HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量

蔡 穎

(南京市白下區建中中醫院，江蘇 南京 210004)

小兒肺熱咳喘口服液是由黃芩、連翹、金銀花、麻黃等十一味中藥組成，具有清熱解毒，宣肺化痰的功效。用于風寒感冒，胸悶咳喘，支氣管炎等癥［1］，其主要有效成分為麻黃堿、偽麻黃堿、苦杏仁苷﹑黃芩苷﹑綠原酸和連翹苷、連翹酯苷A。現文獻報導有對其中麻黃堿、偽麻黃堿、苦杏仁苷、黃芩苷等成分的測定［1～4］，沒有連翹的含量研究。本文采用HPLC法同時測定小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP－1100高效液相色譜議(美國 Agilent公司)，包括四元梯度，DAD紫外可見檢測器，Agilent Chem－Station色譜工作站(Agilent科技有限公司)，自動進樣器;Mettl ER220電子天平(美國，梅特勒公司)，SG1200H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器廠)，DL－1溶劑過濾器(天津市東康科技有限公司)。

1.2 試藥 連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，編號:110736－200629);連翹酯苷A對照品(上海詩丹德生物技術有限公司提供，純度98%編號:11－091125);小兒肺熱咳喘口服液由黑龍江葵花藥業股份有限公司 提 供 (批 號 為:201103115、201104006、201106030、201108012、201110112、201111018)。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Phenomenex Lunas C18(4.6mm×250mm，5μm);流動相:甲醇 －0.2% 磷酸溶液梯度洗脫，流動相A 0.2%磷酸溶液，流動相B甲醇，梯度洗脫順序:0～12min 15% ～30%B，12～30min 30% ～40%B，30～40min 40% ～35%B，40～60min 50% ～37%B:流速 1.0mL·min－1;柱溫:30 ℃;檢測波長:280 nm。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取連翹苷和連翹酯苷A對照品適量，用50%甲醇制成每1mL含連翹苷30.3 μg連翹酯苷A 1.98 μg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取小兒肺熱咳喘口服液1.0mL置，50mL量瓶中精密加入50%甲醇至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 分別取對照品溶液，供試品溶液，按小兒肺熱咳喘口服液的處方比例和生產工藝制備成缺連翹的陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結果見圖1。結果表明在連翹苷和連翹酯苷A相同的保留時間處基本無色譜峰。說明陰性制劑對所測組分無干擾。

2.2.4 線性關系考察 精密吸取各對照品溶液1、2、4、8、10、12、18μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值Y對對照品進樣量X進行處理，繪制標準曲線，得回歸方程為:連翹苷 Y=5.1136 ×102X+1.4126，r=0.9995;連翹酯苷 A Y=4.1426 ×102X+6.3241，r=0.9996。結果表明，在上述色譜條件下，連翹苷在 0.0303 ～0.5454 μg;連翹酯苷A在0.0198～0.3564 μg;的范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密量取對照品溶液，按上述色譜條件重復進樣6次測定，結果連翹苷和連翹酯苷A的峰面積分別為 RSD 為1.03%(n=6)、0.7%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件于0、2、4、6、8、12、24 h分別進行測定，結果連翹苷和連翹酯苷A峰面積RSD分別為1.66%、2.01%，表明供試品在24 h內穩定性。

2.2.7 重復性試驗 取同一批號樣品(201103115)，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液各6份，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算連翹苷和連翹酯苷A含量，RSD分別為1.04%、1.65%，表明該方法的重現性良好。

2.2.8 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號為201104006)1.0mL，加入一定量的連翹苷 0.4586mg·mL－1和連翹酯苷A 0.2652mg·mL－1置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各平行操作6份，按2.2.2供試品制備方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件進行分別測定，以外標法計算回收率，結果見表1、2。試驗結果表明，該測定方法回收率良好。

2.2.9 樣品測定 取小兒肺熱咳喘口服液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并按外標法測定連翹苷和連翹酯苷A含量，結果見表3。

表1 連翹苷加樣回收試驗結果(n=6)

表2 連翹酯苷A加樣回收試驗結果(n=6)

表3 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 通過方法學驗證，表明本試驗方法用于小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量測定，分離度好﹑重現性好，可以用于小兒肺熱咳喘口服液的質量控制。

3.2 對供試品提取方法進行了對比分析:①精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻;②精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，經超聲處理(250 W，40 kHz)提取30min，冷卻至室溫。測定兩者峰面積，結果比較，無明顯差異。考慮到方法的簡單，可行性，故選用方法①。

［1］劉譯.RP－HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中黃芩苷的含量［J］.中國藥師，2008，11(10):1213 －1215.

［2］太成梅，那微，趙曉霞，等.HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量［J］，中國藥品標準，2010，11(5):380 －383.

［3］張志根，宋劍峰.RP－HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中黃芩苷的含量［J］.中國民族民間醫藥，2010，19(12):107－108.

［4］趙文明，承偉.RP－HPLC法同時測定小兒肺熱咳喘泡騰顆粒中鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷的含量［J］.沈陽藥科大學學報，2010，27(6):474 －476.

［5］杜英峰.張蘭桐.靳怡然，等.多波長RP－HPLC法測定雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸和連翹苷［J］.中成藥，2009，31(9):1368 －1371.