Skp2在大腸癌大腸腺瘤及正常大腸黏膜中的表達及臨床意義

劉鏡文 魏茂富 楊延莉

[摘要] 目的探討大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白表達的臨床意義。方法采用免疫組化方法,分別檢測大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白的表達。 結(jié)果 大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白表達率分別為76%（57/75）、36.7%（11/30）、16%（4/25），大腸癌與大腸腺瘤、正常黏膜比較，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），大腸腺瘤與正常黏膜比較，差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。Skp2蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中陽性率為92.3%（24/26），明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織67.3%（33/49）, 差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；其表達與其他病理及臨床因素無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。 結(jié)論 Skp2的表達與大腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系,陽性表達對預測大腸癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有指導意義。

[關(guān)鍵詞] Skp2；大腸腺瘤；大腸癌；正常大腸黏膜

[中圖分類號] R735.3+4[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）12-0115-02

大腸癌的死亡原因主要是肝、肺等內(nèi)臟器官的遠處轉(zhuǎn)移，所以抑制腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移是治療大腸癌的重要手段。細胞S期激酶相關(guān)蛋白2（Skp2）屬于F-box蛋白家族，F(xiàn)-box蛋白是泛素蛋白連接酶的組成部分。Skp2可特異識別并降解p27[1]，p27發(fā)生酶解后，誘導細胞從G期進入S期。近年來，腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)Skp2有原癌基因的功能，可以誘導癌細胞從G期進入S期，與多種惡性腫瘤的生成及進展關(guān)系密切 [2]。本實驗旨在研究大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集我院2000年3月～2011年8月大腸癌75例、大腸腺瘤30例、正常大腸黏膜25例。大腸癌患者中,男女比例為40:35，年齡28～82歲，平均59.2歲。其中腺癌WHO Ⅲ級48例，腺癌（WHOⅡ級）22例,腺癌（WHOⅠ級）5例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。腫瘤臨床TNM分期：Ⅰ 期至Ⅳ期分別為11例，29例，25例，10例。

1.2 所用試劑及方法

所用抗體及試劑盒來自基因公司。標本用10%中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,3μm厚度切片,S-P法染色, DAB顯色,蘇木精復染細胞核。

1.3 評估標準

細胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒狀物為陽性。根據(jù)文獻[3]染色強度及陽性細胞數(shù)百分比進行計分。Ⅰ：染色強度：不著色至棕黃色分別為0至3分。Ⅱ：陽性細胞百分比：＜5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分。Ⅰ×Ⅱ＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

統(tǒng)計學處理應(yīng)用SPSS10.0軟件，計數(shù)資料進行χ2檢驗, P ＜ 0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

在大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白表達（圖1、2、3）分別為76%（57/75）、36.7%（11/30）、16%（4/25），大腸癌與大腸腺瘤、正常黏膜對比差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），大腸腺瘤與正常黏膜對比差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。 見表1 。Skp2蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中陽性率為92.3%（24/26）,明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織67.3% （33/49）, 差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；其表達與其他病理及臨床因素無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。見表2 。

3 討論

大量研究表明，腫瘤的發(fā)生具有復雜的分子基礎(chǔ),包括腫瘤抑制基因的滅活或丟失、原癌基因的激活、凋亡調(diào)節(jié)基因和DNA修復功能紊亂及微小RNA調(diào)節(jié)紊亂等。遺傳因素和環(huán)境因素通過影響這些基因的結(jié)構(gòu)和功能導致腫瘤的形成。任何原因?qū)е碌哪[瘤形成,都以細胞周期調(diào)控機制紊亂為最終表現(xiàn)。細胞周期是由細胞周期蛋白和細胞周期蛋白依賴性激酶進行正調(diào)節(jié), 由細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑進行負調(diào)節(jié)。Zhang H [4]在突變的細胞中發(fā)現(xiàn)3種蛋白（命名為p9，p19，p45）能影響Cyclin-CDK2的功能，即Cksl(或Cks2)、Skp1和Skp2。通過注射Skp2抗體或阻斷Skp2的功能，使細胞不能進入S期，所以Skp2的表達改變與細胞周期的調(diào)控相關(guān)。很多實驗表明，腫瘤的惡性程度與Skp2的蛋白表達水平呈正相關(guān)。Latres E[5]研究發(fā)現(xiàn)大鼠腫瘤發(fā)生率上升、生存期縮短與導入Skp2基因相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在大腸癌、大腸腺瘤和正常大腸黏膜中Skp2蛋白表達分別為76%（57/75）、36.7%（11/30）、16%（4/25），大腸癌與大腸腺瘤、正常黏膜對比差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），大腸腺瘤與正常黏膜對比差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。Skp2蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中陽性率為92.3%（24/26），明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織67.3% (33/49), 差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05 ），其表達與其他病理及臨床因素無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。我們認為，Skp2的表達與大腸癌的發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系,陽性表達對預測大腸癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有指導意義。

[參考文獻]

[1]Ungermannova D，Gao YF，Liu XD． Ubiquitination of p27 reguires physicalinteraction with cyelin E and probable phosphate recognition by Skp2[J]．J Biol Chem， 2005，280（34）:30301-30309．

[2]Yokoi S. A novel target gene, SKP2, within the 5p13 amplicon that is frequently detected in small cell lung cancers[J]． Am J Pathol, 2002,161（1）:207-216.

[3]Liu WH, Kaur M, Wang G. Inverse PCR-based RFLP scanning identifies low-level mutation signatures in colon cell and turmors[J]． Cancer Res,2004 ,64（7）:2544-2551.

[4]Zhang H,Kobayashi R,Galaktionov K,et al. P19 Skp1 and p45 Skp2 are essential elements of the cyclin A-CDK2 S phase kinase[J]．Cell， 1995 ,82（6）:915-925.

[5]Latres E，Chiarle R，Agano M． Role of theF-box protein Skp2 in lymphomagenesis[J]． Proc Natl Acad Sci USA, 2001，98(5):2515-2520.

（收稿日期：2011-12-31）