重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR表達(dá)的觀察

孫海英，邵曉麗，劉淑梅，郭 平，周國忠，陳 溢

（1.浙江省紹興縣婦幼保健所兒童保健科，浙江紹興 312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院兒科，浙江紹興 312000；3.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江紹興 312000）

·論 著·

重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR表達(dá)的觀察

孫海英1，邵曉麗2*，劉淑梅2，郭 平2，周國忠3，陳 溢2

（1.浙江省紹興縣婦幼保健所兒童保健科，浙江紹興 312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院兒科，浙江紹興 312000；3.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江紹興 312000）

目的通過研究重癥肺炎支原體肺炎患兒靜脈血CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR（human leukocyte antigen DR，HLA-DR）表達(dá)百分率的變化，評價患兒的免疫狀態(tài)及與疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后的關(guān)系。方法選擇重癥肺炎支原體肺炎患兒共65例，以臨床肺部感染評分（clinical pulmonary infection score，CPIS）≥6分為CPIS高分組共21例，CPIS＜6分為CPIS低分組共44例；正常對照組30例。重癥MPP患兒入院后第1天及出院當(dāng)日抽取靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率，并記錄入院當(dāng)天的CPIS。結(jié)果重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)CPIS高分組和CPIS低分組均明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且CPIS高分組低于CPIS低分組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；2組治療后恢復(fù)期CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)均明顯升高（P＜0.01）。結(jié)論重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)持續(xù)低下提示患兒處于免疫抑制狀態(tài)。檢測CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)可用于判斷肺炎支原體肺炎患兒病情的嚴(yán)重程度和評估預(yù)后。

肺炎，支原體；抗原，CD14；兒童

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）感染導(dǎo)致的肺炎，已成為學(xué)齡期兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見原因。目前重癥患兒增多，導(dǎo)致多臟器功能損害，引起國內(nèi)外學(xué)者的重視。近年來的研究證實(shí)，免疫功能紊亂在MPP的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［1］。CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）表達(dá)百分率是用于免疫功能抑制的指標(biāo)之一［2］。本研究通過觀察MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率及臨床肺部感染評分（clinical pulmonary infection score，CPIS），評價CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率與疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象：2008年1月—2011年10月我院收治的MPP患兒共65例，男性42例，女性23例，年齡3～8歲，平均（5.8±1.1）歲。根據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版 MPP診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，病程早期采用PCR法檢測患兒咽拭子標(biāo)本中MP-DNA陽性，且發(fā)病1周后血清MP-IgM陽性，急性期抗體滴度≥1∶80，或恢復(fù)期較急性期抗體滴度升高4倍及以上為陽性；臨床符合MPP，無其他病原感染的臨床及實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。因目前重癥MPP尚無統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)，本文參考一般的表現(xiàn)及重癥支氣管肺炎的診斷，將病情重或出現(xiàn)嚴(yán)重肺外并發(fā)癥，或單用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周無反應(yīng)，或病程超過6周仍遷延不愈的，視為重癥［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)如下。①患有肺結(jié)核等其他傳染病患兒；②近期有糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑使用史；③有使用糖皮質(zhì)激素的禁忌證；④合并細(xì)菌、病毒、衣原體等其他病原體感染；⑤病程中需要用激素或其他免疫調(diào)節(jié)劑者。其中CPIS≥6分為CPIS高分組（21例），CPIS＜6分為CPIS低分組（44例）。選擇年齡相匹配在我院體檢的健康兒童30例為正常對照組，均無近期感染，無個人及家族過敏及其他變態(tài)反應(yīng)性疾患史，其中男性17例，女性13例，年齡3～7歲，平均（5.1±1.7）歲。CPIS高分組、低分組及正常對照組3組間性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 治療原則：常規(guī)抗感染，吸痰叩背、臟器功能支持、霧化吸入、營養(yǎng)代謝支持及維持水、電解質(zhì)、酸堿平衡等對癥支持治療，避免使用皮質(zhì)激素等影響免疫功能的藥物。

