缺血性腦血管病患者MPO的表達水平與頸動脈粥樣硬化斑塊類型及HCMV相關性研究

孔偉麗，谷聚賢，何俊瑛*，高玉林

（1.河北省定州市人民醫院神經內科，河北定州 071500；2.河北醫科大學第二醫院神經內科，河北石家莊 050000）

·論 著·

缺血性腦血管病患者MPO的表達水平與頸動脈粥樣硬化斑塊類型及HCMV相關性研究

孔偉麗1，谷聚賢2，何俊瑛2*，高玉林2

（1.河北省定州市人民醫院神經內科，河北定州 071500；2.河北醫科大學第二醫院神經內科，河北石家莊 050000）

目的探討髓過氧化物酶（marrow peroxide，MPO）與頸動脈粥樣硬化斑塊類型及人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）激活感染的相關性。方法研究對象選擇符合入選條件的患者84例，均行外周血白細胞HCMV-PP65、頸動脈超聲、血清MPO檢查，比較不同斑塊類型組HCMV-PP65、血清MPO的差別，并比較PP65陽性組與陰性組中血清MPO的差別。結果不穩定斑塊組HCMV-PP65陽性率（56.76%）明顯高于穩定斑塊組（30.30%）；HCMV-PP65陽性組MPO平均含量（132.63±5.44）μg/L高于陰性組（92.55±5.39）μg/L；有斑塊組MPO平均含量（112.09±9.13）μg/L高于無斑塊組（87.32±8.29）μg/L，不穩定斑塊組MPO平均含量（146.91±9.56）μg/L高于穩定斑塊組（73.04±9.92）μg/L；PP65陽性病例中，有斑塊組MPO平均含量（138.34± 13.55）μg/L高于無斑塊組（92.53±1.76）μg/L，不穩定斑塊組MPO平均含量（170.50±11.36）μg/L高于穩定斑塊組（93.32±2.67）μg/L；以上差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論不穩定頸動脈粥樣硬化斑塊者HCMVPP65陽性率顯著高于穩定斑塊者，HCMV激活感染在動脈粥樣硬化形成中起著重要作用，HCMV激活感染可促進MPO的表達，且有促使斑塊不穩定的傾向，HCMV、MPO、AS之間存在相關性。

動脈粥樣硬化；頸動脈狹窄；過氧化物酶

多數缺血性腦血管病患者伴有動脈粥樣硬化，因此積極尋找動脈粥樣硬化的病因并開展針對性的防治是臨床迫切需要解決的難題。近年來多項研究［1-2］表明微生物感染，尤其人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）激活感染與動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）緊密相關，HCMV激活感染所引起的炎癥和免疫反應可能在AS的發生和發展中起著重要作用。本研究通過測定入選受試者的外周血HCMV晚期抗原PP65以及對受試者進行頸動脈超聲檢查以確定頸AS斑塊類型，并檢測血清髓過氧化物酶（marrow peroxide，MPO）含量，探討HCMV激活感染與不同類型的頸部斑塊尤其是易損性斑塊的相關性，并進一步研究受試者外周血中HCMVPP65及血清MPO與不同類型斑塊的相關性，探討HCMV激活感染后誘發AS斑塊形成及破裂的分子機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象：2008年3月—2009年12月河北醫科大學第二醫院神經內科門診和住院患者84例，男性61例，女性23例，年齡30～75歲，平均（53.77± 8.63）歲。入選標準如下。①符合1995年全國第4屆腦血管病會議制定的腦梗死的診斷標準，并經頭顱CT或MRI證實為腦梗死。②起病在6h～7d內，病情仍進行性加重。③病史中有短暫性腦缺血發作史。④頸動脈超聲提示頸總動脈和（或）頸內動脈有狹窄或閉塞，多發AS斑塊形成。⑤頭MRA提示顱內頸內動脈或椎基底動脈等重要動脈狹窄或閉塞。患者符合第1或第3條加上2、4、5條中的1條即可入選。排除標準如下。①腦出血。②糖尿病。③原發性高血壓控制不達標、繼發性高血壓。④心肌病、心功能Ⅱ級或以上。⑤血液系統疾病。⑥肝、腎功能不全。⑦近期感染史。⑧長期服用避孕藥、妊娠、哺乳期。⑨酗酒。⑩腫瘤。

