6組只有HBsAg陽性的5例患者中有1例HBV-DNA陽性，檢出率為20.0%，這可能是HBV活躍的早期，血清中其他標志物還沒有出現，因此也有傳染的可能性。在第7～8組中，均未檢出HBV-DNA，說明是既往感染或注射乙肝疫苗所致，HBV的復制受到較大程度的抑制，一般無傳染性。在第9～13組中，均未檢出HBV-DNA，可能是由于樣本數量較小或檢測方法、檢測試劑、檢測儀器靈敏度的差異等原因，從而導致這些表現模式的檢出率低［6］。

綜上所述，HBV-DNA定量測定是反映機體病毒復制狀況的最敏感、特異的指標，而HBV-M則反映病毒感染后引起機體免疫應答的狀況及轉歸過程［7］。HBV-DNA檢測和血清學指標是互補共存關系，PCR技術與ELISA法技術的聯合應用，在研究病毒感染量與臨床病情的關系、評價和監測抗病毒藥物療效等方面具有重要指導作用。

［1］ 劉珍，陳建琳，唐兆武，等.2407例7月～12月齡兒童乙肝抗體滴度水平研究報告［J］.中國衛生檢驗雜志，2011，21（2）：499-500.

［2］ 謝建紅，肖奇志，田芬，等.HBV血清學標志物結合HBVDNA定量檢測臨床研究［J］.臨床和實驗醫學雜志，2011，10（3）：192-193.

［3］ 王曉東，李秀全，李鳳煥，等.慢性乙肝血清標志物與HBV DNA水平的關系［J］.國際檢驗醫學雜志，2006，27（12）：1070-1072.

［4］ 唐玫芳.乙型肝炎病毒DNA與血清標志物的關系［J］.檢驗醫學與臨床雜志，2010，7（1）：28-29.

［5］ HONDA A，YOKOSUKA O，SUZUKI K，et al.Detection of mutations in hepatitis B virusenhancer 2/core promoter and X protein regions in patients with fatal hepatitis B virus infection［J］. J Med Virol，2000，62（2）：167-176.

［6］ 李云，夏正武，瞿良.乙型肝炎血清學標志物與HBV DNA相關性分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2011，32（4）：442-443.

［7］ 成軍，孫長貴，王國政，等.HBsAg陽性血清HBV DNA與HBV標志物定量測定的相關性特征［J］.國際檢驗醫學雜志，2007，28（5）：385-387.

（本文編輯：趙麗潔）

THE ANALYSIS OF TEST RESULT BETWEEN VIRUS SERUM MARKERS AND NUCLEIC ACID OF HEPATITIS B VIRUS

LI Yawei，ZHANG Zheng，SUN Jingna，ZHAO Xiaojie，ZHAO Shuai，DAI Lili
（Department of laboratory，the first hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050031，China）

ObjectiveTo investigate the relationship between the level of hepatitis B virus（HBV）DNA and serum markers.MethodsFluorescent quantitative polymerase chain reaction（FQPCR）was used to detect the contents of serum HBV-DNA in 649 patients infected HBV and enzyme linked immuno sorbent assay（ELISA）was used to detect the immunological markers.ResultsThe positive rate of HBV-DNA was 100.0%in the hepatitis B e antigen（HBeAg）positive group.There was significant difference between HBeAg positive group and negative group（P＜0.01）.The positive rate of HBV-DNA was also significantly different between the hepatitis B s antigen（HBsAg）positive group and negative group（P＜0.01）.ConclusionThe positive rate of serum HBV-DNA is related to the mode of serum HBV markers.The result of serum HBV-DNA detected by FQ-PCR can reflect the replication of hepatitis B virus more correctly and directly.

hepatitis B；DNA；diagnostic tests，routine

R512.62

A

1007-3205（2012）09-1032-03

2012-01-13；

2012-03-16

李亞威（1979-），女，河北河間人，河北醫科大學第一醫院主管檢驗師，醫學學士，從事分子生物學研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.015