1.3 檢測方法：上述重癥MPP患兒入院后24h內(nèi)抽取外周靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率。靜脈血用乙二胺四乙酸抗凝。取實(shí)驗(yàn)管加入 10μL異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記小鼠抗人CD14抗體、10μL LPE標(biāo)記小鼠抗人HLA-DR抗體。對照管加入等體積FITC、PE標(biāo)記同型小鼠IgG（FITC標(biāo)記小鼠抗人CD14抗體、PE標(biāo)記小鼠抗人HLA-DR抗體及相應(yīng)的同型小鼠免疫球蛋白均為美國BeckmanCoulter公司產(chǎn)品）。再向試管加50μL抗凝靜脈血，混勻，室溫下避光孵育15min，應(yīng)用Coulter Q-PREP溶血儀溶血后，避光儲存待測。檢驗(yàn)標(biāo)本前應(yīng)用Coulter公司標(biāo)準(zhǔn)液校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter公司Coulter EPICSXL型）使流量系數(shù)（volume cofficient，CV）值在2%以內(nèi)。檢測時每管收集100 000個細(xì)胞，分別記錄CD14+單核細(xì)胞中HLA-DR的陽性率。與此同時，計(jì)算出并記錄當(dāng)天的CPIS。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以±s表示，各指標(biāo)變化的組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

入院當(dāng)天CPIS高分組與低分組CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均低于正常對照組，且CPIS高分組低于低分組（P＜0.05）。治療后，CPIS高分組和低分組CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均升高，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 重癥MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)變化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

表1 重癥MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)變化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

*P＜0.01 vs normal control group #P＜0.01 vs CPIS high group△P＜0.01 vs before treatment by q testHLA-DR：human leukocyte antigen DR；CPIS：clinical pulmonary infection score

HLA-DR Before treatment Recovery phase CPIS high 21 35.09±8.97* 68.20±6.03 Groups n△CPIS low 44 52.42±9.67*# 68.89±11.51△Normal control 30 75.13±11.43 75.13±11.43 F＜0.01 ＜0.05 101.20 3.85 P

3 討 論

MPP是兒童的常見病和多發(fā)病，重癥MPP表現(xiàn)為起病急，以劇烈咳嗽、氣喘起病，并很快出現(xiàn)發(fā)熱和呼吸困難，肺外并發(fā)癥多見，肺部病變嚴(yán)重，可合并肺膿腫、大量胸腔積液、壞死性肺炎以及閉塞性支氣管炎或閉塞性毛細(xì)支氣管炎等［5］。迄今MPP發(fā)病機(jī)制還不十分清楚。1996年Bone等［6］針對感染或創(chuàng)傷時導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的內(nèi)源性抗炎反應(yīng)，提出了代償性抗炎癥反應(yīng)綜合征。重癥MPP可能并不像以往所認(rèn)為的是“過度炎癥反應(yīng)”，更多的可能是由于“過度抑制”導(dǎo)致機(jī)體“免疫系統(tǒng)發(fā)生故障”，不能清除病原體所致［7］。

單核細(xì)胞作為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞之一，參與其中每個過程，有著不可或缺的作用。它的功能變化在一定程度上反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。CD14+單核細(xì)胞HLA-DR是單核吞噬細(xì)胞表面的抗原表達(dá)，其功能是把經(jīng)單核吞噬細(xì)胞吞噬并處理后的抗原提呈給T輔助細(xì)胞，繼而激活包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞在內(nèi)的所有免疫細(xì)胞，所以，足夠的HLA-DR表達(dá)對于特異性免疫和非特異性免疫功能都十分重要。

當(dāng)前，檢測免疫功能的方法很多，但能夠作為定量的診斷免疫抑制的檢查，目前首推CD14+單核細(xì)胞的HLA-DR。Venet等［8］證明，以CD14+單核細(xì)胞HLA-DR＜30%為閾值能夠可靠地篩選出膿毒癥免疫抑制的患者。他們發(fā)現(xiàn)，燒傷后發(fā)生膿毒癥患者HLA-DR＜30%或持續(xù)降低超過5d患者病死率及膿毒血癥發(fā)生率遠(yuǎn)高于對照組。本研究結(jié)果顯示，重癥 MPP患兒的外周血 CD14+單核細(xì)胞的HLA-DR表達(dá)率明顯低于正常對照組，臨床表現(xiàn)為病情重或出現(xiàn)嚴(yán)重肺外并發(fā)癥，或單用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周無反應(yīng)等。提示CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)持續(xù)低下的患兒處于免疫抑制狀態(tài)，易發(fā)生持續(xù)且嚴(yán)重的感染。

CPIS最早由Pugin提出，它將胸部X線片以及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果和臨床相結(jié)合，用于評估肺部感染嚴(yán)重程度，分值越高提示肺部感染越重［9］。本研究結(jié)果顯示，重癥 MPP中外周血 CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)水平可反映重癥MPP患者肺部感染程度，CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)水平越低，肺部感染程度越重。與Gogos等［10］的研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示，治療后患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均明顯升高，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與文獻(xiàn)報(bào)道一致［11］。說明CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)可用于判斷MPP患兒病情的嚴(yán)重程度，并在重癥MPP的發(fā)生發(fā)展和疾病轉(zhuǎn)歸中起重要作用。

［1］ CHUNG HL，SHIN JY，JU M，et al.Decrased interleukin-18 response in asthmatic children with severe mycoplasma pneumoniae pneumonia［J］.Cytokine，2011，54（2）：218-221.