1.2 超聲檢查：應用飛利浦IU-22型彩色多普勒超聲診斷儀，選取線陣探頭，頻率5～12MHz，觀察并記錄以管腔內膜面到中層與外膜交界處的垂直距離有無粥樣硬化斑塊及其部位、大小、回聲強度和表面特征。

1.3 斑塊類型判定：參照改良的Hennerici分類法［2］。本研究根據斑塊穩定程度將扁平斑、軟斑、混合斑納入不穩定斑塊組（37例），硬斑及內膜增厚納入穩定斑塊組（33例），而潰瘍斑和斑塊內出血這2種類型則由于技術條件所限暫不考慮在本試驗組內。

1.4 外周血白細胞HCMV-PP65抗原的測定：抽取空腹靜脈血2mL，2%乙二胺四乙酸二鈉抗凝，分離血漿及多形核白細胞，將白細胞懸液滴到APES玻片上，37℃溫箱烘干，加入鼠抗人HCMV一抗（丹麥DAKO公司），孵育40min后加入羊抗鼠二抗（上海基因生物科技有限公司），孵育30min后二氨基聯苯胺顯色10min，蘇木素復染，日本 OLYMPUS BX-41光學顯微鏡下計數陽性細胞數（以每5萬個白細胞中的陽性細胞數計算）。陽性細胞胞漿或胞核為棕黃色，陰性細胞為均勻一致的藍紫色，陽性細胞數＞1/50 000判為PP65抗原陽性。

1.5 血清MPO的檢測：MPO試劑盒由美國R&D公司生產，嚴格按照說明書操作步驟進行。

1.6 統計學方法：應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計量資料±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以百分率表示，組間比較采用 χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同AS斑塊類型HCMV-PP65陽性率比較：84例中頸動脈超聲提示無斑塊形成14例，其中HCMV-PP65陽性5例（35.71%）；穩定性粥樣硬化斑塊形成33例，其中HCMV-PP65陽性10例（30.30%）；不穩定性斑塊形成37例，其中HCMVPP65陽性 21例（56.76%）。不穩定性斑塊HCMV-PP65陽性率明顯高于穩定性斑塊（χ2= 4.927，P＜0.05），見表1。

表1 不同動脈粥樣硬化斑塊類型HCMV-PP65陽性率比較Table 1 Postive rate of HCMV-PP65 in differentty Pes of atherosclerosis Plaques（n）

2.2 HCMV-PP65陽性及陰性組MPO平均含量比較：HCMV-PP65陽性及陰性組中MPO平均含量分別為（132.63±5.44）、（92.55±5.39）μg/L，2組含量差異有統計學意義（t=28.153，P＜0.05）。

2.3 不同AS斑塊類型組MPO平均含量比較：有斑塊組、無斑塊組MPO平均含量分別為（112.09± 9.13）、（87.32±8.29）μg/L，有斑塊組MPO平均含量高于無斑塊組，差異有統計學意義（t=9.897，P＜0.05）。不穩定斑塊組、穩定斑塊組MPO平均含量分別為（146.91±9.56）、（73.04±9.92）μg/L，不穩定斑塊組MPO平均含量高于穩定斑塊組，差異有統計學意義（t=30.204，P＜0.05）。