［2］ POSCHKE I，MOUGIAKAKOS D，HANSSON J，et al.Immature immunosuppressive CD14+HLA-DR-/low cells in melanoma patients are Stat3hi and overexpress CD80，CD83，and DC-sign［J］.Cancer Res，2010，70（11）：4335-4345.

［3］ 胡亞美，江載芳.諸福棠實(shí)用兒科學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1204-1205.

［4］ 趙順英，馬云，張桂芳，等.兒童重癥肺炎支原體肺炎11例臨床分析［J］.中國實(shí)用兒科雜志，2003，7（18）：414-416.

［5］ YOUN YS，LEE KY.Mycoplasma pneumoniae pneumonia in childeren［J］.Korean J Pediatr，2012，55（2）：42-47.

［6］ BONE RC.Immunologic dissonance：a continuing evolution in our understanding of the systemic inflammatory response syndrome（SIRS）and the multiple organ dysfunction syndrome（MODS）［J］.Ann Intern Med，1996，125（8）：680-687.

［7］ MUNETA Y，MINAGAWA Y，SHIMOJI Y，et al.Immune response of gnotobiotic piglets against Mycoplasma hyopneumoniae［J］.J Vet Med Sci，2008，70（10）：1065-1070.

［8］ VENET F，TISSOT S，DEBARD AL，et al.Decreased monocyte human leukocyte antigen-Drexpression after severe burn injury：Correlation with severity and secondary septic shock［J］.Crit Care Med，2007，35（8）：1910-1917.

［9］ BHADADE RR，DE SOUZA RA，HARDE MJ，et al.Clinical characteristices and outcomes of patients with acute lung injury and ARDS［J］.J Postgrad Med，2011，57（4）：286-290.

［10］ GOGOS C，KOTSAKI A，PELEKANOU A，et al.Early alterations of the innate and adaptive statuses in sepsis according to the type of underlying infection［J］.Crit Care，2010，14（3）：R96.

［11］ HUANG SW，CHEN J，OUYANG B，et al.Immunotherapy improves immune homeostasis and increases survial rate of septic patients［J］.Chin J Traumatol，2009，12（6）：344-349.

（本文編輯：劉斯靜）

OBSERVATION OF THE EXPRESSION OF CD14+MONOCYTE HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN DR IN SEVERE MYCOPLASMA PNEUMONIAE PNEUMONIA

SUN Haiying1，SHAO Xiaoli2*，LIU Shumei2，GUO Ping2，ZHOU Guozhong3，CHEN Yi2
（1.Department of Pediatrics，Shaoxing County Maternity and Child Care Centers，Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China；2.Department of Pediatrics，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China；3.Department of Medical Molecular Biology，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

ObjectiveTo monitor the change of the expression of CD14+monocyte human leukocyte antigen DR（HLA-DR）in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children and evaluate their immunological condition，relationship between severity of illness，prognosis and CD14+monocyte HLA-DR.MethodsSixth-five cases of severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children were collected and divided into the following groups，total 44 cases with clinical pulmonary infection score（CPIS）≥6 were CPIS high grade；total 21 cases with CPIS＜6 were CPIS low grade，and 30 normal cases were selected as control group.The levels of venous blood CD14+monocyte HLA-DR were detected at the first day after admission and discharge.The CPIS grade of the patients was recorded at the first day after admission.ResultsThe levels of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia were obviously lower no matter in CPIS high grade and in CPIS low grade than normal cases with statistically significant differences（P＜0.01），and the level in CPIS high grade waslower than the CPIS low grade（P＜0.01）.The levels of CD14+monocyte HLA-DR in the 2 groups were increased significantly after treatment（P＜0.01）.ConclusionPersistent low level of the expression of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia indicate the patients are in the states of immunosuppression.Detection of the expression of CD14+monocyte HLADR can be used to evaluate the severity of disease and predict prognosis in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia.

pneumonia，mycoplasma；antigens，CD14；child

R563.1

A

1007-3205（2012）09-1021-04

2012-01-30；

2012-04-28

孫海英（1977-），女，浙江紹興人，浙江省紹興縣婦幼保健所主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事小兒呼吸內(nèi)科疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail：nuannuan717@126.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.011