2.4 HCMV-PP65陽性患者中不同AS斑塊類型MPO含量比較：HCMV-PP65陽性患者中，在有斑塊組、無斑塊組MPO平均含量分別為（138.34± 13.55）、（92.53±1.76）μg/L，HCMV-PP65陽性患者有斑塊組MPO平均含量高于無斑塊組，差異有統計學意義（t=9.786，P＜0.05）。不穩定斑塊組、穩定斑塊組MPO平均含量分別為（170.50±11.36）、（93.32±2.67）μg/L，HCMV-PP65陽性患者不穩定斑塊組MPO平均含量高于穩定斑塊組，差異有統計學意義（t=54.874，P＜0.05）。

3 討 論

AS是缺血性腦卒中最重要的病因和危險因素，因此尋找其發病機制，采取措施進行積極防治可從根本上降低缺血性腦卒中的發病率，研究發現炎癥反應參與AS的發生、發展，導致斑塊形成及不穩定化，多種炎性相關蛋白出現在斑塊局部［3-4］，推測微生物激活感染及其導致的炎癥及免疫反應可能是動脈粥樣硬化發生發展及導致斑塊不穩定的主要因素，本研究結果顯示，不穩定斑塊組HCMV-PP65陽性率高于穩定斑塊組及無斑塊組，有斑塊組MPO平均含量高于無斑塊組不穩定斑塊組MPO平均含量高于穩定斑塊組。所得出的結論均與文獻報道一致［5-6］。

HCMV感染人體后可于機體多種組織細胞內處于潛伏感染狀態，最主要的包括動脈血管內皮及內膜下平滑肌組織，當機體由于各種原因如使用甾體激素、進行免疫抑制治療及免疫功能降低狀態下時，病毒潛伏狀態轉變為激活感染狀態，復制形成大量完整的病毒。HCMV-PP65是一種重要的晚期抗原，HCMV活動性感染時HCMV-PP65表達于外周血單核細胞、中性多形核白細胞和血管內皮細胞中。1995年斯德哥爾摩國際巨細胞病毒感染學術會議上首次肯定PP65的價值，現已成為國際公認的診斷HCMV活動性感染的標準方法之一［7］。

HCMV感染可以導致包括MPO等一系列炎性因子的表達上調，使內皮細胞受損，其過程為單核細胞進入動脈壁的內膜下間隙，激活并分化為巨噬細胞；MPO能夠促進一氧化氮作為一種底物而消耗，從而限制其生物利用度，并通過跨細胞作用積蓄于內皮下間隙，干涉一氧化氮對血管壁的擴張作用及抗炎癥功能，此外損傷的內膜也有利于單核-巨噬細胞浸潤入內皮下，吞噬脂質形成泡沫細胞，MPO可刺激內皮細胞的炎癥反應加速 AS的進展［8-9］。本研究中，PP65陽性組MPO平均含量與陰性組差異有統計學意義，而且HCMV-PP65陽性有斑塊組MPO平均含量高于無斑塊組，不穩定斑塊組MPO平均含量高于穩定斑塊組。證實了人巨細胞病毒激活感染促進MPO的表達，進而促使AS的進展并使斑塊趨向不穩定。

大量的試驗研究［10］證明，AS的形成過程是一個穩定和不穩定周期交替的過程，而這種轉化則通過斑塊的易損性來決定。早有研究證實，對斑塊破裂起決定作用的是斑塊的穩定性，而非斑塊所致的血管腔的狹窄程度，軟斑患者較混合斑患者體內炎癥水平更高，新生血管網更豐富，且越不穩定，發生腦血管事件的幾率更高，AS的穩定程度是通過包括其自身組成形狀、炎癥細胞浸潤、細胞因子和斑塊內壓等多種因素協同作用的結局，目前已知局部炎癥細胞的浸潤以及全身急性炎癥是導致斑塊易損破裂的最主要原因之一［11］。斑塊內的炎性細胞浸潤及其一系列炎性產物的產生使得動脈硬化的血管中微血管網異常豐富，同時它們甚至可延伸至動脈硬化損傷處的內膜中，對粥樣斑塊內脂質中心的增大、纖維組織完整性的損傷及細胞外基質的降解均發揮著顯著的作用，并由此加重內膜損害，纖維帽變薄，導致斑塊內出血，是造成斑塊不穩定、斑塊破裂的重要促發因素。本研究中，MPO平均含量在有、無斑塊組分別為112.09μg/L、87.32μg/L，2組比較差異有統計學意義，提示高水平的MPO可促使粥樣硬化斑塊的形成；不穩定斑塊組MPO平均含量高于穩定斑塊組，提示斑塊種類不同，MPO的表達程度不同；而在人巨細胞激活感染狀態下，MPO在有、無斑塊分組及不穩定斑塊組、穩定斑塊組的比較含量差異有統計學意義，說明了人巨細胞激活感染引起的炎癥反應、MPO的表達上調及斑塊穩定程度之間存在正相關性。

綜上所述，HCMV激活感染在AS形成中起著重要作用，HCMV激活感染可促進MPO的表達，且有促使斑塊不穩定的傾向，HCMV、MPO、AS之間存在相關性，且HCMV感染引起的炎癥反應在AS的發生和發展中起著重要作用，研究HCMV激活感染及繼發的免疫反應和炎癥反應將為AS的防治提供新的方法。

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（本文編輯：劉斯靜）

A STUDY ON THE HCMV AND MPO IN ISCHEMIC CEREBROVASCULAR DISEASE PATIENTS WITH DIFFERENT TYPE OF ATHEROSCLEROTIC PLAQUES

KONG Weili1，GU Juxian2，HE Junying2*，GAO Yulin2
（1.Department of Neurology，the People′s Hospital of Dingzhou City，Hebei Province，Dingzhou 071500，China
2.Department of Neurology，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

Objective Tostudytherelationship between thetypeofcarotid artery artherosclerotic plaque，activated infection of human cytomegalovirus（HCMV）and marrow peroxide（MPO）.MethodsThe investigation subjects were 84 selected patients which was complied with the conditions，all of the patients conduct ultrasound of arteria carotid，HCMV-PP65 of peripheral blood leucocyte and MPO were examined in all the patients.The differences of HCMV-PP65，MPO in the patients with different kinds of plaques were compared，furthermore the differences of MPO between PP65 positive and negative paitents were compared.ResultsDifferent plaques had different HCMV-PP65 postive rate，in the instable plaques was 56.76%，it was obviously higher than the stable ones（30. 30%）.The average contents of MPO were（132.63±5.44）μg/L in HCMV-PP65 positive group and（92.55±5.39）μg/L in negtive one.The average content of MPO in plaque group was（112.09±9.13）μg/L，with（87.32±8.29）μg/L in no-plaque group.The average content of MPO in instable-plaque group was（146.91±9.56）μg/mL，with（73.04±9.92）μg/L in stable-plaque group.In the positive cases，the average content of MPO in plaque group was（138.34±13.55）μg/L，with（92.53±1.76）μg/L in no-plaque group.The average content of MPO in instable-plaque group was（170.50± 11.36）μg/L，with（93.32±2.67）μg/L in stable-plaque group，all above of the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe HCMV-PP65 postive rate in the instable plaques is obviously higher than the stable ones and the HCMV active infection plays an important role in the atherosclerosis（AS），HCMV active infection may promote the expression of MPO，and there is a tendency to promote plaque instability.There are correlations among HCMV，MPO and AS.

atherosclerosis；carotid stenosis；peroxidase

R743

A

1007-3205（2012）09-1004-04

2011-11-10；

2012-04-15

河北省科技廳重點攻關項目（032761990）

孔偉麗（1977-），女，河北博野人，河北省定州市人民醫院主治醫師，醫學碩士，從事腦血管病疾病及中樞神經系統感染性疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail：hejunyingqqq@yahoo.com.cn

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.005